Основният метод на микробиологична диагностика и "златният стандарт" на микробиологията е бактериологичният метод.

Целта на бактериологичния метод се състои в изолиране на чиста култура на причинителя на болестта от изпитвания материал, натрупване на чиста култура и идентифициране на тази култура чрез набор от свойства: морфологични, тинкториални, културни, биохимични, антигенни, чрез наличието на фактори на патогенност, токсигенност и определяне на нейната чувствителност към антимикробни лекарства и бактериофаги.

Бактериологичният метод на изследване включва:

1.Поставяне на тествания материал в хранителни среди

2.изолация на чиста култура

3. идентификация на микроорганизмите (определяне на принадлежността към вида).

Изолирането и идентифицирането на чисти култури от аеробни и анаеробни бактерии включва следните изследвания:

I етап (работа с родния материал)

Цел: получаване на изолирани колонии

1. Предварителната микроскопия дава приблизителна представа за микрофлората

2. Подготовка на материал за изследване

3. Засяване на твърди хранителни среди за получаване на изолирани колонии

4. Инкубация при оптимална температура, най-често 37 ° C, за 18-24 часа

II етап

Цел: получаване на чиста култура

1. Макроскопско изследване на колонии в предавана и отразена светлина (характерно за размер, форма, цвят, прозрачност, консистенция, структура, контур, повърхност на колонии).

2. Микроскопско изследване на изолирани колонии

3. Изпитване за въздушна поносимост (за да се потвърди наличието на строги анаероби в тестовия материал).

4. Сеитбени колонии, характерни за определен вид, върху среда за съхранение на чиста култура или избираеми среди и инкубация при оптимални условия.

Етап III

Цел: идентификация на посветена чиста култура

1. За идентифициране на изолираната култура чрез комплекс от биологични свойства се изследва следното:

Морфология и тинкториални свойства

Културни свойства (естество на растеж върху хранителните среди)

Биохимични свойства (ензимна активност на микроорганизми)

Серологични свойства (антигенни)

Вирулентни свойства (способността да произвеждат патогенни фактори: токсини, ензими, фактори на защита и агресия)

Патогенност за животни

Фаголиза (чувствителност към диагностични бактериофаги)

Антибиотична чувствителност

Други индивидуални свойства

Етап IV (Заключение)

Според изследваните свойства се прави заключение за избраната култура

Първият етап на изследване.Изследването на патологичен материал започва с микроскопия. Микроскопията на цветния естествен материал дава възможност да се определи приблизителният състав на микробния пейзаж на изследвания обект, някои морфологични особености на микроорганизмите. Резултатите от микроскопията на нативния материал до голяма степен определят хода на по-нататъшните изследвания и впоследствие те се сравняват с данните, получени по време на инокулация върху хранителни среди.

При достатъчно съдържание на патогенни микроорганизми в пробата, инокулацията се извършва върху твърда хранителна среда (за да се получат изолирани колонии). Ако в тествания материал има малко бактерии, тогава се извършва инокулация върху течна среда за обогатяване на хранителни вещества. Хранителната среда се избира според изискванията на микроорганизмите.

Отглеждането на микроорганизми е възможно само когато са създадени оптимални условия за техния живот и се спазват правилата за изключване на замърсяване (случайно замърсяване от външни микроби) от тествания материал. Изкуствени условия, които биха изключили замърсяването на културата с други видове, могат да бъдат създадени в епруветка, колба или чаша на Петри. Всички съдове и хранителни среди трябва да са стерилни и след инокулиране на микробиологичен материал, защитени от външно замърсяване, което се постига с помощта на запушалки или метални капачки и капаци. Манипулациите с изпитвания материал трябва да се извършват в зоната на пламък на алкохолна лампа, за да се изключи замърсяването на материала от външната среда, както и да се спазват мерките за безопасност.

Инокулациите на материал върху хранителни среди трябва да се извършват не по-късно от 2 часа от момента на събирането им.

Втори етап на изследване.Проучване на колонии и изолиране на чисти култури. След ден на инкубация, колониите растат върху плочите, с непрекъснат растеж при първия удар, а изолирани колонии на следващия. Колония е натрупване на микроби от един и същи вид, които са израснали от една клетка. Тъй като материалът най-често е смес от микроби, растат няколко вида колонии. Различните колонии се маркират с молив, очертавайки ги с кръг отстрани на дъното и се изследват (Таблица 11). На първо място, колониите се изучават с просто око: макроскопски знаци. Чашата се гледа (без да я отваряте) от долната страна при пропускана светлина, отбелязва се прозрачността на колониите (прозрачна, ако не задържа светлина; полупрозрачна, ако частично задържа светлина; непрозрачна, ако светлината не преминава през колонията), измерете (в мм) размера на колониите. След това колониите се изследват отстрани на капака, отбелязва се формата (правилна кръгла, неправилна, плоска, изпъкнала), естеството на повърхността (гладка, лъскава, тъпа, грапава, набръчкана, мокра, суха, слузеста), цвят (безцветен, оцветен).

Таблица 11. Схема на изследване на колонии

№	Знак	Възможни характеристики на колонията
1.	Формата	Плоска, изпъкнала, куполна, депресирана, кръгла, розетка, звезда
2.	Размер, мм	Голям (4-5 мм), среден (2-4 мм), малък (1-2 мм), джудже (< 1 мм)
3.	Повърхностен характер	Гладка (S-образна форма), грапава (R-образна форма), тънък (M-образна форма), набраздена, неравна, матова, лъскава
4.	цвят	Безцветен, оцветен
5.	прозрачност	Прозрачен, непрозрачен, полупрозрачен
6.	Естеството на краищата	Гладка, назъбена, ресниста, влакнеста, люспеста
7.	Вътрешна структура	Хомогенна, гранулирана, хетерогенна
8.	съгласуваност	Вискозен, тънък, ронлив
9.	Емулгиране в капка вода	Добро Лошо

Забележка: 5-7 точки се изследват при ниско увеличение на микроскопа.

Още по-добре можете да видите разликите между колониите, когато се гледа с увеличение. За да направите това, поставете затворена чаша с главата надолу на сцената, леко спуснете кондензатора, използвайте малко увеличение на лещата (x8), преместете чашата, изучете микроскопичните характеристики на колониите: естеството на ръба (равномерно, вълнообразно, назъбено, гребено), структура (хомогенна, гранулирана, влакнести, хомогенни или различаващи се в центъра и периферията).

След това се изучава морфологията на микробните клетки от колониите. За това се правят намазки от част от всяка от маркираните колонии, оцветени според Грам. По време на вземането на колонии се обръща внимание на консистенцията (суха, ако колонията се раздробява и се приема с трудност; мека, ако се приема лесно на контур; лигавична, ако колонията се изтегля от контура; твърда, ако част от колонията не се вземе с бримка, може да се отстрани само цялата колония) ...

При изследване на намазки се установява, че колонията е представена от един вид микроби, следователно могат да се изолират чисти култури от бактерии. За да направите това, изследваните колонии се субкултивират на агарен наклон. При повторното повторно преместване от колонии трябва да се внимава да се вземат точно предвидените колонии, без да се докосват примката на близките колонии. Епруветките се подписват и инкубират в термостат при 37 ° С за 24 часа.

Трети етап на изследване.Идентифициране на избраната култура. Идентифициране на микроби - определяне на системното положение на културата, изолирана от материала към вида и варианта. Първото условие за надеждна идентификация е безусловната чистота на културата. За идентифициране на микробите се използва набор от признаци: морфологичен (форма, размер, наличие на жлези, капсули, спори, взаимно подреждане в намазка), тинкторен (по отношение на петна по Грам или други методи), химичен (съотношение гуанин + цитозин в дНК молекула), културен (хранителни изисквания, условия на култивиране, скорост и характер на растеж върху различни хранителни среди), ензимен (разцепване на различни вещества с образуването на междинни и крайни продукти), серологичен (антигенна структура, специфичност), биологичен (вирулентност за животни, токсичност , алергенност, ефект на антибиотици и др.).

За биохимично диференциране, способността на бактериите да ферментират въглехидрати с образуването на междинни и крайни продукти, способността за разграждане на протеини и пептони и изучаване на редокс ензими.

За изследване на захаролитични ензими, изолирани култури се инокулират в епруветки с полутечна среда, съдържаща лактоза, глюкоза и други въглехидрати и многоатомни алкохоли. На полутечна среда, сеитбата се извършва с инжектиране в дълбочината на средата. Когато сеят с инжекция, епруветката със средата се държи под ъгъл, тапата се отстранява, ръбът на епруветката се изгаря. Материалът се взема със стерилен контур и колоната от хранителната среда се пробива с него почти до дъното.

За определяне на протеолитичните ензими, изолираната култура се инокулира в пептонова вода или ВСН. За целта вземете в ръка епруветка с инокулация по-близо до вас, а епруветка със среда - по-далеч от вас. И двете епруветки се отварят едновременно, като улавят щепселите си с малкия пръст и ръба на дланта, краищата на епруветките се изгарят, малко култура се улавя с калциниран охладен контур и се прехвърля във втора епруветка, разбърква се в течна среда върху стената на епруветката и се измива със среда.

При сеитба и повторно размножаване трябва да се обърне внимание на спазването на правилата за стерилност, за да не замърсявате вашите култури с външна микрофлора, както и да не замърсявате околната среда. Епруветките се маркират и се поставят в термостат за инкубация при 37 ° С за един ден.

заключение

Отчитане на резултатите. Заключение на изследването. Резултатите от идентификацията се вземат предвид и въз основа на съвкупността от получените данни въз основа на класификацията и характеристиките на типовите щамове, описани в ръководството (детерминантите на Bergey, 1994-1996), се определя типът изолирани култури.

Бактериологичен метод на изследване. Изолиране на чиста култура от аеробни бактерии (1-2 етапа)

1. Същността на бактериологичния метод

3. Методи за получаване на изолирани колонии

4. Методи за получаване на чиста култура

1. Провеждайте първична сеитба по метода на Koch и Drygalsky

2. Маркирайте чиста култура

Работен план:

1. Бактериологичен метод на изследване

2. Етапи на бактериологичния метод

3. Концепция: чиста култура, щам, колония

4. Методи за получаване на изолирани колонии

5. Методи за получаване на чиста култура от аеробни бактерии

Основният метод за лабораторна диагностика на инфекциозни заболявания е бактериологичният метод. Същността на бактериологичния метод се състои в изолиране на патогени от изследвания материал и идентифицирането му (определяне на рода, видовете, сортовете).

Бактериологичният метод ви позволява да определите:

1. Вид на патогена и диагностициране на заболяването

2. Антибиотици, които убиват патогена и предписват подходящо лечение

3. Фаговари и серовари на патогена за идентифициране на източника на инфекция

Първият етап е първичната инокулация на тествания материал за получаване на изолирани колонии. Първичната инокулация се извършва върху среда за съхранение и SDS (плоча среда).

Вторият етап е характеризирането на изолирани колонии и получаване на чиста култура от тях чрез повторно повторно нарязване върху скосена колона от основната среда.

Третият етап - идентифициране на чиста култура - определяне на рода, вида, разновидностите на патогена, определяне на антибиотичната чувствителност, определяне на фаговарите.

Културата на микроорганизмите е бактерии, които са отглеждани върху хранителни среди. Чистата култура е един вид бактерии, отглеждани върху хранителни среди. В рамките на вида има сортове, които се различават по една характеристика:

1. Морфовари - различават се по морфология

2. Хемовари - различават се по биохимични свойства

3. Серовари - различават се по антигенни свойства

4. Фагори - различават се по чувствителност към фаги

Чистата култура е необходима за идентификация, определяне на серовари, фаговари, чувствителност към антибиотици. Един щам са бактерии от същия вид, изолирани от конкретен източник (река Волга, болен Иванов и др.). Колонията е видимо натрупване на бактерии от един и същи вид, образувано, когато една бактериална клетка се размножава върху гъста хранителна среда.

Първият етап на изследването е първичната инокулация на тествания материал за получаване на изолирани колонии. Преди първична инокулация се извършва микроскопия на тествания материал. Тестовият материал обикновено съдържа смес от различни бактерии, включително патогени. За изолиране на патогена е необходимо да се получат изолирани колонии (бактерии от един и същи вид), като се избере хранителна среда и специални методи за инокулация.

Има два метода за получаване на изолирани колонии:

1. Методът на Дригалски

Същността на бактериоскопския метод: откриване на микроби в тествания материал; проучване на техните морфологични и тинкториални свойства, естеството на тяхното разположение в бактериологичен намазка в зрителното поле.

Техника на изпълнение. Материалът от пациента се изследва визуално, подбира се част, в която най-вероятно може да се открие причинителят на заболяването (бучки слуз, гнойни запушалки). Прилага се върху стъклен предмет (понякога материалът е предварително емулгиран във физиологичен разтвор, по-рядко се центрофугира). Капката се разстила върху стъклото, изсушава се и се фиксира. След това намазката се оцветява и пробата се гледа под микроскоп. Обикновено намазката е оцветена по Грам. Понякога като най-нежен се използва един от най-простите методи за оцветяване, тогава лекарството се боядисва с едно багрило (например при диагностицирането на менингококова инфекция, холера).

Ако е необходимо, се използват специални сложни методи за оцветяване, например методът на Burri-Gins за откриване на капсулни микроорганизми или методът на Ziehl-Nielsen за откриване на наличие на киселинно-устойчиви бактерии. В някои случаи (по-специално при изучаване на двигателната активност на микроорганизмите) се приготвят препарати "висяща капка" и "смачкана капка" и микроскопични несъдържащи бактерии.

Предимства на бактериоскопския метод:простота на изпълнение, възможност за бързо получаване на резултати, техническа и икономическа наличност.

Недостатъци на метода:за да се определи вида на микроорганизмите, често е недостатъчно да се определят неговите морфологични свойства, тъй като те са идентични при представители на сродни видове. В допълнение, бактериите с характерна морфология често претърпяват промени, особено под въздействието на антибиотици, и стават неузнаваеми; накрая, концентрацията на патогени в тествания материал може да бъде изключително ниска и тогава те са трудни за откриване.

Като се има предвид горното, бактериоскопичният метод рядко се използва като единствен и окончателен начин за установяване на етиологията на заболяването. По-често се използва като ориентировъчен, предварителен и при диагностицирането на някои инфекциозни заболявания изобщо не се предоставя.

Как да разберем ориентацията и предварителността? Това се отнася за клинициста и бактериолога. Клиницистът, получавайки предварителен отговор (положителен или отрицателен), в по-голяма или по-малка степен използва получената информация при по-нататъшните си изследвания до получаването на окончателния резултат от бактериологичния диагностичен метод. Бактериологът, след като получи приблизителна информация за предполагаемия патоген, за неговата концентрация в използвания материал, за наличието на съпътстваща микрофлора, определя методите за обработка на материала и изолиране на чиста култура на патогена, избира хранителни среди за последващо култивиране.

Бактериологичен метод

Същността на метода е изолирането на чиста култура на микроба - патогена от патологичния материал, подробно проучване на неговите морфологични, тинкториални, културни, биохимични, серологични свойства с цел последваща идентификация на патогена. При прилагането на бактериологичния метод на изследване се разграничават 4 етапа.

А. Като се вземат предвид данните, получени по време на бактериоскопичното изследване, се извършва подбор на най-ефективната хранителна среда, върху която най-вероятно ще бъде възможно да се получи растежът на културата на предполагаемите микроби - патогени.

Б. Тестовият материал се инокулира в редица хранителни среди: течни и твърди, универсални, селективни, диференциална диагностика. В този случай инокулацията върху чаши на Петри с твърда хранителна среда се извършва с бактериологичен контур с удар, за да се гарантира възможността за получаване на растеж на изолирани колонии от микроби (можете също да използвате метода на Дригалски или друг метод за отделяне на културите от микроорганизми).

А. Културните свойства на микроорганизмите, отглеждани върху хранителни среди; се прави подбор на подозрителни колонии. Трябва да се подчертае, че подборът на подозрителни колонии е най-отговорен и труден етап от работата. Тя се основава на първо място на определяне на характерните особености на микробните колонии, но често това не позволява диференциране на микробни колонии от определени видове и е необходимо допълнително изучаване на морфологията на микробите в мазки от подозрителни колонии, характеристиките на растежа на микроорганизмите върху диференциално-диагностичните среди и др. Изолирането на чисти култури от бактерии и тяхното изследване може да се извърши чрез предварителна сеитба върху течна среда за съхранение, но се отделя допълнително време за изследвания.

Б. Приготвя се бактериологичен намаз от подозрителни колонии, оцветени с Грам и микроскопски (установява се идентичността на микроорганизмите с изследваните по време на микроскопско изследване на 1-ви етап). В. От останалата част на подозрителната колония културата се субкултурира на наклонен мезопатамиен агар (можете да използвате и други хранителни среди, при които се очаква добър растеж на изолираните микроорганизми). Целта е натрупването на чиста култура на микроба - предполагаемия причинител на болестта, защото следващият етап от изследването ще изисква много микробна маса.

Изследват се захаролитичните свойства на предполагаемия патоген (сеитба върху разноцветна среда, Olkenitsky, Ressel и др.), Протеолитична активност (сеитба върху желатин, мляко според Тукаев, определяне на образуването на индол и сероводород по време на растеж върху месопатамийния бульон). Чувствителността на изолираните култури към антибиотици се изследва (по-често чрез метода на стандартни хартиени дискове, по-рядко чрез метода на серийни разреждания). Серотипизацията се извършва в реакцията на аглутинация върху стъкло с групови и типични диагностични серуми; фагова типизация със стандартни диагностични бактериофаги. За идентификация в някои случаи се изследват факторите на патогенност в бактериите.

Резултатите от изследването се вземат предвид. Въз основа на сравнението на свойствата, разкрити в микроорганизмите (морфологични, тинкториални, културни, биохимични, серологични и др.), Се идентифицират микроби. Издава се окончателен отговор с резултатите от бактериологичното изследване, което показва вида на патогена (понякога - неговия серотип, биовар, фагов тип) и чувствителността му към антибиотици.

Доста често, за да се получат надеждни резултати, отговорът се предхожда от биологични, алергологични или други изследователски методи.

Предимства на бактериологичния метод за диагностика:висока надеждност на резултатите от изследванията; възможността за получаване на допълнителни данни за чувствителността на изолираните патогени към антибиотици; възможността за провеждане на епидемиологични изследвания.

Недостатъците на методавключва продължителността на изследването (най-малко 4-5 дни), както и невъзможността да се използва в случаите, когато патогенните инфекции (например рикетсия, хламидия) не растат върху изкуствени хранителни среди.

Биологичен метод

В някои случаи за оптимизиране на диагнозата на инфекциозни заболявания се използва биологичен метод (биологичен анализ), който включва заразяване на лабораторни животни. В този случай изследователят може да има различни цели:

Възпроизвеждане на клиничната и патологичната картина на заболяването (например при диагностика на тетанус, лептоспироза);

Изолиране за кратко време на чиста култура на патогена (при диагностициране на пневмококова инфекция);

Определяне на вирулентността и патогенността на патогена (при диагностициране на туберкулоза);

Определяне на вида и вида на токсините (при диагностициране на ботулизъм)

За диагностициране на инфекциозни заболявания се използват различни животни. Изборът им се определя от чувствителността на видовете към различни етиологични агенти. Например мишките са податливи на пневмококова инфекция, антракс, тетанус; морски свинчета - към причинителите на туберкулоза, бруцелоза, туларемия; зайци - до стафилококи, стрептококи, ботулизъм. За изследване се подбират само здрави животни с определена възраст и телесно тегло.

Преди въвеждането на материала животните се фиксират. Малките животни се отглеждат от експериментатора, а за големите използват специални устройства. Мястото на инжектиране на заразения материал се третира с алкохол или йод. Заразеният материал се инжектира в зависимост от характеристиките на патогенезата на изследваното заболяване, подкожно, кожно, интравенозно, интраперитонеално, интрацеребрално и др.

Кога кожен методинфекция, вълната се нарязва предварително, кожата се скарифицира и след това материалът се втрива в нея.

Подкожен метод:кожата на животните се улавя в гънка, за предпочитане с пинсети, иглата се вкарва наполовина, след инжектирането се поставя памучен тампон с алкохол и иглата се отстранява.

Интрамускулен метод:материалът се инжектира в мускулната тъкан на горната част на задния крайник.

Интраперитонеален метод:животното се държи наопаки, за да не наранят червата. Инжекцията се прави в долната част на корема, отстрани на средната линия. Коремната стена е пробита с резки движения, спринцовката е под прав ъгъл.

Интравенозен метод:мишки, плъхове се инжектират с материала - в опашната вена или интракардиално. Заекът се инжектира в ушните вени, които са разположени повърхностно и ясно се виждат (по-добре е да се пробие външната вена). След инжектиране мястото на инжектиране се затяга с памучна вата с алкохол, така че да няма кървене. В случай на интракардиална инфекция морските свинчета се инжектират с игла на височината на "натискането" на сърцето в междуребреното пространство. Ако иглата е поставена правилно, в спринцовката ще се появи кръв.

Приготвяне на инструменти и материали: спринцовки, скалпели, игли се стерилизират чрез кипене. Материалът се събира в спринцовката (малко повече, отколкото е необходимо да се инжектира), обърнете се вертикално нагоре, покрийте иглата със стерилен памучен тампон и избутайте въздушните мехурчета от спринцовката с буталото. Тази манипулация се извършва над дезинфекционния разтвор.

При диагностициране на инфекции, причинени от действието на токсин (ботулин, антракс), материалът, който се предполага, че съдържа патогена и токсините, се поставя в физиологичен разтвор, след което се филтрира през хартиен филтър, разтрит с талк на прах (той абсорбира токсина добре). Чувствителните животни са замърсени с филтърни промивки. В някои случаи, когато патогенезата на заболяването се дължи на патогенните свойства на самия патоген, животните се заразяват с микробна суспензия.

Заразените бели мишки са етикетирани и поставени в специални стъклени буркани; върху тях се залепва етикет, указващ датата на заразяване и вида на микроорганизма, с който е извършена работата. По същия начин клетките се подписват със заразени зайци или морски свинчета. Животните се наблюдават. В случай на смърт, те веднага се отварят.

Преди дисекция на бели мишки, животните се жертват предварително с етерни пари. Мишките се потапят за кратко в дезинфекционен разтвор и след това се фиксират в кювета, с корем нагоре от лапите. Отбелязва се наличието или отсъствието на външни патологични промени. Разрезът на кожата се прави надлъжно от пубиса до долната челюст и напречно към крайниците. Забелязват се промени в кожната тъкан и състоянието на лимфните възли. От последното се правят намазки. За да се изследва гръдната кухина, гръдната кост се отстранява чрез изрязване на ребрата от двете страни с ножица. След външно изследване парчета от сърцето се отрязват и се поставят в BCH. Правете инокулация направо върху MPA мазки-отпечатъци от сърцето, белите дробове.

Коремната кухина се отваря, с външен преглед се отбелязва състоянието на вътрешните органи (размер, цвят, консистенция, наличие на гнойни огнища). Правете култури на черния дроб, далака и намажете отпечатъци.

Работата се извършва със стерилни инструменти, след всяко отстраняване на органи пинсетите и ножиците се спускат в чаша с алкохол и се изгарят.

След аутопсията трупът и кюветата, където е извършена аутопсията, се заливат с дезинфекционен разтвор за един ден.

Културите се инкубират за 24 часа (или повече, ако е необходимо) при

t 37 o C. След това те се изследват, изолира се чиста култура на патогена и се идентифицира чрез бактериологичен метод.

Предимства на метода: надеждност на получените резултати, няма нужда от сложно оборудване.

Недостатъци: висока цена, ограничена употреба, риск от инфекция.

Подобна информация.

Културен метод-извличане и натрупване на резервоар с чиста култура с нейното раждане. Някои от резервоарите са устойчиви на / b, така че анализът на резервоара може да включва определяне на усещането за секреция. Изчистване на ry към b

Особено: многоетапно. Минус продължителността.

Преглед: кръв, урина, цереброспинална течност, слуз от гърлото и носа, изпражнения

За селекция на плътно хранене на околната среда Етапи: подбор на чисти култури

Методи за предварително класифициране:

1) морфологичен анализ на бактериални колонии и техните характеристики на специални / диференциални среди

2) микроскоп-i боядисан резервоар-i

За индексите за завършване tank-s: проучване на b \\ x актове (биотипизиране);

detect-e tank.Ag (serotype-e) -1) r-ция аглутинация върху стъкло-pr. за ентеробактерите

2) имунодифа в агар (коринебак-ii дифтерия)

определяне на чувствителността към бактериофаги (фаготипир-е)

имунология

Антиген-разпознаващи рецептори на лимфоцитите.

Сравнителни характеристики на BCR и TCR

B клетъчен рецептор (BCR)			Т клетъчен рецептор (TCR)
1. Структура
Мембранен IgM (mIgM), по-рядко IgD мономер с допълнителен хидрофобен домен за закрепване на плазмената мембрана (специфичността на 2 паратопа съвпада със спецификата на секретираните антитела)	Хетеродимер, се състои от 2 гликопептидни вериги - α и β (държани заедно от дисулфидна връзка). Всеки се състои от 2 функционално различни секции - променливи постоянен Променливи региони (домейни) на двете вериги форма антиген-свързващ център TCR (паратоп CDR 1-3). Постоянните фрагменти от α, β вериги осигуряват фиксиранеTCR върху плазмената мембрана и контакти с костимулиращи молекули
2. От механизма на усилване на антигенния сигнал функционално зависи
CD79aи CD79b		TCR веригите се експресират върху клетъчната мембрана само в комбинация с CD3
Дори след разпознаване и свързване на свободен антиген или MHC-протеинов комплекс, няма достатъчно сигнал за активиране на лимфоцитите. Необходимо е взаимодействие с допълнителни молекули. Техните цитоплазмени фрагменти са свързани с вътреклетъчни ензими (тирозин кинази), активирането на които задейства каскада, водеща до генна експресия. Това индуцира пролиферацията и диференцирането на наивни клетки в ефекторни клетки и клетки на паметта
Наивен лимфоцитен рецепторен комплекс
BCR комплекс \u003d mIgM + CD79a + CD79b		TCR комплекс \u003d TCR + CD3 + CD4 / 8
3. Наличие на секреторна форма
Да (безплатен имуноглобулинов пентамер)		Не (не се секретира извънклетъчно)
4. Механизъм за разпознаване на антиген (основна характеристика) !!!
Разпознайте епитопа пряко „Без посредници“		Безплатноепитопи не се възприема Принцип на двойно признаване Само в комбинация с молекулаMHC на повърхността на собствен агропромишлен комплекс Ограничено от HLA(виж отдолу)
5. Промяна по време на имуногенезата
1. Промяна на изотипа на рецепторите на IgG, IgA и IgE, в резултат на превключване на класа на секретираните антитела (т.е. след кратък IgM срив, IgG антителата започват да доминират). При многократен контакт с антигена, IgG антителата преобладават от самото начало, тъй като рецепторите в клетките на паметта от самото начало са представени главно от IgG молекули. 2. Повишен афинитет		1. Без промени, стабилен изотип 2. Константа на афинитет
6. Сходство: клонирани за чувствителност към Ag (разпознаване на антигенни епитопи) Всеки лимфоцит има рецептори една специфика (от един идиотип, т.е. клониран от V -домейни), т.е. се различават по лимфоцитите, реагиращи на различни антигени

2. Понятието "клониране" в имунологията означава:

1. Способността на всеки В / Т лимфоцит да реагира на единичен антиген (епитоп). 2. Способността на всеки В / Т-лимфоцит да реагира на няколко епитопи. 3. Селективно свързване на антигенни пептиди с HLA молекули на антиген-представящи клетки. 4. Специфичност (епитопна допълняемост) на антиген-разпознаващите рецептори на лимфоцитите. 5. Клоноспецифичност на CD фенотипа на Т и В лимфоцитите.

Лимфоцитите са разнородни по своята способност да разпознават и реагират на антигени. Освен това всеки лимфоцит и неговото потомство (клонинг) са конфигурирани да взаимодействат с един антиген (по-точно епитоп). С други думи, лимфоцитите се клонират чрез чувствителност към антигени и това определя селективността (антигенната специфичност) на имунния отговор. Молекулната основа на клонирането са характеристиките на рецепторите, които свързват антигените: рецепторите на всеки клон са уникални, реагиращи само с един антиген. Това означава, че броят на клонингите и специфичните за клона рецептори трябва да бъде огромен, съответстващ на огромния брой потенциални антигени. Преди да се срещне с антигена, всеки клон е представен от малък брой зрели почиващи клетки (те се наричат \u200b\u200b"наивни"). Свързвайки се с комплементарни рецептори, антигенът осигурява активиране на лимфоцита, действайки като фактор на селекция (селектиране на клонинг). Броят на клона се увеличава (разширяване на клона), а съставните му лимфоцити се диференцират в ефекторни клетки и клетки на паметта.

бактериология

3. Признаци на микобактерията туберкулоза, свързана с характеристиките на тяхната клетъчна стена:

1. Киселова устойчивост. 2. Бавна степен на възпроизвеждане 3. Устойчивост на фагоцити. 4. Стабилност във външната среда. 5. Висока чувствителност към антибиотици.

ТУБЕРКУЛОЗА... род Micobacterium Родова характеристика - устойчивост на киселина, алкохол и алкали. семейство Micobacteriaceae (сапрофити) разделение Firmicutes. Неподвижни, аеробни gr + бактерии във формата на пръчки. Понякога те образуват структури, наподобяващи мицел, оттук и името. Методът на Ziehl-Nielsen се използва за рисуване. Заболяването се причинява от 3 вида микобактерии: Mycobacterium tuberculosis е човешки вид, Mycobacterium bovis е говежди вид, а Mycobacterium africanum е междинен вид. [Причинители на микобактериалната антропоноза: M. leprae, m.tuberculosis. причинителят на микобактериалната зооноза: M.bovis.] резервоар - пациент, пътят на инфекцията - аерогенен. Заболяването се увеличава поради лоша хигиена и др. Пръчката на Кох е тънка, права или леко извита, склонна към разклоняване. Използвайки метода на Ziehl-Nielsen, те се оцветяват в червено, съдържащи киселинно-устави гранули (Fly зърна в цитоплазмата). Необходими са растежни фактори. В течните среди той синтезира фактор на вирулентност на фабричния кабел. Той синтезира много никотинова киселина - ниацин (ниацинов тестов метод, диференциална микобактерия). Липиди на клетъчната стена: миколови киселини, фактор на връв, микозиди, сулфатиди. Следователно, той е устойчив на киселина, "бронирано чудовище". Фагоцитна резистентност,. стабилна във външната среда. Фактори на антифагоцитна активност: липиди на клетъчната стена, сидерофори.

Патогенеза: проникване в алвеолите; възпроизводство в алвеоларни макрофаги (фактор на кордата, инхибиращ фагозомно-лизазомния синтез); образуването на неспецифичен предимунен гранулом (образува вал около заразените клетки, от макрофаги); проникване на бакт в регионални лимфни възли; индуциране на Т-клетъчен имунитет; Т-зависимо активиране на макрофагите (първо Thelp, като повишава биоцидната активност, се заразява с макрофаги, след това Tkil ще унищожи инфекцията с макрофаги); образуването на специфичен пост-имунен гранулом. Завършване на процеса - фиброза, калцификация, формална латентна инфекция, форми на имунитет към екзогенна реинфекция. [Иницииране на процеса - интрамакрофагична инвазия. Механизми: неагресивна фагоцитоза, потискане на образуването на фаголиза, активна резистентност към биотоксичните фактори на фаголизозомите, потискане на функционалното сътрудничество между макрофагите и Т-лимфоцитите.] Първичната туберкулоза е преобладаваща в детската проява (+ скорост на субфеба) - Първичен имунен комплекс - фокус на Гон. В гранулома клетките на Pirogov-Lnghans, по периметъра, са лимфоцити, мононуклеарни клетки. Възможна реактивация на ендогенна инфузия (вторична тръба) или реинфекция с екзоген е рядка, развива се на фона на алергия към туберкулопротеини.При лица с отслабен имунитет е възможна дисеминирана туберкулоза. Туберкулинът е комплекс от туберкулопротеини (протеинови производни), използвани в диагностиката на алергията. [Нанесете адюванта на Freund: пептидогликан + липиди на клетъчната стена]. Туберкулопротеините имат имунологично зависима патогенност, участват в прилагането на защитен имунитет и се използват в диагностиката на алергиите. Липиди на клетъчната стена: антимакрофагична активност, участват в индуцирането на Т-клетъчен имунитет като помощни вещества, определят културните и тинкториалните характеристики на бактериите. Основната функция на макрофагите в областта на неспецифичния гранулом е да стимулират реакциите на каротиден имунитет. Позимунен гранулом: възниква на фона на реакция на свръхчувствителност със забавен тип към туберкулопротеини, зона за функционално сътрудничество между макрофаги и Т-ефектори, основа за деструктивни реакции, основа за саногенеза (възстановена), завършва с безсимптомно персистиране на патогена. Определят се разрушителните процеси при туберкулозата: имунологично медиирани ефекти на микобактериална хипертония, цитокин-зависимо активиране на макрофаги, алергия към туберкулопротеини. Имунитет Противотуберкулозен имунитет, нестерилен инфекциозен, [поради наличието на L-форми на микобактерии в тялото.] Клетъчен, антибактериален

Лабораторна диагн. Задължителните методи за изследване включват бактериоскопични, бактериологични изследвания, биологичен тест, туберкулинова диагностика, основаващи се на определяне на повишената чувствителност на организма към туберкулин (пречистена е смес от протеини, които възбуждат тръбата). По-често за откриване на инфекция и алергични реакции се провежда интрадермален тест на Манту с пречистен туберкулин в стандартно разреждане на Научноизследователския институт (до 14 години). Флуорография. Лечението е антибиотично, хирургът ще се намеси.

Специфичната профилактика се провежда чрез инжектиране на жива ваксина с атенюир - BCG (BCG), интрадермално на 5-ия ден след раждането на детето. Последващите реваксинации се извършват 7, 13 години.

ВИРУСОЛОГИЯ

4. Хемаглутинин на ортомиксовируси:

1. Инициира взаимодействието на вируса с клетката. 2. Става активен след ограничена протеолиза. 3. Коефициентът на сливане. 4. Защитен антиген. 6. Предлага се във всички видове (видове) от рода грип.

ортомиксовируси Род грип от вируса на семейство orthomixoviridae (слуз, тези с афинитет към муцин). Има 3 вида-A, B, C. "-" РНК (8 сегмента, едноверижен е A и B, 7 в С) Тази сегментация позволява на два вируса лесно да обменят генетична информация при взаимодействие и по този начин допринася за високата променливост на вируса., Хеликален нуклеокапсид (състав на РНК, нуклеопротеин (структури и регулатори на ролята и типа специфичен ag) и протеин), суперкапсидът е (\u003d "комплекс). Протеини (ензими) на комплекса РНК-полимераза: PB1 протеин (транскриптаза), PB2 протеин (ендонуклеаза), PA протеин (реплика). Следва М-протеинът (участва в сглобяването на вирусни частици, специфичен за типа AG), след това билипидният слой (образуван от мембраната на гостоприемника, чувствителен към етера), от който са гликопротеините, шипове, състав от геммаглутинин (Н) и неуроминидаза (N (тип C не й))

AG-та структура: вътрешни - NP, протеин-М, протеини от комплекса РНК полимераза. Отвън - H (разнообразие 15, за хората: H1-3) и N (9, за хората: N1, N2). Репликация на h / z тРНК.

(транскриптаза, ендонуклеаза, реплика). Repl в ядрото и синтез

Чрез ендоцитоза на cs H в ендозомата, там киселата среда променя конформацията, излага пептиди (F-протеини), причинявайки сливане на вирусни и фаголизозомни мембрани \u003d\u003e депротеинизация

Дрифт, смяна. виремия. Ремантадинът.

Признаци: -RNA (\u003d\u003e тя не може да изпълнява функциите на mRNA без транскрипти, фрагментарни), обвивка (вътрешната включва М-протеин, нуклеопрот, полимерни комплексни ферми), възбуждане на ARI, нуклеокапсидна спирала sim. Разделете се на типове: (A, B, C) AG-индивиди вътре в протеините (нуклеопротин). A, B, C се различават по: еколог, мащаб на AG-измерване, обхват на вирионните ферми, стъпка Epidem-ty (лидерът в патогена е вирус тип A, тип B е междинен, тип C е причината за спорадичните заболявания на единични огнища). Supercaps протеини: N, H. H: иницииране на взаимодействие с CL (TC има афинитет към сиалилирани гликопептиди и гликолипиди, поради които вириони се свързват към плазмените мембрани), активирани чрез протеолиза (синтез под формата на прекурсор метод, реагиращ с клетъчна рецепта, но не осигурявайки сливането на вириона само с клетъчните мембрани \u003d\u003e трябва да се подложи на ограничена протеолиза, протеазите разцепват хемаглута в Н1 и Н2 и след допълнителна конформация в киселата среда на ендозомите, Н2 инициира сливането), f-r сливане (начинът на освобождаване на нуклеикапсида в цитоплазмата: в киселата среда те са изложени Специализирана структура хемаглут (места за сливане) котешки възбудени, вирусни и клетъчни мембрани се комбинират), Protect-AG (тези, които го блокират вируса и потискат инфекцията), при всички видове грип., Neuraminidase: защитен агент, разпространяващ фактор (който разширява зоната на инфекция чрез разцепване на сиалова киселина от гликолепиди и гликопептиди (тези по същество инактивиращи рецептори за хемаглутинин), разликата в епитопа е променлива. AG-смяна (това е изместване, неочаквано, изображението на котка с качулка води до пълна промяна в профила на антигена на H, N и са се появили нови подтипове): само тип А, детерминатор на околната среда (свързване на вируси към дихателните пътища), генетичен детерминист (зависи от генетичния рекомбин на гените с едновременна инфекция на клетки с няколко щама), промяна на подтипове на вирионния протеин pov, поява на пандемия (H1N1 (това е испански) H3N2 (хонконгски вирус). Дрифт (бавно частично разкриване с помощта на точкови мутации на H, N-епитопи при запазване на антигена на родство с родителския AG щам, определя характеристиките на щама в подтипа, поражда щам с повишена епидемична пропускливост) epid.Тежко е да се получи ваксина: AG - промяна, дрейф.

Билет за изпит 58.

ОБЩА МИКРОБИОЛОГИЯ

Концепцията за специфична превенция на инфекциозните заболявания. Имунологични основи на профилактика на ваксините. Произведения на Е Дженър и Л. Пастьор. Видове ваксини (убити, живи, субединица; моно- и свързани). Рекомбинантни ваксини, принцип на производство. Конюгирайте ваксините. Лигавични ваксини.

Имунитетът е пасивен (1. естествено придобит след инфекция и 2. изкуства, придобити след ваксината) и активен (1. за придобиване на AT майки чрез мляко или плацента и 2. изкуство на придобита серотерапия). Неспецифичният професионалист е насочен към избягване на инфекция, а конкретен е насочен срещу конкретна възбуда. Същността на ваксинацията е да формира паметта за хипертонията, което ще осигури бърз имунен отговор. Ваксината изисква само защитни антигени (т.е., които причиняват производството на антитела)

ИСТОРИЯ: през 1778 г. в Дженър е доказано, че ваксинацията с „крава шарка“ предпазва от едра шарка. Това беше продукт на чисто експериментиране. Това е датата на раждане на ваксинологията. Самият термин "ваксина" е даден от Пастьор. През 1881 г. той „умишлено“ отслабва вирулентността на бактата, култивирайки ги в лошо състояние. Той подготви първите ваксини срещу пилешката холера и антракс. През 885 г. той получава ваксини срещу бяс (по-късно се оказа, че това е убита ваксина)

Видове ваксини:

1. ЖИВО - влизайте в отслабена (отслабена) бакт. Osl-t физически, химически методи. "+" - висока имуногенност и продължителност на ефекта (mk отслабени бакти са в състояние да растат в орга, персистират "-" - увеличават реактогенността, нестабилността, незначителна. Но вероятността от реверсия на вирулентен фенотип. Пример: BCG

2. Убит-инт-инактивиращ бакт, прост, гъби или вириони. Техните предимства и недостатъци са противоположни на живите ваксини. Трябва да харчите по-често. Пример: p-in грип, коремен тиф

3. ИЗПЪЛНЕНО - се състои от пречистени защитни АГ. Реактогенността е минимална. За висока имуногенност, която се усилва с помощта на адюванти

1) Конюгиран - isp-t, за да се създаде импресия срещу T-независимост AG. T-nezavis AG няма спиране на паметта.

2) Токсоидно неутрализирани токсини от бактерии. Проблемът произтича от факта, че моноинтоксикацията е рядка. Екзотоксините се лекуват с формалин и те губят токсичността на Светия остров, но имунитетът остава. Те не предпазват от носители на бактерии. Пример: колонен токсоид

3) Рекомбинантни са рекомбинантни ДНК молекули, направени на базата на бактериални плазмиди, в които се вмъкват гените на защитните антигени. Такава ДНК synth-t AG, предизвикваща хуморална и цилиарна имунност.

1) Безплатни плъзгащи плазмиди или тези, които са сорбирани върху художествена среда. Те са в безопасност. Пример: срещу хепатит В

2) Приложена от вектора отслабена бакт за доставка

4.MUKOSAL - са специално създадени за защита на лигавиците срещу инфекции на дихателните пътища, червата и гениталния тракт. Pomiso d-i на място, те също влияят на общото im-t. Те са непременно съпротивителни добавки. Но тяхното изпълнение е много бавно

Основният метод на микробиологична диагностика и "златният стандарт" на микробиологията е бактериологичният метод.

Целта на бактериологичния метод се състои в изолиране на чиста култура на причинителя на болестта от изпитвания материал, натрупване на чиста култура и идентифициране на тази култура чрез набор от свойства: морфологични, тинкториални, културни, биохимични, антигенни, чрез наличието на фактори на патогенност, токсигенност и определяне на нейната чувствителност към антимикробни лекарства и бактериофаги.

Бактериологичният метод на изследване включва:

1.Поставяне на тествания материал в хранителни среди

2.изолация на чиста култура

3. идентификация на микроорганизмите (определяне на принадлежността към вида).

Изолирането и идентифицирането на чисти култури от аеробни и анаеробни бактерии включва следните изследвания:

I етап (работа с родния материал)

Цел: получаване на изолирани колонии

1. Предварителната микроскопия дава приблизителна представа за микрофлората

2. Подготовка на материал за изследване (разреждане с изотоничен разтвор на NaCl и др.)

3. Засяване на твърди хранителни среди за получаване на изолирани колонии

4. Инкубация при оптимална температура, най-често 37 ° C, за 18-24 часа

II етап

Цел: получаване на чиста култура

1. Макроскопско изследване колонии в предавана и отразена светлина (характерна за размер, форма, цвят, прозрачност, консистенция, структура, контур, повърхност на колонии).

2. Микроскопско изследване на изолирани колонии

3. Изпитване за въздушна поносимост (за да се потвърди наличието на строги анаероби в тестовия материал).

4. Сеитбени колонии, характерни за определен вид, върху среда за съхранение на чиста култура или избираеми среди и инкубация при оптимални условия.

Етап III

Цел: идентификация на посветена чиста култура

1. За идентифициране на изолираната култура чрез комплекс от биологични свойства се изследва следното:

Морфология и тинкториални свойства

Културни свойства (естество на растеж върху хранителните среди)

Биохимични свойства (ензимна активност на микроорганизми, гликолитична, протеолитична и друга активност)

Серологични свойства (антигенни)

Вирулентни свойства (способността да произвеждат патогенни фактори: токсини, ензими, фактори на защита и агресия)

Патогенност за животни

Фаголиза (чувствителност към диагностични бактериофаги)

Антибиотична чувствителност

Други индивидуални свойства

Етап IV (Заключение)

Според изследваните свойства се прави заключение за избраната култура

Първият етап на изследване.Изследването на патологичен материал започва с микроскопия. Микроскопията на цветния естествен материал дава възможност да се определи приблизителният състав на микробния пейзаж на изследвания обект, някои морфологични особености на микроорганизмите. Резултатите от микроскопията на нативния материал до голяма степен определят хода на по-нататъшните изследвания и впоследствие те се сравняват с данните, получени по време на инокулация върху хранителни среди.

При достатъчно съдържание на патогенни микроорганизми в пробата, инокулацията се извършва върху твърда хранителна среда (за да се получат изолирани колонии). Ако в тествания материал има малко бактерии, тогава се извършва инокулация върху течна среда за обогатяване на хранителни вещества. Хранителната среда се избира според изискванията на микроорганизмите.

Култивирането на микроорганизми е възможно само когато са създадени оптимални условия за техния живот и се спазват правилата за изключване на замърсяване (случайно замърсяване от външни микроби) от тествания материал. Изкуствени условия, които биха изключили замърсяването на културата с други видове, могат да бъдат създадени в епруветка, колба или чаша на Петри. Всички прибори и културни среди трябва да бъдат стерилни и след инокулиране на микробен материал, защитени от замърсяване отвън, което се постига чрез използване на запушалки или метални капачки и капаци. Манипулациите с изпитвания материал трябва да се извършват в зоната на пламък на алкохолна лампа, за да се изключи замърсяването на материала от външната среда, както и с цел спазване на мерките за безопасност.

Инокулациите на материал върху хранителни среди трябва да се извършват не по-късно от 2 часа от момента на събирането им.

Втори етап на изследване.Проучване на колонии и изолиране на чисти култури. След ден на инкубация, колониите растат върху плочите, с непрекъснат растеж при първия удар, а изолирани колонии на следващия. Колония е натрупване на микроби от един и същи вид, които са израснали от една клетка. Тъй като материалът най-често е смес от микроби, растат няколко вида колонии. Различните колонии се маркират с молив, очертавайки ги с кръг отстрани на дъното и се изследват (Таблица 12). На първо място, колониите се изучават с просто око: макроскопски знаци. Чашата се гледа (без да я отваряте) от долната страна при пропускана светлина, отбелязва се прозрачността на колониите (прозрачна, ако не задържа светлина; полупрозрачна, ако частично задържа светлина; непрозрачна, ако светлината не преминава през колонията), измерете (в мм) размера на колониите. След това колониите се изследват отстрани на капака, отбелязва се формата (правилна кръгла, неправилна, плоска, изпъкнала), естеството на повърхността (гладка, лъскава, тъпа, грапава, набръчкана, мокра, суха, слузеста), цвят (безцветен, оцветен).

Таблица 12. Схема на изследване на колонии

№	Знак	Възможни характеристики на колонията
1.	Формата	Плоска, изпъкнала, куполна, депресирана, кръгла, розетка, звезда
2.	Размер, мм	Голям (4-5 мм), среден (2-4 мм), малък (1-2 мм), джудже (< 1 мм)
3.	Повърхностен характер	Гладка (S-образна форма), грапава (R-образна форма), тънък (M-образна форма), набраздена, неравна, матова, лъскава
4.	цвят	Безцветен, оцветен в ... цвят
5.	прозрачност	Прозрачен, непрозрачен, полупрозрачен
6.	Естеството на краищата	Гладка, назъбена, ресниста, влакнеста, люспеста
7.	Вътрешна структура	Хомогенна, гранулирана, хетерогенна
8.	съгласуваност	Вискозен, тънък, ронлив
9.	Емулгиране в капка вода	Добро Лошо

Забележка: 5-7 точки се изследват при ниско увеличение на микроскопа или под лупа.

Още по-добре можете да видите разликите между колониите, когато се гледа с увеличение. За да направите това, поставете затворена чаша с главата надолу на сцената, леко спуснете кондензатора, използвайте малко увеличение на лещата (x8), преместете чашата, изучете микроскопичните характеристики на колониите: естеството на ръба (равномерно, вълнообразно, назъбено, гребено), структура (хомогенна, гранулирана, влакнести, хомогенни или различаващи се в центъра и периферията).

След това се изучава морфологията на микробните клетки от колониите. За това се правят намазки от част от всяка от маркираните колонии, оцветени според Грам. По време на вземането на колонии се обръща внимание на консистенцията (суха, ако колонията се раздробява и се приема с трудност; мека, ако се приема лесно на контур; лигавична, ако колонията се изтегля от контура; твърда, ако част от колонията не се вземе с бримка, може да се отстрани само цялата колония) ...

При изследване на намазки се установява, че колонията е представена от един вид микроби, следователно могат да се изолират чисти култури от бактерии. За да направите това, изследваните колонии се субкултивират на агарен наклон. При повторното повторно преместване от колонии трябва да се внимава да се вземат точно предвидените колонии, без да се докосват примката на близките колонии. Епруветките се подписват и инкубират в термостат при 37 ° С за 24 часа.

Трети етап на изследване.Идентифициране на избраната култура. Идентифициране на микроби - определяне на системното положение на културата, изолирана от материала към вида и варианта. Първото условие за надеждна идентификация е безусловната чистота на културата. За идентифициране на микробите се използва набор от знаци: морфологичен (форма, размер, наличие на жлези, капсули, спори, взаимно подреждане в намазка), тинкторен (отношение към оцветяване по Грам или други методи), химичен (съотношение гуанин + цитозин в молекулата на ДНК), културен ( хранителни изисквания, условия на отглеждане, темп на растеж и характер на растеж върху различни хранителни среди), ензимни (разцепване на различни вещества с образуването на междинни и крайни продукти), серологични (антигенна структура, специфичност), биологични (вирулентност за животни, токсичност, алергенност, антибиотичен ефект и др. и т.н.).

За биохимична диференциация се изучава способността на бактериите да ферментират въглехидрати с образуването на междинни и крайни продукти, способността да разграждат протеини и пептони и се изучават редокс ензими.

За изучаване на захаролитични ензими избраните култури се инокулират в епруветки с полутечна среда, съдържаща лактоза, глюкоза и други въглехидрати и полихидратни алкохоли. На полутечна среда, сеитбата се извършва с инжектиране в дълбочината на средата. Когато сеят с инжекция, епруветката със средата се държи под ъгъл, запушалката се отстранява и ръбът на епруветката се изгаря. Материалът се взема със стерилен контур и колоната от хранителната среда се пробива с него почти до дъното.

За определяне на протеолитичните ензими избраната култура се инокулира в пептонова вода или ВСН. За целта вземете в ръка епруветка с инокулация по-близо до вас, а епруветка със среда - по-далеч от вас. И двете епруветки се отварят едновременно, като улавят щепселите си с малкия пръст и ръба на дланта, краищата на епруветките се изгарят, малко култура се улавя с калциниран охладен контур и се прехвърля във втора епруветка, разбърква се в течна среда върху стената на епруветката и се измива със среда.

При сеитба и повторно размножаване трябва да се обърне внимание на спазването на правилата за стерилност, за да не замърсявате вашите култури с външна микрофлора, както и да не замърсявате околната среда. Епруветките се маркират и се поставят в термостат за инкубация при 37 ° С за един ден.

заключение

Отчитане на резултатите. Заключение на изследването. Резултатите от идентификацията се вземат предвид и въз основа на съвкупността от получените данни въз основа на класификацията и характеристиките на типовите щамове, описани в ръководството (детерминантите на Bergey, 1994-1996), се определя типът изолирани култури.