स्टेज परिणाम: 1) लाइनों के काम के पहले चरण में चयनित कोशिकाओं के परमाणु लिफाफे में टुकड़े टुकड़े ए और टुकड़े टुकड़े बी की सामग्री का विश्लेषण (विभिन्न मेटास्टेटिक क्षमता वाले रास-रूपांतरित हम्सटर फाइब्रोब्लास्ट)। सभी सेल लाइनों में, दोनों लैमिनास के प्रतिपिंड नाभिक को चमकीला दाग देते हैं। एचईटी-एसआर (लो-मेटास्टेटिक) कोशिकाओं में, नाभिक का एक नियमित आकार होता है, परमाणु लिफाफे और न्यूक्लियोप्लाज्म दोनों में लैमिन ए का पता लगाया जाता है, और लैमिनेट बी मुख्य रूप से परमाणु लिफाफे में मौजूद होता है। सभी अत्यधिक मेटास्टेटिक कोशिका रेखाएं विभिन्न प्रकार के परमाणु आकार प्रदर्शित करती हैं, साथ ही साथ सिलवटों का निर्माण या विटामिन के अनियमित संचय (चित्र 1)। अनायास रूपांतरित कोशिकाओं में, जिसमें सीरियाई हम्सटर भ्रूण कोशिका रेखा (ST-HET - निम्न-मेटास्टेटिक कोशिकाएँ, ST-HET क्लोन 83/20 - उच्च-मेटास्टेटिक कोशिकाएँ) की इन विट्रो खेती के परिणामस्वरूप परिवर्तन हुआ। , इसी तरह के परिवर्तन देखे गए - निम्न और उच्च-मेटास्टेटिक लाइनों के बीच धुंधला ए और बी की तीव्रता में महत्वपूर्ण अंतर के अभाव में, उच्च-मेटास्टेटिक लाइन एसटी में नाभिक के आकार में एक महान परिवर्तनशीलता थी। -HET क्लोन 83/20 और दोनों विटामिनों का असमान वितरण (चित्र 2)। विटामिन की अभिव्यक्ति के पश्चिमी धब्बा विश्लेषण ने भी निम्न और उच्च मेटास्टेटिक कोशिकाओं (छवि 3) के बीच विटामिन ए और बी की सामग्री में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया। चूंकि विवो में मेटास्टेटिक गतिविधि में अंतर मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीज की गतिविधि पर निर्भर हो सकता है, अध्ययन की गई पंक्तियों में ज़ीमोग्राफिक विश्लेषण किया गया था। इसके लिए, कोशिकाओं को ३५ मिमी पेट्री डिश पर १५०,००० कोशिकाओं प्रति डिश की सांद्रता में बीज दिया गया, १ दिन के लिए सुसंस्कृत किया गया, फिर सीरम के बिना माध्यम से ३ बार धोया गया और १२ घंटे के लिए सीरम-मुक्त माध्यम में छोड़ दिया गया, और वातानुकूलित माध्यम एकत्र किया गया। . इसके बाद, मेटालोप्रोटीनिस की गतिविधि के अध्ययन में प्रोटीन के अनुप्रयोग को सामान्य करने के लिए व्यंजन में कोशिकाओं की संख्या की गणना की गई। मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीज की जिलेटिनस गतिविधि का विश्लेषण करने के लिए, वातानुकूलित माध्यम के 10 μl विभाज्य को ज़ीमोग्राफी के लिए प्रोटीन लगाने और जेल पर लोड करने के लिए बफर के 10 μl के साथ मिलाया गया था। मानक एसडीएस-पेज 0.2% जिलेटिन युक्त 8% पॉलीएक्रिलामाइड जेल में मानक परिस्थितियों में किया गया था, 30 मिनट के लिए पुनर्वसन किया गया था और जिलेटिनस प्रतिक्रिया 4 घंटे के लिए की गई थी। सभी अध्ययन की गई लाइनों के लिए, मेटालोप्रोटीनस 2 की गतिविधि का पता चला था, हालांकि, निम्न और उच्च मेटास्टेटिक कोशिकाओं (छवि 4) के बीच मेटालोप्रोटीनिस की गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया था। इस प्रकार, परिवर्तन के विभिन्न तरीकों के साथ सीरियाई हम्सटर कोशिकाओं की मेटास्टेटिक क्षमता में अंतर लैमिन ए या लैमिनेट बी की सामग्री में परिवर्तन के कारण नहीं होता है, बल्कि नाभिक के आकार में बदलाव और विटामिन के वितरण से जुड़ा होता है, जो संभावित संकेत देता है आंतरिक परमाणु झिल्ली के लिए विटामिन को लक्षित करने और लैमिना माइक्रोडोमेन के संयोजन के नियमन दोनों में उल्लंघन। 2) एक सीमित स्थान में कोशिकाओं की प्रवास गतिविधि का विश्लेषण। कोशिकाओं की प्रवासन गतिविधि, टुकड़े टुकड़े ए और उसके ब्याह रूपों की अभिव्यक्ति के स्तर के आधार पर, बॉयडेन कक्षों में 3 और 8 माइक्रोन के छिद्र व्यास के साथ की गई थी। एक कीमोअट्रेक्टेंट ग्रेडिएंट बनाने के लिए, निचले कक्ष में भ्रूण सीरम जोड़ा गया था; ऊपरी कक्ष में कोशिकाओं को सीरम-मुक्त माध्यम (चित्र 5) में ऊष्मायन किया गया था। विश्लेषण HT1080 लाइन (मानव फाइब्रोसारकोमा) की सेल आबादी पर किया गया था, GFP-lamin A और GFP-progerin की अभिव्यक्ति के स्तर में विषम, साथ ही साथ टुकड़े टुकड़े A (व्यक्तिगत कोशिकाओं में खराबी का स्तर) के नॉकडाउन के साथ कोशिकाएं लैमिन ए के खिलाफ हेयरपिन आरएनए के साथ सह-अभिव्यक्त जीएफपी के प्रतिदीप्ति के समानुपाती है) ... प्रवासन की दक्षता का विश्लेषण उच्च-थ्रूपुट सूक्ष्म स्क्रीनिंग का उपयोग करके बोने के अगले दिन किया गया था और पिछले चरण में अनुकूलित एल्गोरिदम का उपयोग करके झिल्ली के दोनों किनारों पर एक सुपरथ्रेशोल्ड जीएफपी सिग्नल स्तर के साथ कोशिकाओं की संख्या का स्वत: पता लगाया गया था। परियोजना। विश्लेषण के परिणामों से पता चला है कि बहिर्जात लैमिन ए और प्रोजेरिन दोनों को व्यक्त करने वाली कोशिकाओं का अनुपात छिद्रों के माध्यम से पलायन करने वाली कोशिकाओं की आबादी में काफी कम हो गया है, जो प्रवास के निषेध को इंगित करता है (चित्र 6)। यह प्रभाव छिद्र के आकार पर निर्भर करता है: 8-μm छिद्रों के माध्यम से प्रवासन की दक्षता क्रमशः 25% और 32% लैमिन ए और प्रोजेरिन के लिए घट जाती है, और जब 3-माइक्रोन छिद्रों के माध्यम से पलायन करते हैं, तो दक्षता और भी अधिक कम हो जाती है - ६१ तक % और 66%। उसी समय, लैमिन ए की अभिव्यक्ति के दमन से प्रवासन की सक्रियता नहीं होती है (चित्र 7)। जाहिरा तौर पर, चूंकि इन अध्ययनों में प्रारंभिक रूप से उच्च प्रवास क्षमता और परमाणु लिफाफे की उच्च प्लास्टिसिटी के साथ रूपांतरित कोशिकाओं का उपयोग किया गया था, इसलिए लैमिन ए के स्तर में एक अतिरिक्त कमी कोशिकाओं की छिद्रों के माध्यम से प्रवास करने की क्षमता में महत्वपूर्ण योगदान नहीं देती है। इसलिए, प्रयोगों के अगले चरण में, पिछली रिपोर्ट में वर्णित एचएसआर लाइनों का उपयोग करने की योजना बनाई गई है, जो मेटास्टेसिस (शरीर के ऊतकों पर आक्रमण) के साथ-साथ उनके ट्रांसजेनिक वेरिएंट के लिए विभिन्न संभावनाओं को प्रदर्शित करती है। 3))। 3डी कोलेजन जेल में सेल माइग्रेशन का अध्ययन करने के लिए, फेज व्यू द्वारा संयुक्त रूप से प्लेनर इल्यूमिनेशन माइक्रोस्कोपी (एसपीआईएम) द्वारा छवि पंजीकरण के लिए एक अनुकूलित एल्गोरिदम विकसित किया गया था। यह एल्गोरिथम और इसका हार्डवेयर कार्यान्वयन मध्यम से बड़े पारदर्शी और पारभासी नमूनों में देखने के पूरे क्षेत्र में बढ़ी हुई एकरूपता और प्रसार की गहराई के साथ एक लेजर लाइट शीट के साथ प्लानर रोशनी 3 डी लाइट माइक्रोस्कोपी (एसपीआईएम) प्रदान करता है। विशेष रूप से, यह प्रणाली किसी दिए गए ऑप्टिकल कॉन्फ़िगरेशन के लिए सबसे बड़े संभावित क्षेत्र पर ऑब्जेक्ट के अंदर लेज़र लाइट शीट की न्यूनतम मोटाई बनाए रखने के लिए साधन प्रदान करती है, जो देखने के पूरे क्षेत्र में एक समान और अधिकतम संभव अक्षीय रिज़ॉल्यूशन सुनिश्चित करता है। प्रणाली ऑप्टिकल उत्तेजना पथ (छवि 8) में स्थापित अनुकूली प्रकाशिकी का उपयोग करके लेजर शीट की काठी के आंदोलन के साथ छवि पंजीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले सीएमओएस कैमरे के रोलिंग शटर की गति और चरण के सिंक्रनाइज़ेशन पर आधारित है। सिस्टम को विशेष रूप से त्रि-आयामी जेल में सेल माइग्रेशन के विश्लेषण के लिए अनुकूलित किया गया था, क्योंकि SPIM माइक्रोस्कोपी पॉइंट-टू-पॉइंट स्कैनिंग के साथ लेजर कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी की तुलना में कम फोटोटॉक्सिसिटी और काफी उच्च छवि कैप्चर दर प्रदान करता है, जो लंबे समय तक इंट्राविटल की अनुमति देता है। अवलोकन, उच्च स्थानिक और लौकिक संकल्प (छवि 9) के साथ काफी बड़े नमूना मात्रा का विश्लेषण करते हुए। 3डी जैल में कैंसर कोशिकाओं की प्रवासन गतिविधि पर Zmpste24 निषेध के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए इस प्रणाली का उपयोग किया जाएगा। 4) जीवित कोशिकाओं में परमाणु लिफाफे के यांत्रिक गुणों पर बहिर्जात लैमिन ए और प्रोजेरिन की अभिव्यक्ति के प्रभाव का स्कैनिंग आयन चालन माइक्रोस्कोपी (एसआईसीएम) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। यह विधि, उच्च पार्श्व और अक्षीय संकल्प के साथ जीवित सुसंस्कृत कोशिकाओं की सतह राहत की उच्च गति स्कैनिंग की संभावना के अलावा, कोशिकाओं के लोचदार गुणों (छवि 10 ए, बी) को मापना संभव बनाती है। एक ग्लास सब्सट्रेट पर फैली कोशिका नाभिक के ऊपर साइटोप्लाज्म की पतली परत के कारण नाभिक के लोच गुणांक का मापन भी संभव है। नाभिक के निर्धारित मापदंडों के लिए साइटोप्लाज्म के योगदान को कम करने के लिए, HT1080 मानव फाइब्रोसारकोमा कोशिकाओं का उपयोग किया गया था, जो उच्च स्तर के प्रसार को दर्शाता है। कोशिकाओं को एक प्लास्मिड एन्कोडिंग GFP-lamin A या GFP-progerin के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया था। अभिकर्मक के बाद दूसरे दिन एक ग्रहण Ti2 उल्टे फ्लोरोसेंट प्लेटफॉर्म (Nikon) पर स्थापित MNT इंस्ट्रूमेंट (मेडिकल नैनोटेक्नोलॉजी एलएलसी) पर माप किए गए थे। पीजोकंट्रोलर पर एक ग्लास माइक्रोपिपेट को स्कैनिंग तत्व के रूप में इस्तेमाल किया गया था (चित्र 10, ए)। स्कैनिंग के लिए कोशिकाओं को GFP चैनल में प्रतिदीप्ति के स्तर के अनुसार चुना गया था। सबसे पहले, अध्ययन के तहत सेल की स्थलाकृति को स्कैन किया गया था। इस मामले में, सतह का पता लगाया जाता है, जब एक ग्लास माइक्रोपिपेट के साथ अपनी सीमा तक पहुंचने पर, आयन वर्तमान ताकत ~ 0.25-1% तक गिर जाती है। इसके बाद, प्रभावी कठोरता का निर्धारण किया गया था, आयन धारा द्वारा धकेलने के बाद झिल्ली के दर्ज अंतिम विस्थापन से गणना की गई थी, और आयन वर्तमान ड्रॉप का अगला बिंदु ~ 1% निर्धारित किया गया था। पूरे सेल को स्कैन किया गया, फिर रिलीफ पर उच्चतम बिंदु पर नाभिक की स्थिति निर्धारित की गई। इस क्षेत्र में, प्रसंस्करण के लिए 10 अंक लिए गए थे, सेल परिधि के साथ अन्य 10 बिंदुओं के लिए कठोरता मूल्य का चयन किया गया था, जबकि इन बिंदुओं को साइटोप्लाज्म के किनारे के पास बिल्कुल भी स्थित नहीं होना चाहिए ताकि सब्सट्रेट कठोरता मान न हो नमूने में गिरना (चित्र 10, ग)। लामेला के क्षेत्र में साइटोप्लाज्म की लोच के लिए नाभिक की लोच के मापन के परिणामों को सामान्यीकृत किया गया था। कई प्रयोगों में, एक्टिन और ट्यूबुलिन साइटोस्केलेटन (नोकोडाज़ोल और साइटोकैलासिन डी की कार्रवाई के तहत) के डिस्सैड की पृष्ठभूमि के खिलाफ माप किए गए थे; बीटा-ट्यूबुलिन या महत्वपूर्ण के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ कोशिकाओं के प्रतिरक्षण का उपयोग करके डिसएस्पेशन की डिग्री का आकलन किया गया था। SIR-actin के साथ धुंधला हो जाना। प्रारंभिक परिणामों ने नाभिक में बहिर्जात GFP-lamin A की सांद्रता और कोशिका नाभिक की कठोरता के बीच एक सीधा संबंध दिखाया (चित्र 11)। माप सटीकता में सुधार, नमूना आकार में वृद्धि, और Zmpste24 अवरोधकों की प्रभावशीलता का अध्ययन करने के लिए विधि (केशिका व्यास का चयन, कठोरता गणना एल्गोरिदम का संशोधन, आदि) को अनुकूलित करने के लिए अनुसंधान जारी रखा जाएगा। 5). संरचनात्मक संगठन और परिधीय हेटरोक्रोमैटिन की स्थिति पर प्रोजेरिन अभिव्यक्ति के प्रभाव का अध्ययन चीनी हम्सटर सेल लाइनों (सीएचओ) के एक मॉडल का उपयोग करके किया गया था, जिसमें एक कृत्रिम क्रोमोसोमल लोकस जिसमें लाख ऑपरेटर के कई अग्रानुक्रम दोहराव होते हैं एकीकृत हो। एक सेल-व्यक्त GFP-Lac रेप्रेसर (रॉबिनेट एट अल, 1996) का उपयोग करके लोकी की कल्पना की गई थी। हमने क्लोन AO_3 का उपयोग किया जिसमें एक प्रवर्धित कृत्रिम स्थान (HSR) होता है, जो उच्च स्तर के हेट्रोक्रोमैटिनाइजेशन को प्रदर्शित करता है और स्थायी रूप से परमाणु लामिना (Li et al, 1998; Zhironkina et al।, 2014) से जुड़ा होता है। CHO AO_3 कोशिकाओं को एक प्लास्मिड एन्कोडिंग GFP-progerin के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया था, 48 घंटों के बाद कोशिकाओं को तय किया गया था और GFP-Lac रेप्रेसर और GFP-progerin के संकेतों को अलग करने के लिए लैमिनेट A के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षित किया गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी और सुपररिज़ॉल्यूशन माइक्रोस्कोपी से पता चला है कि प्रोजेरिन की अभिव्यक्ति एचएसआर क्षेत्र में परिवर्तन या इसमें जीएफपी प्रतिदीप्ति की औसत तीव्रता (छवि 12) द्वारा मूल्यांकन किए गए संघनन की डिग्री में कमी का कारण नहीं बनती है। इसके अलावा, परमाणु लिफाफे के सापेक्ष एचएसआर की स्थिति में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं देखा गया: उच्च स्तर के प्रोजेरिन अभिव्यक्ति वाले कोशिकाओं में, हचिसन-गिलफोर्ड प्रोजेरिया के नाभिक की लोब्युलर संरचना और परमाणु लिफाफे के कई आक्रमणों का गठन प्रकट होते हैं, और एचएसआर हमेशा या तो परमाणु परिधि के साथ या आक्रमण के क्षेत्रों में विटामिन के साथ जुड़ा रहता है। जीएफपी-प्रोजेरिन को व्यक्त करने वाली कोशिकाओं में क्रोमैटिन के अल्ट्रास्ट्रक्चरल संगठन का अध्ययन करने के लिए, जीएफपी के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग किया गया था, इसके बाद माध्यमिक नैनोगोल्ड-लेबल एंटीबॉडी के संकेत के एजी-प्रवर्धन का उपयोग किया गया था। इस दृष्टिकोण ने उज्ज्वल-क्षेत्र ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके प्रकाश-ऑप्टिकल स्तर पर ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं की पहचान करना संभव बना दिया और उन्हें अल्ट्रैथिन वर्गों पर कुशलता से ढूंढा। एडक्ट्रोनिक सूक्ष्म विश्लेषण से पता चला है कि गुणसूत्रों के कृत्रिम गुणसूत्र लोकी और अंतर्जात हेट्रोक्रोमैटिक दोनों क्षेत्र, पहले बताई गई परिकल्पनाओं के विपरीत, अपनी संघनित संरचना को बनाए रखते हैं। हालांकि, इस मामले में, परमाणु लामिना के साथ परिधीय हेटरोक्रोमैटिन के जुड़ाव का नुकसान अक्सर देखा जाता है और नाभिक के आंतरिक क्षेत्रों में इसकी गति होती है (चित्र 13, ए)। इन स्थितियों के तहत, परमाणु लैमिना के महत्वपूर्ण क्षेत्र हेटरोक्रोमैटिन (चित्र 14) के संपर्क से मुक्त रहते हैं। ६)। आणविक मॉडलिंग विधियों का उपयोग करते हुए सबसे होनहार प्रतिस्पर्धी अवरोधकों की श्रेणी की पहचान, आणविक गतिकी विधियों द्वारा एंजाइम-अवरोधक परिसरों की स्थिरता का आगे का अध्ययन, प्रायोगिक अनुसंधान के लिए उम्मीदवार यौगिकों का चयन करने के लिए ZMPSTE24 के लिए, संरचनात्मक जानकारी एक के क्रिस्टलोग्राफिक डेटा द्वारा निर्धारित की गई थी। Saccharomyces cerevisiae Ste24p से पुनः संयोजक मानव एंजाइम और प्रोटीन। इसी समय, ZMPSTE24 कॉम्प्लेक्स की केवल एक संरचना के साथ घुलनशील जस्ता-आश्रित मेटालोप्रोटीज के अवरोधकों में से एक है जो ZMPSTE24, फॉस्फरामिडोन के कमजोर प्रतिस्पर्धी निषेध प्रदान करता है, जिसे क्रिस्टलोग्राफिक विधि के कम रिज़ॉल्यूशन की विशेषता है। ZMPSTE24 की सक्रिय साइट की समानता के बावजूद कुछ जस्ता-आश्रित मेटालोप्रोटीज, जैसे थर्मोलिसिन और नेप्रिल्सिन, फॉस्फोरैमिडोन का बंधन बहुत निचले स्तर पर प्रदान किया गया था। चूंकि इन विट्रो में प्रयोग किए गए, इस वर्ग के अवरोधकों की दवाओं के रूप में प्रभावशीलता का कोई प्रत्यक्ष प्रमाण नहीं था। विवो में कार्रवाई की प्रभावशीलता की उम्मीद फिलहाल किसी भी तरीके से समर्थित नहीं है; इसके अलावा, एंजाइम-लिपिड- के इंटरफेस द्वारा गठित ZMPSTE24 की सक्रिय साइट में जटिल प्रवेश से ऐसे यौगिकों की डिलीवरी में बाधा आ सकती है- जल संपर्क, जैसा कि हमने 2017 वर्ष में काम के पिछले चरण के दौरान वर्णित किया था। दूसरी ओर, यह पाया गया है कि एचआईवी रोगियों के लिए एंटीरेट्रोवाइरल थेरेपी में उपयोग किए जाने वाले अणुओं का एक वर्ग ZMPSTE24 के लिए इन अणुओं के अनुचित बंधन के परिणामस्वरूप उनमें लिपोडिस्ट्रोफी पैदा कर सकता है। उसी समय, लोपिनोविर सबसे प्रभावी तरीका साबित हुआ, जिसके लिए ZMPSTE24 के निषेध के प्रतिस्पर्धी तंत्र को प्रयोगात्मक रूप से दिखाया गया था। वर्णित सीमाओं को ध्यान में रखते हुए, रासायनिक यौगिकों के पुस्तकालयों के लिए सिलिको स्क्रीनिंग योजना में शास्त्रीय का उपयोग, जो एक नियम के रूप में, कार्बनिक अणुओं की बड़ी संख्या में यादृच्छिक या वर्तमान में संश्लेषित संरचनाओं की गणना है और उनके बाद में डॉकिंग है। ZMPSTE24 की स्थिर क्रिस्टलोग्राफिक संरचना अप्रभावी प्रतीत होती है। ZMPSTE24 की संरचना एक अद्वितीय आकार है, जो सात ट्रांसमेम्ब्रेन हेलिकॉप्टरों द्वारा बनाई गई है, जो एक लिपिड बाईलेयर में संलग्न 14,000 क्यूबिक एस्ट्रोम की मात्रा के साथ एक पानी से भरी आंतरिक गुहा को घेरे हुए है। बाध्यकारी ऊर्जाओं की गणना करते समय अधिकांश आधुनिक डॉकिंग कार्यक्रम अपनी गणना में जलीय घोल के एक विशेष रूप से निहित रूप का उपयोग करते हैं और लिपिड बिलीयर के प्रभाव को ध्यान में नहीं रख सकते हैं। एक बाइलेयर में डूबे ZMPSTE24 स्थिर संरचनाओं का उपयोग एंजाइम-लिपिड-वाटर इंटरफेस में गठित पॉकेट्स की विशिष्टता के साथ-साथ उनकी गतिशील विशेषताओं को भी ध्यान में नहीं रख पाएगा - लिपिड लेयर मॉडल हाइड्रोफोबिक की उच्च गतिशीलता मानता है गुहाओं और जेबों की संरचना की तुलना में बिलीयर अणुओं का हिस्सा स्थिर प्रोटीन। इन कारकों का संयोजन अक्षमता की ओर जाता है और एसएआर अध्ययन (संरचना-गतिविधि संबंध) के रूप में अवरोधकों को खोजने का एक लोकप्रिय तरीका है, जो शुद्ध जलीय विलायक के मॉडल के अनुकूल है। इस मामले में सबसे तर्कसंगत तरीके में अणुओं की मूल संरचना का उपयोग शामिल है, जिसकी क्षमता को पहले से ही इन विट्रो और विवो प्रयोगों में दिखाया गया है, संशोधनों की खोज के लिए एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में, जिसकी शुरूआत उच्च प्रदान करेगी बाध्यकारी दक्षता। फिलहाल, सबसे अच्छे उम्मीदवार सिंथेटिक पेप्टिडोमिमेटिक्स हैं जिनका उपयोग एस्पार्टेट प्रोटीज, सहित के निषेध में किया जाता है। और एचआईवी प्रोटीज। अणुओं के ऐसे वर्ग की क्रिया के तंत्र की खोज करने के लिए, जो अभी भी ZMPSTE24 के लिए अज्ञात है, हमने बाध्यकारी साइटों की खोज के लिए एक सिलिको विधि विकसित की, साथ ही समाधान से अणुओं को वितरित करने के लिए मार्ग, दोनों एंजाइमों को ध्यान में रखते हुए- लिपिड-वाटर इंटरफेस और एंजाइम और आसपास की झिल्ली की बहुत गतिशील संरचना। विधि एक विस्तारित मेटाडायनामिक्स विधि (नीचे देखें) के संयोजन में आणविक गतिशीलता मॉडलिंग के अनुप्रयोग पर आधारित है। इस दृष्टिकोण का महत्व इस तथ्य के कारण है कि साहित्य में पहले से ही एचआईवी प्रोटीज पेप्टिडोमिमेटिक्स की संरचनाओं को संशोधित करने का प्रयास किया गया है, जो एस्पार्टेट प्रोटीज और जिंक-निर्भर घुलनशील प्रोटीज की सामान्य यांत्रिक क्रिया की परिकल्पना पर आधारित है। सादृश्य से, ZMPSTE24 के लिए तंत्र प्रस्तावित किया गया था। इसी समय, इस परिकल्पना की पुष्टि किसी भी संरचनात्मक अध्ययन से नहीं हुई है। हमारे अध्ययन के दौरान, एचआईवी प्रोटीज के पेप्टिडोमिमेटिक्स की कार्रवाई का एक पूरी तरह से नया तंत्र खोजा गया, जो एक प्रभावी अवरोधक ZMPSTE24 के तर्कसंगत डिजाइन के लिए कई विशेषताओं और विचारों को खोलता है। विकसित एल्गोरिथम को लिपिड बाईलेयर में डूबे ZMPSTE24 की पूरी सतह के साथ-साथ इसकी आंतरिक गुहा में और सतह की मोटाई में सतह से कुछ दूरी पर संभावित गठनात्मक अवस्थाओं और लोपिनोविर बाइंडिंग के प्रकारों के वितरण को निर्धारित करने के लिए लागू किया गया था। समाधान, जलीय और लिपिड दोनों। इसने सभी संभावित बाध्यकारी साइटों पर लोपिनोविर के बंधन को ऊर्जावान रूप से मूल्यांकन करना संभव बना दिया, साथ ही उनके बीच की बाधाओं और बाहरी विलायक से संभावित प्रवास मार्गों का आकलन करना संभव बना दिया। इस तरह के ऊर्जा मानचित्र चरण स्थान के तीन निर्देशांक के सापेक्ष बनाए जाते हैं और चयनित चर और आइसोसर्फेस (चित्र। 1,2) में से एक के व्यक्तिगत मूल्यों पर स्लाइस के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। वे। प्राप्त बहुआयामी ऊर्जा मानचित्रों की व्याख्या करने के लिए, केवल एक चर के निश्चित मूल्यों का उपयोग करना सुविधाजनक है, उदाहरण के लिए, एंजाइम के द्रव्यमान के केंद्र से लोपिनोविर के द्रव्यमान के केंद्र की दूरी, लेकिन इसके सापेक्ष वितरण को आकर्षित करने के लिए अन्य दो चर - कोणीय और । विश्लेषण से पता चलता है कि एक जलीय घोल से झिल्ली में लोपिनोविर का प्रवेश एक अवरोध की उपस्थिति के कारण मुश्किल है। यह अवरोध लिपिड बाईलेयर की संरचनात्मक विशेषताओं के परिणामस्वरूप बनता है: झिल्ली बनाने वाले फॉस्फोलिपिड्स के आवेशित भाग - फॉस्फेटिडिलकोलाइन और फॉस्फेटिडेलेथेनॉलमाइन - जलीय घोल की ओर उन्मुख होते हैं, जो एक द्विध्रुवीय सतह क्षमता का निर्माण करते हैं, जो प्रारंभिक चरण में होता है। झिल्ली में लोपिनोविर का मार्ग एक बाधा प्रदान करता है, दोनों स्टेरिक और संभवतः, लिपिड-जल प्रणालियों में मनाया जाने वाला एन्ट्रोपिक। चूंकि लोपिनवीर एक हाइड्रोफोबिक यौगिक है, लिपिड परत में इसका प्रवेश अपने आप में एक लाभकारी प्रक्रिया है। हालाँकि, झिल्लियों में इसकी सांद्रता का मार्ग सतह द्विध्रुवीय क्षमता द्वारा निर्मित अवरोध से होकर गुजरता है। इसी समय, यह देखा जा सकता है कि लोपिनवीर का मेब्राना में प्रवेश 60 के मूल्यों की सीमा में ऊर्जावान रूप से अधिक अनुकूल है।<θ<75 и -160<φ<-180. Эта область соответствует границе липидной мембраны с водным раствором над входом во внутреннюю полость ZMPSTE24, используемым белковым субстратом для проведения каталитического протеолиза. Детальное исследование этой области в процессе молекулярной динамики позволило выявить проседание липидного бислоя вблизи входа в активный центр фермента относительно общей поверхности мембраны (Рис.3). Подобное проседание обеспечивается специфическим распределением заряда на поверхности ZMPSTE24, показанное в ходе одного из этапов работы в 2017г. По всей видимости, мы предполагаем, что проседание формирует разрыв в дипольной части бислоя и облегчает доступ гидрофобных молекул к внутренней гидрофобной части мембраны. Однако, при этом, наименьшим значением энергии соответствует связывание лопинавира на интерфейсе, образованным входом в активный центр фермента и липидным бислоем (75<θ<100 и -160<φ<-180,160<φ<180). Несмотря на возможность проникновения лопиновира во внутреннюю полость фермента, специфического взаимодействия с остатками каталитического центра или областью связывания субстрата обнаружено не было (Рис. 1). Косвенно эти результаты подтверждаются отсутствием кристаллографической структуры ZMPSTE24 в комплексе с лопинавиром в активном центре. Обнаруженный нами механизм связывания также подтверждает и ингибирование лопинавиром фермента по конкурентному типу. Мы также провели подобное исследование в системе фермент-вода без липидного слоя. Подобного типа связывания обнаружено не было (Рис. 2). Это может объяснить отсутствие электронной плотности лопинавира в кристаллах ZMPSTE24, выращенных при добавлении ингибитора, ввиду отсутствия в кристаллах упорядоченной структуры мембраны. Для установления специфических взаимодействий лопинавира в процессе связывания на входе в активный центр мы провели кластерный анализ ансамбля структур ингибитора, обнаруженных в процессе его нахождения в обнаруженном нами центре связывания. Для этого был использован непараметрический байесовский метод кластеризации по основным двугранным углам, определяющим конформацию лопинавира (см. ниже). На предмет специфических взаимодействий был использован самый населенный кластер. Ориентация и конформация лопинавира характеризуется стэкинг-взаимодействием одной из боковых фенильных групп с фениаланиновым аминокислотным остатком фермента, обеспечивающих структуру петли на входе в активный центр, плотным контактном гидрофобных групп аминокислот образующих вход спиралей фермента с боковыми гидрофобными группами лопинавира. Также гидрофобные группировки лопинавира частично остаются в липидном бислое. Кетотетрагидропиримидиновая группировка лопинавира – наиболее полярная часть ингибитора – обращена во внутренню полость фермента, наполненную молекулами воды. Таким образом, мы предлагаем данный центр связывания, как наиболее перспективный с точки зрения связывания конкурентных ингибиторов пептидомиметиков, ввиду наличия как функционально важных заряженных и гидрофобных групп фермента со специфическим паттерном распределения в пространстве, так и особым способом доставки и проникновения в мембрану. В метадинамике к основному потенциалу системы добавляется смещающий гауссов потенциал от коллективных переменных через определенные промежутки времени (формула 1). Высота ω и ширина δs гауссова потенциала и частота τG добавления этого смещающего потенциала к полному потенциалу системы, а также выбор коллективных переменных (CV) являются важнейшими параметрами при таком моделировании. Для построения полной трехмерной карты свободной энергии лопинавира при движении относительно ZMPSTE24 мы должны были подобрать такие CV, который бы описывал этот процесс наиболее точно. Каждую точку на поверхности белка в системе координат связанной с центром масс белка можно задать тремя переменными: два сферических угла θ и φ и расстояние между центром масс белка и лиганда r (Рис. 4). ZMPSTE24 представляет собой мембранный белок, содержащий структуру из трансмембранных альфа-спиралей, образующих камеру внутри белка существенного объем. Поэтому выбор именно таких трех коллективных переменных позволяет исследовать внешнюю и внутреннюю поверхности белка, а также процесс проникновения лопинавира в камеру внутри фермента. Таким образом положение лиганда относительно центра масс белка описывалось обычными сферическими координатами, которые легко перерассчитывались из декартовых компонент радиус-вектора между белком и лигандом (формула 2). Значение ω для потенциала смещения равнялось 5 кДж/моль, ширина потенциалов δsθ и δsφ выбраны 0.1 радиан и 1Å для δsr. Такой выбор этих параметров позволил плавно исследовать всю поверхность свободной энергии. При движение лопинавира от одной точки поверхности белка к другой может быть энергетически выгодно его смещение в раствор. Однако отдаление на значительное расстояние может, с одной стороны, замедлить расчеты, а с другой внести артефакты, связанные с сильным изменением радиуса. Чтобы избежать сильного удаления лопиновира от белка было введено ограничение на координационное число. Координационное число позволяет количественно охарактеризовать степень близости лиганда к белку и рассчитывается по формуле 3. Само число состоит из слагаемых sij, которые равняются 1, если атом j, в данном случае, лиганда расположен не дальше, чем на расстоянии r0 от атома белка i (то есть образует «контакт»), и в любом другом случае равно нулю. Введения ограничения на координационное число позволяет, варьируя параметр r0, контролировать расстояние, на которое ингибитор может отходить от поверхности белка. Параметры для ограничения системы по координационному числу были подобраны в ходе ряда калибровочных запусков метадинамики таким образом, чтобы лиганд имел возможность отходить от белка на расстояние, на котором между ними может оказать растворитель, но при этом достаточно малое, чтобы в случае можно было почувствовать взаимодействие с поверхностью. При сильном отдалении лопиновира от белка средства программы для метадинамики вводят дополнительную энергию таким образом, чтобы сблизить их друг с другом. Это, без дополнительного контроля, может привести к тому, что белок может начать разрушаться. Так происходит потому, что при удалении ингибитора все меньше атомов белка будут находиться в контакте с ингибитором (Рис. 5), а это, в свою очередь, приведет к тому, что системе может оказаться более выгодным начать разрушение белка вместо того, чтобы двигать лиганд в сторону поверхности. Для предотвращения такого исхода дополнительно было введено ограничение значение RMSD всех атомов основной цепи белка. Такой выбор атомов для RMSD позволил предотвратить разрушение структуры фермента, но также не стал препятствием для свободного движения аминокислотных радикалов, которое может происходить в растворе, при взаимодействии с мембраной, а также при взаимодействии с ингибитором. Молекула лопинавира не является стандартной для атомных силовых полей. Точечные заряды на атомах были рассчитаны с применением процедуры RESP. Однако, лопинавир – достаточно большая молекула, поэтому для расчета зарядов он был логично разделен на три части, которые были параметризованы по отдельности (Рис. 6). Такой подход позволил избежать возможных артефактов при расчете заряда, в связи с наличием большего количества конформеров лопинавира. Кроме того, при дальнейшем поиске новых ингибиторов на основе лопинавира, можно будет легко заменять одну или две части молекулы, используя уже известные параметры для остальных константных частей. Параметры силового поля для атомов были выбраны в соответствии с атомным силовым полем GAFF (General Amber Force Field). Молекулярно механическая энергия итоговой молекулы была сопоставлена с квантовой энергией. Сравнение показало, что молекулярно механическая модель, рассчитанные точечные заряды и выбранные параметры поля с высокой степенью точности совпадает с квантовой. Кластеризацию цельной структуры субстрата проводили на базе значений дигедральных углов между углеводными мономерами, с использованием следующей модификации: Отображение фазового пространства углов – в общем случае L-мерного бокса Pc (формула 4). Продуктом отображения является тор Te – L-мерная поверхность на единичной сфере S2L-1. Отображение является локальной изометрией с сохранением меры расстояний. Преобразованные переменные использовали для кластеризации с помощью Байесовского непараметрического метода, имплементированного в программе dpMMlowVar. Оптимизацию углового параметра для данного метода проводили в пределах [-0.6;-0.3] с шагом 0.01 на основании оценочной функции силуэт. При визуализации результатов кластеризации использовали метод главных компонент для трансформированных значений углов с выделением первых трех главных компонент.

परिचय... हाल के वर्षों में, आणविक आनुवंशिकी की सफलताओं के संबंध में, जिसके कारण महत्वपूर्ण संख्या में मोनोजेनिक वंशानुगत रोगों के जीनों का मानचित्रण और पहचान हुई, उनकी वर्गीकरण संरचना बनाने में कठिनाइयाँ उत्पन्न होने लगीं। उदाहरण के लिए, एक ही जीन में उत्परिवर्तन एक ही बीमारी (एलिसिक विषमता) के नैदानिक ​​​​रूपों की विभिन्न गंभीरता की अभिव्यक्ति और विभिन्न नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों (तथाकथित "एलिलिक श्रृंखला") के नोसोलॉजिकल रूपों के उद्भव का कारण बन सकता है। रोगों के समूहों में से एक जो एलील श्रृंखला बनाते हैं वे लैमिनोपैथी हैं। वे एलएमएनए जीन में उत्परिवर्तन के कारण होते हैं, जिससे लैमिनेट ए / सी प्रोटीन की संरचना और कार्य में परिवर्तन होता है (लैमिनोपैथी ऐसी बीमारियां हैं जो परमाणु लैमिना प्रोटीन के जीन में उत्परिवर्तन के परिणामस्वरूप विकसित होती हैं - नीचे देखें)।

यह ज्ञात है कि कोशिका नाभिक की झिल्ली में तीन मुख्य घटक होते हैं (चित्र देखें): [ 1 ] बाहरी झिल्ली, [ 2 ] भीतरी झिल्ली और [ 3 ] इसके नीचे पड़ी एक पतली परमाणु लामिना - एक परमाणु लामिना (लैमिना: लेट। - लैमिना), प्रोटीन परिसरों द्वारा बनाई गई है, जिसमें विटामिन के विभिन्न समूह (लैमिना प्रोटीन - नीचे देखें) शामिल हैं। लैमिन फिलामेंट्स समानांतर सुपरकोल्ड डिमर बनाते हैं, जो पोलीमराइज़िंग, आंतरिक परमाणु झिल्ली के न्यूक्लियोप्लास्मिक पक्ष पर एक रेशेदार नेटवर्क बनाते हैं, जो आंतरिक और बाहरी दोनों परमाणु झिल्ली के मल्टीप्रोटीन कॉम्प्लेक्स के लिए एक लंगर के रूप में कार्य करते हैं (नोट: विटामिन 5 वीं कक्षा के हैं। सभी यूकेरियोटिक कोशिकाओं में मौजूद मध्यवर्ती तंतु, यानी सभी कोशिकाओं में एक गठित नाभिक के साथ)।

इस प्रकार, विटामिन संरचनात्मक प्रोटीन होते हैं (60 - 89 kDa का द्रव्यमान होता है), एक परमाणु लामिना के घटक - एक प्रोटीन नेटवर्क जो नाभिक के आंतरिक झिल्ली के नीचे स्थित होता है और इसके आकार और आकार को निर्धारित करता है (यानी, यांत्रिक आसंजन में भाग लेता है और न्यूक्लियोस्केलेटन और साइटोस्केलेटन प्रोटीन की परस्पर क्रिया)। न्यूक्लियर लैमिना न्यूक्लियर लिफाफा की ताकत और न्यूक्लियर पोर्स को ऑर्गनाइज करती है, विरूपण की ताकतों का विरोध करती है और क्रोमेटिन को शारीरिक क्षति से बचाती है। जैसा कि हाल के अध्ययनों से पता चलता है, संरचनात्मक कार्य के साथ, विटामिन डीएनए प्रतिकृति, क्रोमैटिन संगठन के नियंत्रण में और जीन अभिव्यक्ति, प्रसंस्करण और एपोप्टोसिस के नियमन में शामिल हैं।

जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, परमाणु लैमिना में चार लैमिना प्रोटीन होते हैं: ए, बी 1, बी 2 और सी। लैमिन्स बी 1, बी 2 (जिसे बी-टाइप लैमिन्स भी कहा जाता है) दो जीनों, एलएमएनबी 1 और एलएमएनबी 2 (क्रोमोसोम 5q23 और 19q13 पर स्थानीयकृत) द्वारा एन्कोडेड हैं। क्रमशः) और बहुकोशिकीय जंतुओं की सभी कोशिकाओं में संश्लेषित होते हैं। लैमिन्स ए और सी (तथाकथित ए-टाइप लैमिन्स [या लैमिन ए/सी]) एक एलएमएनए जीन (पहले क्रोमोसोम 1q21.2-q21.3 पर स्थित और 12 एक्सॉन से मिलकर) के वैकल्पिक स्प्लिसिंग के उत्पाद हैं और सभी कशेरुकी जंतुओं के विभेदित ऊतकों में तुलनीय मात्रा में पाए जाते हैं। व्यक्ति।

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ध्यान दें! हाल के अध्ययन लैमिन्स को मुख्य प्रोटीनों में से एक के रूप में मानने का कारण देते हैं जो कोशिका विभाजन की प्रक्रिया में परमाणु झिल्ली के विघटन और बहाली के सिंक्रनाइज़ेशन को सुनिश्चित करते हैं। यह दिखाया गया है कि कोशिका विभाजन के प्रोफ़ेज़ में विटामिन का फॉस्फोराइलेशन होता है, जिससे उनका विघटन होता है, जो परमाणु लिफाफे के विनाश का संकेत है। इसके विपरीत, टेलोफ़ेज़ में, विटामिन का डीफॉस्फोराइलेशन होता है, जिससे उनका एकत्रीकरण होता है। यह माना जाता है कि लैमिनों के पुन: ध्रुवीकरण की प्रक्रिया परमाणु लिफाफे की बहाली को उत्तेजित करती है। यह डेटा से प्रमाणित होता है कि कोशिका चक्र के प्रोफ़ेज़ में विघटित परमाणु झिल्ली के टुकड़ों के साथ विटामिन का कनेक्शन बरकरार रखा जाता है, और वे इसकी बहाली के दौरान परमाणु लिफाफे के टुकड़ों के लिए एक प्रकार का "लेबल" होते हैं।

इस प्रकार, लैमिनास के मुख्य कार्य हैं: [ 1 ] परमाणु लिफाफे के आकार और अखंडता को बनाए रखने में 1 महत्वपूर्ण भूमिका; [ 2 ] क्रोमैटिन का संगठन और परमाणु छिद्रों का वितरण; [ 3 ] डीएनए प्रतिकृति और प्रतिलेखन, समसूत्री घटनाओं और एपोप्टोसिस की प्रक्रियाओं का स्थानिक संगठन; [ 4 ] विभिन्न संकेतन पथों में भागीदारी; [ 5 ] जीनोम संगठन।

LMNA जीन में उत्परिवर्तन एक दर्जन से अधिक बीमारियों के विकास के लिए जिम्मेदार हैं जिन्हें लैमिनोपैथी कहा जाता है, जो विभिन्न ऊतकों को अलग-अलग (कंकाल की मांसपेशी और मायोकार्डियम, वसा ऊतक, परिधीय तंत्रिका) और व्यवस्थित रूप से (समय से पहले बूढ़ा सिंड्रोम) दोनों को प्रभावित करते हैं। ओवरलैपिंग फेनोटाइप्स भी नोट किए जाते हैं। व्यापक नैदानिक ​​​​परिवर्तनशीलता के साथ, स्पष्ट आनुवंशिक विविधता भी विशेषता है।

ध्यान दें! आज तक, यह दिखाया गया है कि एलएमएनए जीन (एन्कोडिंग प्रकार ए लैमिनास [लैमिनस ए / सी]) में उत्परिवर्तन एटियलॉजिकल कारक 11 ( ! ) स्वतंत्र नोसोलॉजिकल रूप जो वंशानुगत रोगों के पांच समूहों का हिस्सा हैं - प्रगतिशील पेशी अपविकास, पतला कार्डियोमायोपैथी, लिपोडिस्ट्रोफी, वंशानुगत मोटर-संवेदी न्यूरोपैथी और समय से पहले उम्र बढ़ने के सिंड्रोम। सबसे अधिक बार, LMNA जीन में उत्परिवर्तन कंकाल की मांसपेशियों, मायोकार्डियम और वसा ऊतक को नुकसान पहुंचाते हैं, बहुत कम अक्सर वे प्रोजेरॉइड सिंड्रोम, वंशानुगत न्यूरोपैथी और घातक प्रतिबंधात्मक डर्मोपैथी के एटियलॉजिकल कारक होते हैं। साथ ही, उपरोक्त सिंड्रोम स्वयं विटामिन के जीन में और साथी प्रोटीन (एसआरईबीपी 1, एमेरिन) और विटामिन के प्रसंस्करण में शामिल एंजाइमों के जीन में उत्परिवर्तन के कारण हो सकते हैं।

नोट: एमडी ईडी - एमरी-ड्रेफस मस्कुलर डिस्ट्रॉफी; केपी एमडी - लिम्ब-गर्डल मस्कुलर डिस्ट्रॉफी; एमडी - मस्कुलर डिस्ट्रॉफी; डीसीएमपी - पतला कार्डियोमायोपैथी; केएमपी - कार्डियोमायोपैथी; एडी - ऑटोसोमल प्रमुख विरासत; एआर - ऑटोसोमल रिसेसिव इनहेरिटेंस

टुकड़े टुकड़े से जुड़े रोगों के विकास के सटीक तंत्र का अभी तक विस्तार से अध्ययन नहीं किया गया है। देखे गए पैथोलॉजिकल फेनोटाइप की व्याख्या करने वाली दो मुख्य परिकल्पनाएं हावी हैं: संरचनात्मक परिकल्पना और "जीन अभिव्यक्ति" परिकल्पना। पहले के अनुसार, लैमिनस की कमी या उत्परिवर्तित लैमिना प्रोटीन के गलत संयोजन से न्यूक्लियर लैमिना की ताकत में कमी आती है और न्यूक्लियस और संपूर्ण रूप से सेल की भेद्यता में वृद्धि होती है। सबसे पहले, कोशिकाएं जो यांत्रिक तनाव से गुजरती हैं, जैसे कि मांसपेशी कोशिकाएं और कार्डियोमायोसाइट्स, अपक्षयी परिवर्तनों के विकास से ग्रस्त हैं। दूसरी परिकल्पना परमाणु लामिना और प्रतिलेखन कारकों के बीच संबंधों के उल्लंघन का सुझाव देती है। हाल ही में, एक और परिकल्पना तैयार की गई थी जिसके अनुसार ए / सी विटामिन का उत्परिवर्तन या ए-प्रकार के विटामिन की अनुपस्थिति रोगजनन के तीसरे तंत्र को उत्तेजित कर सकती है - अस्थायी विघटन (परमाणु झिल्ली की अखंडता के उल्लंघन के कारण), जिससे अपर्याप्तता हो सकती है। परमाणु और साइटोप्लाज्मिक घटकों के बीच विनिमय।

निम्नलिखित स्रोतों में लैमिन से संबंधित रोगों के बारे में अधिक जानकारी:

लेख "वंशानुगत लैमिनोपैथी की नैदानिक ​​​​और आनुवंशिक विशेषताएं" ई.एल. दडाली, डी.एस. बिलेवा, आई.वी. उगारोव; रूसी एकेडमी ऑफ मेडिकल साइंसेज, मॉस्को का मेडिकल जेनेटिक साइंटिफिक सेंटर; आनुवंशिकी विभाग, चिकित्सा और जीव विज्ञान संकाय, रूसी राज्य चिकित्सा विश्वविद्यालय, मॉस्को (पत्रिका "नैदानिक ​​और प्रायोगिक न्यूरोलॉजी के इतिहास" संख्या 4, 2008) [पढ़ें];

लेख "फैला हुआ कार्डियोमायोपैथी और उनके फेनोटाइपिक अभिव्यक्तियों वाले रोगियों में लैमिन ए / सी जीन (एलएमएनए) का उत्परिवर्तन" वैखानस्काया टीजी, सिवित्स्काया एलएन, डैनिलेंको एनजी, कुरुशको टीवी, डेविडेंको ओजी। ; रिपब्लिकन साइंटिफिक एंड प्रैक्टिकल सेंटर "कार्डियोलॉजी", रक्त परिसंचरण के नैदानिक ​​पैथोफिज़ियोलॉजी का कार्यात्मक समूह, मिन्स्क, बेलारूस; स्टेट साइंटिफिक इंस्टीट्यूशन "इंस्टीट्यूट ऑफ जेनेटिक्स एंड साइटोलॉजी", नेशनल एकेडमी ऑफ साइंसेज, नॉनक्रोमोसोमल आनुवंशिकता की प्रयोगशाला, मिन्स्क, बेलारूस (यूरेशियन जर्नल ऑफ कार्डियोलॉजी, नंबर 1, 2016) [पढ़ें];

चिकित्सा विज्ञान के उम्मीदवार की डिग्री के लिए शोध प्रबंध। "नैदानिक ​​​​और आनुवंशिक विविधता और एमरी-ड्रेफस मस्कुलर डिस्ट्रॉफी के आणविक निदान" अदयान तागुई अवेतिकोवना, संघीय राज्य बजटीय वैज्ञानिक संस्थान "मेडिकल जेनेटिक रिसर्च सेंटर", मॉस्को, 2015 [पढ़ें];

प्रस्तुति "प्रोजेरिया - हचिंसन-गिलफोर्ड प्रोजेरिया सिंड्रोम (HGPS)" एस। कोकोरिन, ई। पॉडखलुज़िना, वी। स्मिरनोव; आणविक जीव विज्ञान पर संगोष्ठी; १२/२५/२०१० (जैव सूचना विज्ञान संस्थान) [पढ़ें];

लेख "पारिवारिक आंशिक लिपोडिस्ट्रॉफी (डुनिगन सिंड्रोम) LMNA जीन में एक उत्परिवर्तन के कारण: रूस में एक नैदानिक ​​मामले का पहला विवरण" सोर्किना, एम.एफ. कलाश्निकोव, जी.ए. मेल्निचेंको, ए.एन. ट्यूलिप; एंडोक्रिनोलॉजी विभाग, सामान्य चिकित्सा संकाय, उन्हें। सेचेनोव, रूस के स्वास्थ्य मंत्रालय, मास्को; रूस, मास्को के स्वास्थ्य मंत्रालय के संघीय राज्य बजटीय संस्थान "एंडोक्रिनोलॉजिकल रिसर्च सेंटर" (पत्रिका "चिकित्सीय संग्रह" संख्या 3, 2015) [पढ़ें]

© लेसस डी लिरो

सर्गेई लावरोव ने कहा कि इंटरमीडिएट-रेंज न्यूक्लियर फोर्सेस ट्रीटी (INF ट्रीटी) को तोड़ने से परमाणु संघर्ष का खतरा बढ़ जाएगा। विदेश मंत्री के अनुसार, रूस सैन्य-तकनीकी साधनों के साथ समझौते से अमेरिका की वापसी का जवाब देगा

सर्गेई लावरोव (फोटो: व्लादिमीर एस्टापकोविच / आरआईए नोवोस्ती)

किर्गिस्तान की राजधानी में एक विश्वविद्यालय में बोलते हुए, रूसी विदेश मंत्रालय के प्रमुख ने आईएनएफ संधि से हटने के वाशिंगटन के फैसले पर टिप्पणी की, आरआईए नोवोस्ती ने बताया। मंत्री के अनुसार, हम एक नए युग की शुरुआत के बारे में बात कर रहे हैं, जब संयुक्त राज्य अमेरिका ने "पूरे हथियार नियंत्रण प्रणाली को नष्ट करने के लिए एक कोर्स किया।"

लावरोव ने कम-उपज वाले परमाणु हथियार बनाने के लिए संयुक्त राज्य की योजनाओं का भी उल्लेख किया। उनके अनुसार, यह सब परमाणु हथियारों के उपयोग की सीमा को कम करेगा और संघर्ष के जोखिम को बढ़ाएगा।

रूसी मंत्री ने सुझाव दिया कि जो हुआ उसका परिणाम शीत युद्ध और हथियारों की दौड़ का विकास होगा। हालांकि, मास्को "सैन्य-तकनीकी साधनों" के साथ उभरते खतरों का जवाब देगा।

रणनीतिक स्थिरता पर रूसी-अमेरिकी संवाद की संभावनाओं के संबंध में, लावरोव ने आशा व्यक्त की कि "संयुक्त राज्य अमेरिका अपनी नीति से उत्पन्न समस्याओं के लिए अपनी जिम्मेदारी को समझने के लिए परिपक्व होगा। मंत्री ने कहा, "फिर आपका स्वागत है, दरवाजे खुले हैं, हम एक-दूसरे के वैध हितों को ध्यान में रखते हुए समान शर्तों पर बात करेंगे, न कि काल्पनिक।"

रूस ने अमेरिकी अधिकारियों के कार्यों का जवाब दिया। राष्ट्रपति व्लादिमीर पुतिन ने लावरोव और रक्षा मंत्री सर्गेई शोइगु के साथ बैठक में संधि में भागीदारी को स्थगित करने की घोषणा की। उसी समय, राज्य के प्रमुख ने जोर देकर कहा कि रूस हथियारों की दौड़ में शामिल होने का इरादा नहीं रखता है, जो मॉस्को के लिए महंगा है।

अमेरिकी निर्णय का कारण रूसी 9M729 क्रूज मिसाइल था, जिसे इस्कंदर-एम लांचर का उपयोग करके लॉन्च किया गया था। अमेरिकी अधिकारियों ने रूस पर INF संधि का उल्लंघन करने का आरोप लगाते हुए इस मिसाइल के विकास को निलंबित करने की मांग की। मास्को इन आरोपों से इनकार करता है। सर्गेई लावरोव ने कहा कि अमेरिकी पक्ष ने 1999 में संधि का उल्लंघन करना शुरू किया, जब संयुक्त राज्य अमेरिका ने मानव रहित हवाई वाहनों का मुकाबला करना शुरू किया।

1987 में संयुक्त राज्य अमेरिका और यूएसएसआर के बीच इंटरमीडिएट-रेंज और शॉर्टर-रेंज मिसाइल संधि पर हस्ताक्षर किए गए थे। यह छोटी (500 से 1,000 किमी) और मध्यम दूरी (1,000 से 5.5 हजार किमी) की जमीन-आधारित मिसाइलों के परीक्षण, उत्पादन और सेवा में लगाने पर प्रतिबंध लगाता है। पार्टियों ने INF संधि पर हस्ताक्षर करने के बाद तीन साल के भीतर पहले से ही सेवा में मौजूद ऐसी मिसाइल प्रणालियों को नष्ट करने का भी वादा किया। संधि से हटने से ऐसे हथियारों के विकास और उत्पादन की ओर लौटना संभव हो जाता है।

न्यूक्लियर लैमिना लैमिना नामक मध्यवर्ती फिलामेंट प्रोटीन से बना होता है
न्यूक्लियर लैमिना आंतरिक न्यूक्लियर मेम्ब्रेन के पीछे स्थित होता है और इंटीग्रल मेम्ब्रेन प्रोटीन द्वारा शारीरिक रूप से इससे जुड़ा होता है
न्यूक्लियर लैमिना न्यूक्लियर लिफ़ाफ़े के संयोजन में शामिल होता है और इसके भौतिक समर्थन के कार्य कर सकता है
न्यूक्लियर लैमिना प्रोटीन के माध्यम से क्रोमैटिन से जुड़ा होता है। यह डीएनए प्रतिकृति और प्रतिलेखन में इसकी भूमिका निर्धारित कर सकता है।
खमीर और कुछ अन्य एककोशिकीय यूकेरियोट्स में परमाणु लैमिना की कमी होती है

आंतरिक परमाणु झिल्ली के पीछे स्थित मध्यवर्ती तंतुओं के एक नेटवर्क की उपस्थिति मेटाज़ोआ कोशिकाओं के नाभिक में निहित एक विशिष्ट विशेषता है। जैसा कि नीचे दिए गए चित्र में दिखाया गया है, लैमिना का अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा आसानी से पता लगाया जाता है, जो इसकी संरचना को बनाने वाले प्रोटीन में से एक के प्रति एंटीबॉडी का उपयोग करता है।

इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी में लैमिनव्यक्तिगत तंतुओं के एक नेटवर्क की तरह दिखता है। यह आंकड़ा आंतरिक परमाणु झिल्ली के ठीक पीछे स्थित विशिष्ट अव्यवस्थित लैमिना फिलामेंट्स को भी दर्शाता है।

प्रोटीन परमाणु लामिना(जिन्हें विटामिन कहा जाता है) साइटोप्लाज्म के मध्यवर्ती तंतुओं के केराटिन प्रोटीन से मिलते जुलते हैं। केरातिन की तरह, उन्हें मध्यवर्ती फिलामेंट प्रोटीन कहा जाता है, क्योंकि वे जो फिलामेंट बनाते हैं (10-20 एनएम) एक्टिन माइक्रोफिलामेंट्स (7 एनएम) और सूक्ष्मनलिकाएं (25 एनएम) के बीच आकार में मध्यवर्ती होते हैं। लैमिना फिलामेंट्स की अखंडता का उल्लंघन वाईपीसी द्वारा किया जाता है, जो इससे जुड़े होते हैं।

मध्यवर्ती तंतु के प्रोटीन के साथ, परमाणु लामिनाइसमें लैमिना-एसोसिएटेड प्रोटीन (एलएपी) नामक इंटीग्रल मेम्ब्रेन प्रोटीन का एक सेट भी होता है। इनमें से कुछ प्रोटीन लैमिना और नाभिक की आंतरिक झिल्ली के बीच परस्पर क्रिया में शामिल होते हैं। जैसा कि नीचे दिए गए चित्र में दिखाया गया है, लैमिना दो प्रकार के बंधों द्वारा आंतरिक परमाणु झिल्ली से जुड़ी होती है। एक प्रकार लैमिना के प्रोटीन और नाभिक के आंतरिक झिल्ली के अभिन्न प्रोटीन के बीच बनता है। दूसरा प्रकार आंतरिक परमाणु झिल्ली के लिपिड फ़ार्नेसिल समूह के साथ विटामिन की पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला की बातचीत से उत्पन्न होता है।

फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके परमाणु लैमिना की कल्पना करने के लिए, लैमिना प्रोटीन (बॉक्स में) के एंटीबॉडी का उपयोग किया गया था।
इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से ली गई तस्वीर में न्यूक्लियर पोयर कॉम्प्लेक्स (एनपीसी) और न्यूक्लियर लैमिना फिलामेंट्स के न्यूक्लियर बास्केट दिखाई देते हैं।

पादप जीनोम में नहीं होता है परमाणु लामिना जीनहालांकि, पौधों में अन्य संरचनात्मक प्रोटीन होते हैं जो स्तनधारी कोशिका लैमिन के समान कार्य करते हैं। यीस्ट (S. cerevisiae और S. pombe) और कुछ अन्य एककोशिकीय यूकेरियोट्स में विटामिन नहीं होते हैं और इसलिए वे विटामिन नहीं बनाते हैं। इसे किससे जोड़ा जा सकता है?

कम से कम हैं दो संभावित कारणखमीर कोशिकाओं (व्यास में लगभग 1 माइक्रोन) और बहुकोशिकीय जीवों (व्यास में लगभग 10 माइक्रोन) में नाभिक के आकार में अंतर द्वारा एककोशिकीय जीवों में लैमिना की अनुपस्थिति की व्याख्या करना। पहली संभावना यह है कि यीस्ट कोशिकाओं को बंद माइटोसिस की विशेषता होती है, जिसमें परमाणु झिल्ली पूरे समय बरकरार रहती है। इसके विपरीत, बहुकोशिकीय यूकेरियोट्स की कोशिकाओं में, माइटोसिस की शुरुआत में परमाणु लिफाफा नष्ट हो जाता है। गुणसूत्रों के पृथक्करण के बाद, गुणसूत्रों के प्रत्येक सेट के चारों ओर एक नया परमाणु लिफाफा बनता है। ऐसा माना जाता है कि इस समय नाभिक के संगठन के पुनर्गठन में लैमिना प्रमुख भूमिका निभाता है।

दूसरा, लैमिना मेटाज़ोआ कोशिकाओं में बड़े परमाणु लिफाफे के लिए अतिरिक्त संरचनात्मक सहायता प्रदान कर सकता है।

भूमिका के साथ-साथ परमाणु लामिनानाभिक की संरचना के संयोजन और रखरखाव में प्रदर्शन करता है, क्रोमेटिन के साथ इसकी बातचीत डीएनए प्रतिकृति के पाठ्यक्रम के लिए आवश्यक लग सकती है। प्रतिकृति में परमाणु लामिना की भूमिका के लिए साक्ष्य उन प्रयोगों में प्राप्त हुए थे जिनमें ज़ेनोपस लाविस शुक्राणु कोशिकाओं से क्रोमैटिन को अंडे के अर्क में जोड़ा गया था। उसी समय, क्रोमेटिन के चारों ओर एक परमाणु लिफाफे का निर्माण नोट किया गया था।

इन नाभिकों के आकार में वृद्धि हुई और संघनन हुआ। गुणसूत्रोंजो एक संघनित अवस्था में शुक्राणु के केंद्रक में थे (निषेचन के दौरान दिखाई देने वाली तस्वीर को डीकंडेंसेशन मास्क करता है, जब शुक्राणु डीएनए oocytes में कुछ कारकों के साथ बातचीत करता है)। फिर इन नाभिकों में डीएनए प्रतिकृति होती है। अंडे के अर्क में न्यूक्लियर लैमिनाई और एलएपी प्रचुर मात्रा में होते हैं।

इन अर्क से लामिना को स्थिर के साथ हटाने के बाद एंटीबॉडीलैमिना प्रोटीन के लिए, शुक्राणु क्रोमैटिन के चारों ओर एक परमाणु लिफाफा का निर्माण अभी भी संभव है। हालांकि, नाभिक छोटे और नाजुक होते हैं, और उनमें डीएनए प्रतिकृति नहीं होती है। ये परिणाम बताते हैं कि लैमिना क्रोमेटिन संगठन और डीएनए प्रतिकृति में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है।

बढ़ा हुआ कोशिका की नाजुकता उत्परिवर्तन के साथ जुड़ी हुई हैमध्यवर्ती तंतु के प्रोटीन को प्रभावित करते हैं। लामिना और एलएपी में उत्परिवर्तन कई आनुवंशिक रोगों के विकास के लिए जिम्मेदार हैं, विशेष रूप से पेशीय प्रणाली को प्रभावित करने वाले। इन रोगों को लैमिनोपैथी कहा जाता है। लैमिना में परिवर्तन नाभिक को नाजुक और क्षति के लिए अधिक संवेदनशील बनाते हैं। मांसपेशियों की कोशिकाएं विशेष रूप से क्षतिग्रस्त होने की संभावना होती हैं, क्योंकि मांसपेशियों के संकुचन के दौरान, उनकी कोशिकाओं के नाभिक अन्य ऊतकों की कोशिकाओं के नाभिक की तुलना में अधिक यांत्रिक तनाव का अनुभव करते हैं।

परमाणु लामिना दो प्रकार के बंधों द्वारा आंतरिक परमाणु झिल्ली से जुड़ा होता है। जब ज़ेनोपस लाविस शुक्राणु की प्लाज्मा झिल्ली को हटा दिया जाता है और अंडे के अर्क के साथ इनक्यूबेट किया जाता है,
क्रोमेटिन का संघनन होता है और इसके चारों ओर एक कार्यात्मक रूप से सक्रिय परमाणु लिफाफा बनता है।
प्रतिदीप्ति डीएनए के स्थानीयकरण का पता लगाता है।

न्यूक्लियर लैमिना (न्यूक्लियर लैमिना) लैमिनिन प्रोटीन (इंटरमीडिएट फिलामेंट्स) द्वारा निर्मित एक कठोर फाइब्रिलर प्रोटीन नेटवर्क है जो इसे सपोर्ट करते हुए न्यूक्लियर मेम्ब्रेन को रेखांकित करता है। यह ताकना परिसरों के साथ परमाणु लिफाफे की एक रेशेदार परत है। यह एकीकृत प्रोटीन के साथ एक परत द्वारा जुड़ा हुआ है जिसमें इंटरवेटिड इंटरमीडिएट फिलामेंट्स (लेमिन्स) होते हैं जो एक कैरियोस्केलेटन बनाते हैं। क्रोमोसोमल डीएनए के स्ट्रैंड लैमिना से जुड़े होते हैं, यानी। क्रोमेटिन के संगठन में भाग लेता है। पोर कॉम्प्लेक्स के प्रोटीन संरचनात्मक रूप से परमाणु लैमिना के प्रोटीन से संबंधित होते हैं, जो उनके संगठन में शामिल होता है। इस प्रकार, लैमिना नाभिक के आकार को बनाए रखने, क्रोमैटिन की व्यवस्थित पैकिंग, रोमकूप परिसरों के संरचनात्मक संगठन, और कोशिका विभाजन के दौरान कैरियोलेमा के गठन (प्रोफ़ेज़ में परमाणु लिफाफे का विघटन और टेलोफ़ेज़ में एकीकरण) में बहुत महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

75. क्रोमैटिन। क्रोमैटिन - छोटे दाने और गांठ, जो कोशिकाओं के नाभिक में पाए जाते हैं और डाई (क्रोमोस) को अच्छी तरह से समझते हैं, इसलिए इसका नाम। रासायनिक रूप से, क्रोमैटिन में डीएनए और प्रोटीन का एक कॉम्प्लेक्स होता है (जिसमें आरएनए भी शामिल होता है) और क्रोमोसोम से मेल खाता है, जो इंटरपेज़ न्यूक्लियस में पतले फिलामेंट्स द्वारा दर्शाए जाते हैं और अलग-अलग संरचनाओं के रूप में अप्रभेद्य होते हैं। क्रोमैटिन गुणसूत्रों का एक पदार्थ है। क्रोमैटिन में क्रोमैटिन तंतु होते हैं, जो नाभिक में शिथिल या सघन रूप से स्थित हो सकते हैं। इस आधार पर, दो प्रकार के क्रोमैटिन को प्रतिष्ठित किया जाता है: यूक्रोमैटिन - ढीला या decondensed (despiralized) क्रोमैटिन, कमजोर रूप से मूल रंगों के साथ दाग और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत दिखाई नहीं देता है, यह प्रतिलेखन के लिए उपलब्ध है; हेटरोक्रोमैटिन एक कॉम्पैक्ट या संघनित (सर्पिलाइज्ड) क्रोमैटिन है जो समान रंगों से अच्छी तरह से दागता है और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देता है। जब कोशिका विभाजन (इंटरफ़ेज़) की तैयारी कर रही होती है, तो क्रोमेटिन तंतु नाभिक में सर्पिल हो जाते हैं और क्रोमैटिन गुणसूत्रों में परिवर्तित हो जाता है। बेटी कोशिकाओं के नाभिक में विभाजन के बाद, क्रोमैटिन तंतु अवक्षेपित हो जाते हैं और गुणसूत्र फिर से क्रोमैटिन में परिवर्तित हो जाते हैं। इसलिए, क्रोमैटिन और क्रोमोसोम एक ही पदार्थ के विभिन्न चरण हैं। इस प्रकार, नाभिक की रूपात्मक विशेषताओं (यूरोपीय और हेटरोक्रोमैटिन की सामग्री के अनुपात से) द्वारा, प्रतिलेखन प्रक्रियाओं (कोशिका के सिंथेटिक फ़ंक्शन) की सक्रियता का आकलन करना संभव है। इसकी वृद्धि के साथ, यह अनुपात पक्ष में बदल जाता है यूक्रोमैटिन का, और इसके विपरीत। नाभिक के कार्य के पूर्ण दमन के साथ (उदाहरण के लिए, क्षतिग्रस्त और मरने वाली कोशिकाओं में, उपकला के केराटिनाइजेशन के साथ), यह आकार में कम हो जाता है, इसमें केवल हेटरोक्रोमैटिन होता है और मूल रंगों के साथ गहन और समान रूप से दाग होता है . यह घटना karyopyknosis है। हेटरोक्रोमैटिन का वितरण और ईयू- और हेटरोक्रोमैटिन सामग्री का अनुपात प्रत्येक प्रकार के सेल के लिए विशेषता है, जो उनकी पहचान की अनुमति देता है। इसी समय, नाभिक में हेटरोक्रोमैटिन के वितरण में सामान्य नियमितताएं होती हैं: इसके क्लस्टर कैरियोलेमा के नीचे स्थित होते हैं, छिद्र क्षेत्र में बाधा डालते हैं (लैमिना के साथ इसके संबंध के कारण) और न्यूक्लियोलस के आसपास। छोटे-छोटे गांठ पूरे कोर में बिखरे हुए हैं। बार का शरीर महिलाओं में एक एक्स गुणसूत्र के अनुरूप हेटरोक्रोमैटिन का संचय होता है, जो इंटरफेज़ के दौरान मुड़ और निष्क्रिय होता है। अधिकांश कोशिकाओं में, यह कैरियोलेमा में स्थित होता है, और रक्त ग्रैन्यूलोसाइट्स में यह नाभिक ("ड्रमस्टिक") के एक छोटे से अतिरिक्त लोब्यूल की तरह दिखता है। आनुवंशिक लिंग का निर्धारण करने के लिए बार कॉर्पसकल (आमतौर पर मौखिक श्लेष्म की उपकला कोशिकाओं में) का उपयोग नैदानिक ​​परीक्षण के रूप में किया जाता है।

७६. फैलाना और संघनित क्रोमैटिन (ईयू- और हेटरोक्रोमैटिन)।

क्रोमैटिन - छोटे दाने और गांठ, जो कोशिकाओं के नाभिक में पाए जाते हैं और डाई (क्रोमोस) को अच्छी तरह से समझते हैं, इसलिए इसका नाम। रासायनिक रूप से, क्रोमैटिन में डीएनए, आरएनए और प्रोटीन का एक कॉम्प्लेक्स होता है, जहां डीएनए संक्षेपण की अलग-अलग डिग्री में होता है, और क्रोमोसोम से मेल खाता है, जो इंटरपेज़ न्यूक्लियस में पतले फिलामेंट्स द्वारा दर्शाए जाते हैं और अलग-अलग संरचनाओं के रूप में अप्रभेद्य होते हैं। क्रोमैटिन गुणसूत्रों का एक पदार्थ है। क्रोमैटिन में क्रोमैटिन तंतु होते हैं, जो नाभिक में शिथिल या सघन रूप से स्थित हो सकते हैं। इस आधार पर, दो प्रकार के क्रोमैटिन को प्रतिष्ठित किया जाता है: यूक्रोमैटिन - ढीला या decondensed (despiralized) क्रोमैटिन, कमजोर रूप से मूल रंगों के साथ दाग और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत दिखाई नहीं देता है, यह प्रतिलेखन के लिए उपलब्ध है; हेटरोक्रोमैटिन एक कॉम्पैक्ट या संघनित (सर्पिलाइज्ड) क्रोमैटिन है जो समान रंगों से अच्छी तरह से दागता है और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देता है। जब कोशिका विभाजन (इंटरफ़ेज़) की तैयारी कर रही होती है, तो क्रोमेटिन तंतु नाभिक में सर्पिल हो जाते हैं और क्रोमैटिन गुणसूत्रों में परिवर्तित हो जाता है। बेटी कोशिकाओं के नाभिक में विभाजन के बाद, क्रोमैटिन तंतु अवक्षेपित हो जाते हैं और गुणसूत्र फिर से क्रोमैटिन में परिवर्तित हो जाते हैं। इसलिए, क्रोमैटिन और क्रोमोसोम एक ही पदार्थ के विभिन्न चरण हैं। इस प्रकार, नाभिक की रूपात्मक विशेषताओं (यूरोपीय और हेटरोक्रोमैटिन की सामग्री के अनुपात से) द्वारा, प्रतिलेखन प्रक्रियाओं (कोशिका के सिंथेटिक फ़ंक्शन) की सक्रियता का आकलन करना संभव है। इसकी वृद्धि के साथ, यह अनुपात पक्ष में बदल जाता है यूक्रोमैटिन का, और इसके विपरीत। नाभिक के कार्य के पूर्ण दमन के साथ (उदाहरण के लिए, क्षतिग्रस्त और मरने वाली कोशिकाओं में, उपकला के केराटिनाइजेशन के साथ), यह आकार में कम हो जाता है, इसमें केवल हेटरोक्रोमैटिन होता है और मूल रंगों के साथ गहन और समान रूप से दाग होता है . यह घटना karyopyknosis है। हेटरोक्रोमैटिन का वितरण और ईयू- और हेटरोक्रोमैटिन सामग्री का अनुपात प्रत्येक प्रकार के सेल के लिए विशेषता है, जो उनकी पहचान की अनुमति देता है। इसी समय, नाभिक में हेटरोक्रोमैटिन के वितरण के सामान्य पैटर्न होते हैं: इसके क्लस्टर कैरियोलेमा के नीचे स्थित होते हैं, छिद्र क्षेत्र में बाधा डालते हैं (लैमिना के साथ इसके संबंध के कारण) और न्यूक्लियोलस (पेरिन्यूक्लियर) के आसपास। छोटे-छोटे गांठ पूरे कोर में बिखरे हुए हैं। बार का शरीर महिलाओं में एक एक्स गुणसूत्र के अनुरूप हेटरोक्रोमैटिन का संचय होता है, जो इंटरफेज़ के दौरान मुड़ और निष्क्रिय होता है। अधिकांश कोशिकाओं में, यह कैरियोलेमा में स्थित होता है, और रक्त ग्रैन्यूलोसाइट्स में यह नाभिक ("ड्रमस्टिक") के एक छोटे से अतिरिक्त लोब्यूल की तरह दिखता है। आनुवंशिक लिंग का निर्धारण करने के लिए बार कॉर्पसकल (आमतौर पर मौखिक श्लेष्म की उपकला कोशिकाओं में) का उपयोग नैदानिक ​​परीक्षण के रूप में किया जाता है।