Altevir, Alfarona, Viferon, Intron-A, Realdiron, Eberon alfa R.

Komposisyon at release form

Interferon alpha-2b. Lyophilized powder para sa iniksyon (sa 1 ​​vial - 3 milyong IU, 5 milyong IU, 10 milyong IU, 30 milyong IU). Recombinant interferon alpha-2b.

Solusyon para sa iniksyon (syringe pen - 10 milyong ME, 18 milyong ME, 25 milyong ME; sa 1 vial - 10 milyong ME, 18 milyong ME, 25 milyong ME; 1 dosis - 3 milyong ME, 5 milyong ME, 10 milyong ME) . Human recombinant interferon alpha-2b. Rectal suppositories (150,000 IU, 500,000 IU).

Pagkilos sa pharmacological

Ang gamot ay isang highly purified recombinant interferon alpha-2b para sa parenteral administration. Nakuha mula sa isang Escherichia coli clone sa pamamagitan ng pag-hybrid ng bacterial plasmid sa human leukocyte gene na naka-encode sa synthesis ng interferon. Ay isang nalulusaw sa tubig na protina na may molekular na timbang 19,300 daltons.

Ang biological na aktibidad ng mga interferon ay ipinahayag sa pamamagitan ng kanilang pagbubuklod sa mga tiyak na receptor ng lamad ng cell. Ang Interferon alpha-2b ay may antiproliferative effect sa mga tumor cells, pati na rin ang antiviral at immunomodulatory effect.

Pharmacokinetics

Sa subcutaneous at intramuscular administration, ang bioavailability ay 100%. - na may subcutaneous administration 2-3 oras, na may intramuscular injection - 6-7 na oras, na may intravenous administration - 2 oras Ang konsentrasyon ng interferon sa plasma ay hindi natukoy pagkatapos ng 16.24 at 4 na oras, ayon sa pagkakabanggit. Ang mga alpha interferon ay may kakayahang makagambala sa oxidative metabolic proseso, binabawasan ang aktibidad ng microsomal liver enzymes ng cytochrome P450 system. Pinalabas sa ihi.

Mga indikasyon

Multiple myeloma (generalized forms), hairy cell leukemia, chronic myelogenous leukemia, malignant melanoma, bladder cancer, superficial acuminate condylomatosis, laryngopapillomatosis, Kaposi's sarcoma, AIDS, chronic hepatitis C, chronic hepatitis B.

Aplikasyon

Ang regimen ng aplikasyon at paggamot ay depende sa uri ng sakit. Sa panahon ng pagbubuntis, ang interferon alfa-2b ay ginagamit lamang sa mga kaso kung saan ang inaasahang epekto ng paggamot para sa ina ay lumampas sa potensyal na panganib sa fetus.

Ang mga bahagi ng gamot ay tumagos sa timing belt. Samakatuwid, sa panahon ng paggagatas, batay sa kahalagahan ng paggamit ng interferon alfa-2b para sa ina, alinman sa pagpapasuso o paggamot sa gamot ay itinigil. Ang karanasan sa paggamit ng gamot sa mga bata ay limitado: ang pagrereseta ng gamot sa mga bata ay dapat na maingat na makatwiran.

Side effect

Sa gitnang sistema ng nerbiyos, psyche: madalas - isang pakiramdam ng pagkapagod, sakit ng ulo; posibleng mga kaguluhan ng kamalayan, pagkahilo, ataxia, pagkabalisa, depression, nadagdagan ang excitability, antok, paresthesia; bihira - hindi pagkakatulog; inilarawan indibidwal na mga kaso pag-unlad ng paralisis oculomotor nerves, kapansanan sa paningin.

Sa cardiovascular system: posibleng hypertension o hypotension; bihira - tachycardia; Ang mga nakahiwalay na kaso ng pagbuo ng orthostatic hypotension at igsi ng paghinga ay inilarawan.

Sa PS: madalas - anorexia, pagduduwal, pagtaas ng antas ng AST at ALT (kapag gumagamit ng isang dosis ng gamot na higit sa 100 milyong IU/araw), alkaline phosphatase; posible ang pagsusuka; bihira - paninigas ng dumi, stomatitis; Ang mga nakahiwalay na kaso ng pag-unlad ng dyspepsia, pagtaas ng paglalaway, ulcerative stomatitis, at utot ay inilarawan.

Sa SC: madalas - thrombocytopenia, granulocytopenia; sa ilang mga kaso - mga karamdaman sa coagulation (nadagdagan ang prothrombin at bahagyang oras ng thromboplastin), dumudugo ang ilong; Ang mga nakahiwalay na kaso ng pag-unlad ng purpura ay inilarawan.

Sa balat: alopecia, lumilipas na pantal, pangangati; bihira - urticaria, furunculosis, herpetic rashes, vesicular lichen; Ang mga nakahiwalay na kaso ng pagbuo ng erythema ay inilarawan.

Mga lokal na reaksyon: inilarawan ang mga nakahiwalay na kaso ng pamamaga sa lugar ng iniksyon.

Iba pa: madalas - lagnat, myalgia; posible ang arthralgia; bihira - mga cramp ng mga kalamnan ng guya, paroxysmal sensations ng init, pag-aalis ng tubig, ubo, nadagdagan ang mga antas ng creatinine; Ang mga nakahiwalay na kaso ng pagbahing, mga kaguluhan sa pag-agos ng mga pagtatago mula sa ilong, at hyperglycemia ay inilarawan.

Form ng paglabas, komposisyon at packaging

Solusyon para sa iniksyon transparent, walang kulay.

Mga excipient:

0.5 ml - ampoules (5) - contour cell packaging (1) - mga pack ng karton.
0.5 ml - ampoules (5) - contour cell packaging (2) - mga pack ng karton.
0.5 ml - mga bote (1) - mga pack ng karton.
0.5 ml - mga bote (5) - contour cell packaging (1) - mga karton na pakete.
0.5 ml - glass syringes (1) - contour cell packaging (1) - karton pack.
0.5 ml - glass syringes (1) - contour cell packaging (3) - karton pack.
0.5 ml - glass syringes (3) - contour cell packaging (1) - mga karton na pack.
0.5 ml - glass syringes (3) - contour cell packaging (3) - mga karton na pack.

Solusyon para sa iniksyon transparent, walang kulay.

Mga excipient: sodium acetate, sodium chloride, ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt, Tween-80, dextran 40, tubig para sa iniksyon.

1 ml - ampoules (5) - contour cell packaging (1) - karton pack.
1 ml - ampoules (5) - contour cell packaging (2) - karton pack.
1 ml - mga bote (1) - mga pakete ng karton.
1 ml - mga bote (5) - contour cell packaging (1) - mga karton na pakete.
1 ml - glass syringes (1) - contour cell packaging (1) - mga karton na pack.
1 ml - glass syringes (1) - contour cell packaging (3) - karton pack.
1 ml - glass syringes (3) - contour cell packaging (1) - karton pack.
1 ml - glass syringes (3) - contour cell packaging (3) - karton pack.

Grupo ng klinikal at parmasyutiko

Interferon. Antitumor, antiviral at immunomodulatory na gamot

Pagkilos sa pharmacological

Interferon. Ang Altevir ® ay may antiviral, immunomodulatory, antiproliferative at antitumor effect.

Ang interferon alpha-2b, na nakikipag-ugnayan sa mga partikular na receptor sa ibabaw ng cell, ay nagpapasimula ng isang kumplikadong chain ng mga pagbabago sa loob ng cell, kabilang ang induction ng synthesis ng isang bilang ng mga tiyak na cytokines at enzymes, at nakakagambala sa synthesis ng viral RNA at mga viral protein sa ang cell. Ang resulta ng mga pagbabagong ito ay hindi tiyak na antiviral at antiproliferative na aktibidad na nauugnay sa pag-iwas sa viral replication sa cell, pagsugpo sa paglaganap ng cell at ang immunomodulatory effect ng interferon. Pinasisigla ng interferon alpha-2b ang proseso ng pagtatanghal ng antigen immunocompetent na mga selula, ay may kakayahang pasiglahin ang aktibidad ng phagocytic ng mga macrophage, pati na rin ang aktibidad ng cytotoxic ng mga selulang T at mga natural na killer cell na kasangkot sa antiviral immunity.

Pinipigilan ang paglaganap ng cell, lalo na ang mga selula ng tumor. Ito ay may nagbabawal na epekto sa synthesis ng ilang mga oncogenes, na humahantong sa pagsugpo sa paglaki ng tumor.

Pharmacokinetics

Pagsipsip

Sa subcutaneous o intramuscular administration ng interferon alfa-2b, ang bioavailability nito ay mula 80% hanggang 100%. Pagkatapos ng pangangasiwa ng interferon alpha-2b, ang T max sa plasma ng dugo ay 4-12 na oras, T 1/2 - 2-6 na oras pagkatapos ng pangangasiwa, ang recombinant interferon ay hindi napansin sa serum ng dugo.

Metabolismo

Ang metabolismo ay nangyayari sa atay.

Ang mga alpha interferon ay maaaring makagambala sa mga oxidative metabolic na proseso, na binabawasan ang aktibidad ng microsomal liver enzymes ng cytochrome P450 system.

Pagtanggal

Ito ay pinalabas pangunahin ng mga bato sa pamamagitan ng glomerular filtration.

Mga indikasyon para sa paggamit ng gamot

Kasama kumplikadong therapy sa mga matatanda:

- may talamak na viral hepatitis B na walang mga palatandaan ng cirrhosis ng atay;

- may talamak na viral hepatitis C sa kawalan ng mga sintomas pagkabigo sa atay(monotherapy o kumbinasyon ng therapy na may ribavirin);

- na may papillomatosis ng larynx;

- sa kulugo sa ari;

- para sa mabuhok na cell leukemia, talamak na myeloid leukemia, non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, multiple myeloma, Kaposi's sarcoma dahil sa AIDS, advanced kidney cancer.

Regimen ng dosis

Mag-apply sa subcutaneously, intramuscularly at intravenously. Ang paggamot ay dapat magsimula ng isang doktor. Pagkatapos, sa pahintulot ng doktor, ang pasyente ay maaaring magbigay ng isang dosis ng pagpapanatili nang nakapag-iisa (sa mga kaso kung saan ang gamot ay inireseta nang subcutaneously o intramuscularly).

Talamak na hepatitis B: Ang Altevir ® ay pinangangasiwaan nang subcutaneously o intramuscularly sa isang dosis na 5-10 milyong IU 3 beses sa isang linggo para sa 16-24 na linggo. Ang paggamot ay huminto pagkatapos ng 3-4 na buwan ng paggamit sa kawalan ng positibong dinamika (ayon sa isang pag-aaral ng hepatitis B virus DNA).

Talamak na hepatitis C: Ang Altevir ® ay pinangangasiwaan nang subcutaneously o intramuscularly sa isang dosis na 3 milyong IU 3 beses sa isang linggo para sa 24-48 na linggo. Sa mga pasyente na may paulit-ulit na kurso ng sakit at mga pasyente na hindi pa nakatanggap ng paggamot na may interferon alfa-2b, ang pagiging epektibo ng paggamot ay tumataas nang may kumbinasyon ng therapy na may ribavirin. Ang tagal ng kumbinasyon ng therapy ay hindi bababa sa 24 na linggo. Ang Altevir therapy ay dapat isagawa sa loob ng 48 linggo sa mga pasyente na may talamak na hepatitis C at ang unang genotype ng virus na may mataas na viral load, kung kanino ang hepatitis C virus RNA ay hindi nakita sa serum ng dugo sa pagtatapos ng unang 24 na linggo ng paggamot.

Laryngeal papillomatosis: Ang Altevir ® ay pinangangasiwaan nang subcutaneously sa isang dosis na 3 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo. Nagsisimula ang paggamot pagkatapos ng operasyon (o laser) na pagtanggal ng tumor tissue. Ang dosis ay pinili na isinasaalang-alang ang tolerability ng gamot. Ang pagkamit ng positibong tugon ay maaaring mangailangan ng paggamot sa loob ng 6 na buwan.

Mabuhok na cell leukemia: Ang inirekumendang dosis ng Altevir para sa subcutaneous administration sa mga pasyente pagkatapos o walang splenectomy ay 2 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo. Sa karamihan ng mga kaso, ang normalisasyon ng isa o higit pang mga hematological parameter ay nangyayari pagkatapos ng 1-2 buwan ng paggamot, posible na madagdagan ang panahon ng paggamot sa 6 na buwan. Ang regimen ng dosis na ito ay dapat na patuloy na sundin maliban kung ang mabilis na pag-unlad ng sakit o mga sintomas ng matinding hindi pagpaparaan sa gamot ay nangyari.

Talamak na myeloid leukemia: Ang inirerekumendang dosis ng Altevir bilang monotherapy ay 4-5 million IU/m2 kada araw subcutaneously araw-araw. Upang mapanatili ang bilang ng mga leukocytes, maaaring kailanganin ang isang dosis na 0.5-10 milyon IU/m2. Kung ang paggamot ay nagbibigay-daan upang makamit ang kontrol ng bilang ng mga leukocytes, pagkatapos ay upang mapanatili ang hematological remission ang gamot ay dapat gamitin sa maximum na disimulado na dosis (4-10 million IU/m2 araw-araw). Ang gamot ay dapat na ihinto pagkatapos ng 8-12 na linggo kung ang therapy ay hindi humantong sa bahagyang pagpapatawad ng hematological o isang makabuluhang pagbawas sa bilang ng mga leukocytes sa klinika.

Non-Hodgkin's lymphoma: Ginagamit ang Altevir ® bilang pantulong na therapy kasabay ng mga karaniwang regimen ng chemotherapy. Ang gamot ay ibinibigay subcutaneously sa isang dosis ng 5 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo para sa 2-3 buwan. Dapat ayusin ang dosis depende sa tolerability ng gamot.

Melanoma: Ginagamit ang Altevir ® bilang pantulong na therapy para sa umiiral na mataas ang panganib pag-ulit sa mga matatanda pagkatapos ng pag-alis ng tumor. Ang Altevir ® ay ibinibigay sa intravenously sa isang dosis na 15 milyong IU/m 2 5 beses sa isang linggo para sa 4 na linggo, pagkatapos ay subcutaneously sa isang dosis ng 10 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo para sa 48 na linggo. Dapat ayusin ang dosis depende sa tolerability ng gamot.

Multiple myeloma: Ang Altevir ® ay inireseta sa panahon ng pagkamit ng matatag na pagpapatawad sa isang dosis na 3 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo subcutaneously.

Kaposi's sarcoma dahil sa AIDS: ang pinakamainam na dosis ay hindi naitatag. Ang gamot ay maaaring gamitin sa mga dosis ng 10-12 milyong IU/m2/araw subcutaneously o intramuscularly. Kung ang sakit ay nagpapatatag o tumugon sa paggamot, ang therapy ay magpapatuloy hanggang sa mangyari ang pagbabalik ng tumor o ang paghinto ng gamot ay kinakailangan.

Kanser sa bato: Ang pinakamainam na dosis at regimen ay hindi pa naitatag. Inirerekomenda na gamitin ang gamot sa ilalim ng balat sa mga dosis na 3 hanggang 10 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo.

Paghahanda ng solusyon para sa intravenous administration

Iguhit ang dami ng Altevir solution na kinakailangan upang maihanda ang kinakailangang dosis, idagdag ito sa 100 ML ng sterile 0.9% sodium chloride solution at ibigay ito sa loob ng 20 minuto.

Side effect

Pangkalahatang reaksyon: napakadalas - lagnat, kahinaan (sila ay nakasalalay sa dosis at nababaligtad na mga reaksyon, nawawala sa loob ng 72 oras pagkatapos ng pahinga sa paggamot o pagtigil nito), panginginig; mas madalas - karamdaman.

Mula sa gilid ng central nervous system: napakadalas - sakit ng ulo; mas madalas - asthenia, pag-aantok, pagkahilo, pagkamayamutin, hindi pagkakatulog, depresyon, mga pag-iisip at pagtatangka ng pagpapakamatay; bihira - nerbiyos, pagkabalisa.

Mula sa musculoskeletal system: napakadalas - myalgia; mas madalas - arthralgia.

Mula sa digestive system: napakadalas - pagkawala ng gana, pagduduwal; mas madalas - pagsusuka, pagtatae, tuyong bibig, pagbabago sa lasa; bihira - sakit ng tiyan, dyspepsia; ang isang nababaligtad na pagtaas sa aktibidad ng enzyme ng atay ay posible.

Mula sa labas cardiovascular system: madalas - nabawasan ang presyon ng dugo; bihira - tachycardia.

Mga reaksyon ng dermatological: mas madalas - alopecia, nadagdagan ang pagpapawis; bihira - pantal sa balat, pangangati ng balat.

Mula sa hematopoietic system: posibleng mababalik na leukopenia, granulocytopenia, nabawasan ang mga antas ng hemoglobin, thrombocytopenia.

Iba pa: bihira - pagbaba ng timbang, autoimmune thyroiditis.

Contraindications sa paggamit ng gamot

- mabigat mga sakit sa cardiovascular kasaysayan (hindi makontrol na talamak na pagpalya ng puso, kamakailang myocardial infarction, malubha rate ng puso);

- matinding pagkabigo sa bato at/o atay (kabilang ang mga sanhi ng pagkakaroon ng metastases);

- epilepsy, pati na rin ang matinding dysfunction ng central nervous system, lalo na ipinahayag ng depression, mga pag-iisip at pagtatangka ng pagpapakamatay (kabilang ang isang kasaysayan);

- talamak na hepatitis na may decompensated liver cirrhosis at sa mga pasyente na tumatanggap o kamakailang tumatanggap ng paggamot na may immunosuppressants (maliban sa nakumpletong panandaliang paggamot na may corticosteroids);

— autoimmune hepatitis o iba pa sakit na autoimmune;

- paggamot na may mga immunosuppressant pagkatapos ng paglipat;

- sakit thyroid gland, na hindi makokontrol ng pangkalahatang tinatanggap na mga therapeutic na pamamaraan;

— mga decompensated na sakit sa baga (kabilang ang COPD);

- decompensated diabetes mellitus;

- hypercoagulation (kabilang ang thrombophlebitis, thromboembolism pulmonary artery);

- malubhang myelodepression;

- pagbubuntis;

- panahon ng paggagatas (pagpapasuso);

— nadagdagan ang pagiging sensitibo sa mga bahagi ng gamot.

Paggamit ng gamot sa panahon ng pagbubuntis at paggagatas

Ang gamot ay kontraindikado sa panahon ng pagbubuntis at paggagatas (pagpapasuso).

Gamitin para sa dysfunction ng atay

Gamitin para sa renal impairment

Ang gamot ay kontraindikado sa matinding pagkabigo sa bato at/o atay (kabilang ang mga sanhi ng pagkakaroon ng metastases).

Mga espesyal na tagubilin

Bago ang paggamot sa Altevir talamak viral hepatitis Inirerekomenda ng B at C ang isang biopsy sa atay upang masuri ang lawak ng pinsala sa atay (mga palatandaan ng aktibo nagpapasiklab na proseso at/o fibrosis). Ang pagiging epektibo ng paggamot ng talamak na hepatitis C ay tumataas sa kumbinasyon ng therapy na may Altevir at ribavirin. Ang paggamit ng Altevir ay hindi epektibo sa pagbuo ng decompensated liver cirrhosis o hepatic coma.

Kung ang mga side effect ay nangyari sa panahon ng paggamot sa Altevir, ang dosis ng gamot ay dapat bawasan ng 50% o ang gamot ay dapat na pansamantalang ihinto hanggang sa mawala ang mga ito. Kung ang mga side effect ay nagpapatuloy o umuulit pagkatapos ng pagbawas ng dosis, o ang pag-unlad ng sakit ay naobserbahan, ang paggamot sa Altevir ay dapat na ihinto.

Kung ang antas ng platelet ay bumaba sa ibaba 50x10 9 / l o ang antas ng granulocyte sa ibaba 0.75x10 9 / l, inirerekomenda na bawasan ang dosis ng Altevir ng 2 beses sa pagsubaybay sa pagsusuri ng dugo pagkatapos ng 1 linggo. Kung magpapatuloy ang mga pagbabagong ito, dapat na ihinto ang gamot.

Kung ang antas ng platelet ay bumaba sa ibaba 25x10 9 /l o ang antas ng granulocyte sa ibaba 0.5 x10 9 /l, inirerekumenda na ihinto ang gamot na Altevir ® na may pagsubaybay sa pagsusuri ng dugo pagkatapos ng 1 linggo.

Sa mga pasyente na tumatanggap ng interferon alpha-2b na paghahanda, ang mga antibodies na neutralisahin ang antiviral na aktibidad nito ay maaaring makita sa serum ng dugo. Sa halos lahat ng mga kaso, ang mga titer ng antibody ay mababa ang kanilang hitsura ay hindi humantong sa isang pagbawas sa pagiging epektibo ng paggamot o ang paglitaw ng iba pang mga autoimmune disorder.

Overdose

Ang data sa labis na dosis ng gamot na Altevir ® ay hindi ibinigay.

Mga pakikipag-ugnayan sa droga

Mga pakikipag-ugnayan sa droga sa pagitan ng Altevir at iba pa mga gamot hindi lubusang pinag-aralan. Ang Altevir ay dapat gamitin nang may pag-iingat kasabay ng hypnotics at pampakalma, narcotic analgesics at mga gamot na posibleng magkaroon ng myelosuppressive effect.

Kapag inireseta ang Altevir at theophylline nang sabay-sabay, ang konsentrasyon ng huli sa serum ng dugo ay dapat na subaybayan at, kung kinakailangan, ang regimen ng dosis nito ay dapat baguhin.

Kapag ginamit ang Altevir kasama ng mga chemotherapeutic na gamot (cytarabine, cyclophosphamide, doxorubicin, teniposide), tumataas ang panganib na magkaroon ng mga nakakalason na epekto.

Mga kondisyon para sa dispensing mula sa mga parmasya

Ang gamot ay makukuha nang may reseta.

Mga kondisyon at panahon ng imbakan

Ang gamot ay dapat na nakaimbak sa hindi maaabot ng mga bata, alinsunod sa SP 3.3.2-1248-03 sa temperatura na 2° hanggang 8°C; huwag mag-freeze. Buhay ng istante - 18 buwan.

Transport sa temperatura mula 2° hanggang 8°C; huwag mag-freeze.

"

Ang imbensyon ay nauugnay sa genetic engineering, biotechnology, gamot, pharmacology. Isang bagong recombinant multicopy plasmid DNA pSX50, na naka-encode ng synthesis ng human leukocyte alpha-2b interferon, ang pagpapahayag nito ay nasa ilalim ng kontrol ng lactose at tryptophan promoters at isang transcription terminator. Bilang resulta ng pagbabagong-anyo ng mga cell ng recipient strain E. coli BL21 na may recombinant plasmid DNA pSX50, nakuha ang strain E. coli SX50 - isang producer ng recombinant leukocyte human alpha-2b interferon na may produktibidad na hanggang 0.9-1.0 g ng alpha-2b interferon mula sa 1 litro ng medium ng kultura. Ang pamamaraan para sa paggawa ng recombinant alpha-2b interferon ay batay sa paggamit ng nilikhang recombinant E. coli strain SX50 at kinabibilangan ng malalim na paglilinang nito sa nutrient medium Sa pinababang nilalaman tryptophan na may tuluy-tuloy na pagdaragdag ng mga nutrient substrates sa proseso ng biosynthesis, mekanikal na pagkasira ng mga cell ng microorganism na may altapresyon, paglusaw ng pinagsama-samang protina sa isang puro solusyon ng guanidine hydrochloride, na sinusundan ng renaturation ng interferon sa mga solusyon sa physiological buffer sa pagkakaroon ng mga chaotropic agent at ang paglilinis nito gamit ang tatlong yugto ng chromatographic purification ng interferon sa Chelating Sepharose Fast Flow type resins immobilized with Cu +2 ions, ion exchange chromatography sa SM type ion exchange resins Sephsrose Fast Flow at gel filtration chromatography sa Superdex 75 type resins Ginagawang posible ng pamamaraan na makakuha ng interferon substance na higit sa 99% na kadalisayan ayon sa electrophoresis sa pagbabawas at non-. pagbabawas ng mga kondisyon kapag ang paglamlam ng mga gel na may pilak at higit sa 98% ayon sa RF HPLC at hindi naglalaman ng mga pyrogens (LAL test ) sa dami ng hindi bababa sa 400-800 mg bawat 1 litro ng medium ng kultura. 3 n. at 3 posisyon sa suweldo, 6 na may sakit.

Mga guhit para sa RF patent 2242516

Ang imbensyon ay nauugnay sa mga genetically engineered na gamot na nakuha sa biotechnologically, katulad ng mga pamamaraan para sa pang-industriya na produksyon ng recombinant human leukocyte interferon alpha-2b mga layuning medikal(mula dito ay tinutukoy bilang interferon), pati na rin sa mga recombinant na gumagawa ng mga strain ng Escherichia coli (E.coli) at plasmid DNA na naka-encode sa synthesis ng interferon.

Ang mga interferon ay mga molekula ng protina na may molekular na timbang na 15,000 hanggang 21,000 dalton, na ginawa at itinago ng mga selula bilang tugon sa impeksyon sa viral o iba pang mga pathogen. Mayroong tatlong pangunahing grupo ng mga interferon: alpha, beta at gamma. Ang mga grupong ito mismo ay hindi homogenous at maaaring maglaman ng iba't ibang molekular na species ng interferon. Kaya, higit sa 14 genetic varieties ng interferon alpha ay natukoy, na kung saan ay interesado at mahanap malawak na aplikasyon sa medisina bilang antiviral, antiproliferative at immunomodulatory agent.

Mga kilalang pamamaraan para sa pagkuha ng interferon ng leukocyte ng tao mula sa mga leukocytes nag-donate ng dugo mga tao na naimpluwensyahan ng mga virus at iba pang inducers (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Ang pangunahing kawalan ng mga pamamaraang ito para sa paggawa ng mga interferon ay ang posibilidad ng kontaminasyon ng panghuling produkto sa mga virus ng tao, tulad ng hepatitis B at C virus, immunodeficiency virus, atbp.

Sa kasalukuyan, ang paraan ng paggawa ng interferon sa pamamagitan ng microbiological synthesis ay kinikilala bilang mas promising, na ginagawang posible upang makuha ang target na produkto na may makabuluhang mas mataas na ani mula sa medyo murang mga panimulang materyales. Ginagawang posible ng mga diskarte na ginamit dito na lumikha ng mga variant ng isang structural gene na pinakamainam para sa pagpapahayag ng bacterial, pati na rin ang mga elemento ng regulasyon na kumokontrol sa pagpapahayag nito.

Ang iba't ibang disenyo ng strain ng Pichia pastoris, Pseudomonas putida at Escherichia coli ay ginagamit bilang source microorganisms.

Ang kawalan ng paggamit ng P. pastoris bilang isang tagagawa ng interferon (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //Mataas na antas ng pagpapahayag ng tao IFN-2b sa Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), ay labis mahirap na kondisyon pagbuburo ng ganitong uri ng lebadura, ang pangangailangan upang mahigpit na mapanatili ang konsentrasyon ng inducer, sa partikular na methanol, sa panahon ng proseso ng biosynthesis. Ang kawalan ng paggamit ng Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) ay ang pagiging kumplikado ng proseso ng pagbuburo sa mababang antas ng pagpapahayag (10 mg ng interferon bawat 1 litro ng medium ng kultura). Mas produktibo ang paggamit ng Escherichia coli strains (Semin. Oncol., 1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Kilala malaking bilang plasmids at E. coli strains na nilikha sa kanilang batayan na nagpapahayag ng interferon: E. coli strains ATCC 31633 at 31644 na may plasmids Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 o Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35-AHL6 ( SU 1764515), E. coli strain pINF-AP2 (SU 1312961), E. coli strain pINF-F-Pa (AU 1312962), E. Coli strain SG 20050 na may plasmid p280/21FN (Kravchenko V.V. et al. chemistry, Bioorganic et al. 1987, v. 13, blg. 9, p. 1186-1193), strain E. Coli SG 20050 na may plasmid pINF14 (SU 1703691), strain E. coli SG 20050 na may plasmid pINF16 (RU 20540 disadvantage), atbp. sa paggamit ng mga strain na ito ay ang kanilang kawalang-tatag, pati na rin ang hindi sapat na antas ng interferon expression.

Kasama ang mga katangian ng mga strain na ginamit, ang kahusayan ng proseso ay higit na nakasalalay sa teknolohiyang ginamit para sa paghihiwalay at paglilinis ng interferon.

Mayroong isang kilalang paraan para sa paggawa ng interferon, na kinabibilangan ng pag-culture ng mga Ps cells. putida, pagkasira ng biomass, paggamot na may polyethylenimine, fractionation na may ammonium sulfate, hydrophobic chromatography sa phenylsilochrome C-80, pH fractionation ng lysate, konsentrasyon at diafiltration nito, ion exchange chromatography sa cellulose DE-52, elution sa pH gradient, ion exchange chromatography ng nagresultang eluent sa cellulose SM -52, konsentrasyon sa pamamagitan ng pagpasa sa isang filter cassette at gel filtration sa Sephadex G-100 (SU 1640996). Ang kawalan ng pamamaraang ito, bilang karagdagan sa kumplikadong multi-stage fermentation, ay ang multi-stage na proseso sa pagkuha ng pangwakas na produkto.

Mayroon ding isang kilalang paraan para sa paggawa ng interferon, na kinabibilangan ng paglilinang ng E. coli strain SG 20050/pIF16 sa LB na sabaw sa mga flasks sa isang thermostated shaker, pag-centrifuging ng biomass, paghuhugas nito gamit ang buffer solution at ultrasonic treatment para sirain ang mga cell. Ang resultang lysate ay centrifuged, hugasan ng isang 3M urea solution sa buffer, dissolved sa isang solusyon ng guanidine chloride sa buffer, ginagamot sa ultrasound, centrifuged, oxidative sulfitolysis, dialysis laban sa 8 M urea, renaturation at final two-stage chromatography sa CM- 52 cellulose at Sephadex G-50 ( RU 2054041). Ang mga disadvantages ng pamamaraang ito ay ang relatibong mababang produktibidad ng mga pangunahing yugto ng proseso ng paghihiwalay at paglilinis. Ito ay lalo na nalalapat sa ultrasonic na paggamot ng produkto, dialysis at oxidative sulfitolysis, na humahantong sa kawalang-tatag sa ani ng interferon, pati na rin ang imposibilidad ng paggamit ng pamamaraang ito para sa pang-industriyang produksyon ng interferon.

Bilang ang pinakamalapit na analogue (prototype), ang isang paraan para sa paggawa ng human leukocyte interferon ay maaaring ipahiwatig, na binubuo sa paglilinang ng isang recombinant strain ng E. coli, pagyeyelo ng nagresultang biomass sa temperatura na hindi hihigit sa -70°C, pagtunaw, pagsira sa mga selula ng microorganism. na may lysozyme, nag-aalis ng DNA at RNA sa pamamagitan ng pagpapasok sa DNAse lysate at pagdalisay ng nakahiwalay na insoluble form ng interferon sa pamamagitan ng paghuhugas gamit ang buffer solution na may mga detergent, pagtunaw ng interferon precipitate sa isang solusyon ng guanidine hydrochloride, renaturation at one-step purification sa pamamagitan ng ion exchange chromatography. Ang E. coli SS5 strain na nakuha gamit ang recombinant plasmid pSS5 na naglalaman ng tatlong promoter: P lac , P t7 at P trp, at ang alpha-interferon gene na may ipinakilala na mga pagpapalit ng nucleotide ay ginagamit bilang producer.

Ang pagpapahayag ng interferon ng E. coli SS5 strain na naglalaman ng plasmid na ito ay kinokontrol ng tatlong promoter: P lac , P t7 at P trp . Ang antas ng interferon expression ay tungkol sa 800 mg bawat 1 litro ng cell suspension (RU 2165455).

Ang kawalan ng pamamaraang ito ay ang mababang teknolohikal na kahusayan ng paggamit ng enzymatic na pagkasira ng mga cell, DNA at RNA ng microorganism at isang hakbang na chromatographic purification ng interferon. Nagdudulot ito ng kawalang-tatag sa proseso ng pagpapalabas ng interferon, humahantong sa pagbaba sa kalidad nito at nililimitahan ang posibilidad ng paggamit ng pamamaraan sa itaas para sa pang-industriyang produksyon ng interferon. Ang mga disadvantages ng plasmid na ito at ang strain batay dito ay ang paggamit sa plasmid ng isang malakas na unregulated promoter ng T7 phage sa E. coli strain BL21 (DE3), kung saan ang T7 RNA polymerase gene ay matatagpuan sa ilalim ng promoter ng ang lac operon at na palaging "umaagos". Dahil dito, ang synthesis ng interferon ay patuloy na nangyayari sa cell, na humahantong sa dissociation ng plasmid at isang pagbawas sa viability ng mga cell ng strain, at bilang isang resulta, isang pagbawas sa ani ng interferon.

Ang layunin ng imbensyon na ito ay bumuo ng isang recombinant industrial producer strain ng E. coli gamit ang isang bagong recombinant plasmid DNA, na may mataas na antas ng interferon biosynthesis, at bumuo ng isang epektibong pang-industriya na teknolohiya para sa paggawa ng interferon substance para sa medikal na paggamit, na katumbas ng sa kalidad sa "European Pharmacopoeia" para sa interferon alpha-2b substance.

Ang problemang ito ay nalutas sa pamamagitan ng paglikha ng recombinant plasmid DNA pSX50 at ang Escherichia coli strain SX50, na idineposito sa All-Russian Collection of Industrial Strains ng Federal State Unitary Enterprise State Research Institute of Genetics, numero VKPM B-8550,

pati na rin ang isang paraan para sa paggawa ng recombinant alpha-2b interferon, batay sa paggamit ng isang recombinant strain ng E. coli SX50 at kinasasangkutan ng malalim na paglilinang nito sa isang nutrient medium na may pinababang nilalaman ng tryptophan na may patuloy na pagdaragdag ng nutrient substrates sa proseso. ng biosynthesis, mekanikal na pagkasira ng mga selula ng microorganism sa mataas na presyon, paglusaw ng pinagsama-samang protina sa isang puro solusyon ng guanidine hydrochloride, na sinusundan ng renaturation ng interferon sa physiological buffer solution sa pagkakaroon ng mga chaotropic agent at tatlong yugto ng chromatographic purification ng interferon sa mga resin tulad ng bilang Chelating Sepharose Fast Flow, immobilized na may Cu +2 ions, ion exchange chromatography sa ion exchange resins gaya ng CM Sepharose Fast Flow at gel filtration chromatography sa mga resin gaya ng Superdex 75.

Ayon sa imbensyon, ang isang bagong recombinant multicopy plasmid DNA pSX50 ay iminungkahi, na naka-encode sa synthesis ng human leukocyte alpha-2b interferon, ang pagpapahayag nito ay nasa ilalim ng kontrol ng lactose at tryptophan promoters at isang transcription terminator. Ang Plasmid pSX50 ay mayroong 3218 base pairs (bp) at nailalarawan sa pagkakaroon ng mga sumusunod na fragment:

Ang pagkakasunud-sunod mula sa nucleotide 1 hanggang sa nucleotide (nt) 176 ay may kasamang 176 bp DNA fragment na naglalaman ng tryptophan promoter (P trp);

Sequence mula sa 177 nt. hanggang 194 n. may kasamang synthetic na DNA fragment na 18 bp na naglalaman ng Shine Delgarno sequence, na responsable para sa pagsisimula ng pagsasalin;

Pagkakasunud-sunod mula sa 195 nt. hanggang 695 n. may kasamang DNA fragment na 501 bp ang laki na naglalaman ng pagkakasunud-sunod ng interferon gene na may mga sumusunod na pagpapalit ng nucleotide: sa posisyon 37, pagpapalit ng A hanggang C, sa posisyon 39, pagpapalit ng G sa T, sa posisyon 40, pagpapalit ng A hanggang C C, sa posisyon 42, pagpapalit ng G sa T , sa posisyon 67, pagpapalit ng A sa C, sa posisyon 69, pagpapalit ng G sa T, sa posisyon 70, pagpapalit ng A sa C, sa posisyon 72, pagpapalit ng A sa T, sa posisyon 96, palitan ng G ng A, sa posisyon 100, palitan ng A sa C, sa posisyon 102, palitan ng A sa T, sa posisyon 114, palitan ng A sa C, sa posisyon 120, palitan ng C may G, sa posisyon 126, palitan ng G ng A, sa posisyon 129, palitan ng G ng A, sa posisyon 330, palitan ng C ng G, sa posisyon 339 palitan ang G ng A, sa posisyon 342 palitan ang G ng A, sa posisyon 487 pinapalitan ang A ng C, sa posisyon 489 pinapalitan ang A ng T, sa posisyon 495 pinapalitan ang G ng A;

Sequence mula sa 696 nt. ayon sa 713 n. may kasamang synthetic na DNA fragment na 18 bp na naglalaman ng synthetic polylinker;

Sequence mula sa 714 nt. hanggang 1138 n. kasama ang isang fragment ng DNA ng plasmid pKK223-3 na may 4129 nt. hanggang 4553 n. 425 bp ang laki, na naglalaman ng pagkakasunud-sunod ng mahigpit na transcription terminator rrnBT 1 T 2;

Pagkakasunod-sunod mula 1139 b. hanggang 1229 n. kasama ang isang fragment ng DNA ng plasmid pUC19 na may 2487 nt. hanggang 2577 n. 91 bp ang laki, na naglalaman ng promoter ng β-lactomase gene (ampicillin resistance gene - Amp R);

Pagkakasunod-sunod mula 1230 b. hanggang 2045 n. kasama ang isang fragment ng DNA ng pUC4K plasmid na may 720 nt. hanggang 1535 AD 816 bp ang laki, na naglalaman ng istrukturang rehiyon ng kan gene;

Pagkakasunod-sunod mula 2046 b. hanggang 3218 n. kasama ang isang fragment ng DNA ng plasmid pUC19 mula 1625 hanggang 453 nt. 1173 bp ang laki, na naglalaman ng sequence na responsable para sa plasmid replication (ori) at lac promoter (P lac).

Ang mga figure 1-5 ay nagpapakita ng mga construction diagram at isang pisikal na mapa ng pSX50 plasmid.

Ipinapakita ng Figure 6 ang kumpletong pagkakasunud-sunod ng nucleotide na tinutukoy para sa plasmid pSX50.

Ang Escherichia coli strain SX50 ay nakuha sa pamamagitan ng pagbabago ng Escherichia coli BL21 cells gamit ang pSX50 plasmid gamit ang tradisyonal na teknolohiyang genetic engineering. Ang E.Coli SX50 strain ay nailalarawan sa pamamagitan ng mga sumusunod na katangian.

Mga katangiang pangkultura at morphological

Ang mga selula ay maliit, tuwid, makapal na hugis baras, gramo-negatibo, walang spore-bearing. Ang mga cell ay lumalaki nang maayos sa simpleng nutrient media. Kapag lumalaki sa Difco agar, bilog, makinis, matambok, maulap, makintab, kulay abong mga kolonya na may makinis na mga gilid ay nabuo. Kapag lumaki sa likidong media (sa minimal na medium na may glucose o sa LB na sabaw), nabubuo ang isang matinding, pantay na labo.

Mga katangiang pisikal at biyolohikal

Aerobe. Ang hanay ng temperatura para sa paglaki ay 4-42°C na may pinakamainam na pH na 6.5-7.5.

Ginamit bilang isang mapagkukunan ng nitrogen mga mineral na asing-gamot sa ammonium at nitrate form, at mga organikong compound sa anyo ng mga amino acid, peptone, tryptone, yeast extract, atbp.

Ang mga amino acid, gliserol, at carbohydrates ay ginagamit bilang pinagmumulan ng carbon. Paglaban sa antibiotic. Ang mga cell ay nagpapakita ng paglaban sa kanamycin (hanggang sa 100 μg / ml).

Ang Escherichia coli strain 8X50 ay isang gumagawa ng interferon.

Paraan, kundisyon at komposisyon ng strain storage medium

Sa L-arape na may pagdaragdag ng kanamycin sa isang konsentrasyon na 20 mcg/ml sa ilalim ng langis, sa L-broth na naglalaman ng 15% gliserol at naaangkop na antibiotic sa mga ampoules sa temperatura na minus 70°C, sa isang lyophilized na estado sa mga ampoules sa isang temperatura ng plus 4°C.

Ang Escherichia coli strain SX50 ay nakilala ayon sa Bergey's Guide (1974) bilang isang strain ng Escherichia coli species.

Paraan para sa pang-industriyang produksyon ng alpha-2b interferon

Ang isang tampok ng iminungkahing pamamaraan ay ang pag-unlad ng teknolohiya na ginagawang posible na ihiwalay ang interferon mula sa isang hindi matutunaw na anyo na naipon sa panahon ng pagbuburo, na ginagawang posible na makabuluhang gawing simple. teknolohikal na pamamaraan proseso ng paghihiwalay at pagtaas ng ani ng target na produkto.

Ang pamamaraan ay binubuo ng paglilinang ng Escherichia coli strain SH50 sa isang nutrient medium, na may patuloy na pagdaragdag ng mga nutrient substrates, mas mabuti ang glucose at yeast extract, sa proseso ng biosynthesis, mas mabuti na may pinababang nilalaman ng tryptophan, mekanikal na pagkasira ng mga selula ng microorganism sa mataas na presyon. 700-900 bar, dissolution ng interferon sa buffer solution ng guanidine hydrochloride, renaturation ng interferon sa physiological buffer solutions sa pagkakaroon ng chaotropic agents, na sinusundan ng tatlong-stage na chromatographic purification ng interferon sa Chelating Sepharose Fast Flow type resins immobilized with Cu +2 ions, ion exchange chromatography sa CM Sepharose Fast Flow type na ion exchange resin at gel filtration chromatography sa mga resin gaya ng Superdex 75.

Ang pinakamainam na kondisyon para sa pagsasagawa ng mga indibidwal na yugto ng paggawa ng interferon ay ang mga sumusunod:

Ang pagbuburo ay isinasagawa kasama ang patuloy na pagdaragdag ng mga substrate sa buong proseso, na tumutukoy mataas na antas pagpapahayag ng interferon;

Ang pagkasira ng cell ay isinasagawa sa isang disintegrator ng uri ng Gaulin sa presyon na 900 bar;

Ang pag-alis ng mga natutunaw na bahagi ng cellular (DNA, RNA, protina, lipopolysaccharides, atbp.) ay isinasagawa sa pamamagitan ng paghuhugas ng hindi matutunaw na anyo ng interferon na may mga solusyon sa buffer na naglalaman ng mga detergent (Triton XI00, urea, atbp.);

Ang nagresultang precipitate na naglalaman ng interferon ay natunaw sa isang buffer solution ng 6 M guanidine hydrochloride;

Ang renaturation ng interferon ay isinasagawa sa isang physiological buffer solution na naglalaman ng mga chaotropic agent;

Ang tatlong yugto ng chromatographic purification ng interferon ay isinasagawa sa Chelating Sepharose Fast Flow, immobilized na may Cu +2 ions, sa cation exchange resin SM Sepharose Fast Flow at gel filtration chromatography sa isang Superdex 75 type resin;

Pagkatapos ng bawat chromatographic purification, ang sterilizing filtration ay isinasagawa sa pamamagitan ng mga filter na walang pyrogen na may sukat ng butas na 0.22 microns.

Ang ani ng interferon bilang resulta ng paggamit ng inilarawan na paraan ay humigit-kumulang 400-800 mg ng interferon bawat 1 litro ng medium ng kultura. Ang kalidad ng resultang produkto ay sumusunod sa mga pamantayan at kinakailangan ng "European Pharmacopoeia" para sa sangkap na alpha-2b interferon.

Ang mga makabuluhang pagkakaiba sa pagitan ng iminungkahing pamamaraan at ang prototype ay:

Ang paggamit ng disenyo ng strain na may mas mataas na produktibidad, na nagbibigay-daan sa pagkuha ng biosynthesis higit pa interferon na may 1 litro ng medium ng kultura;

Ang paggamit ng epektibong mekanikal na pagkasira ng cellular biomass, na ginagawang posible upang makakuha ng isang purer extract ng hindi matutunaw na anyo ng interferon sa mas maikling panahon, na may mas kaunting pagkawala;

Ang paggamit ng mga solusyon sa physiological buffer sa panahon ng renaturation sa pagkakaroon ng mga chaotropic agent ay ginagawang posible upang madagdagan ang ani ng wastong renatured form ng interferon;

Ang tatlong yugto ng chromatographic purification ng interferon ay ginagawang posible upang makakuha ng interferon substance na higit sa 99% na kadalisayan ayon sa electrophoresis sa pagbabawas at hindi pagbabawas ng mga kondisyon kapag ang paglamlam ng mga gel na may pilak at higit sa 98% ayon sa RF HPLC at halos walang pyrogens (pagsusulit sa LAL).

Ang kakanyahan at mga pakinabang ng inaangkin na pangkat ng mga imbensyon ay inilalarawan ng mga sumusunod na halimbawa.

Halimbawa 1. Konstruksyon ng recombinant plasmid pSH50

Ang pamamaraan para sa pagbuo ng pSX50 plasmid ay kinabibilangan ng mga sumusunod na hakbang:

Konstruksyon ng vector plasmid pSX10;

1. pagbuo ng plasmid pSX3 (2641 bp)

2. pagbuo ng vector plasmid pSX10 (2553 bp)

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX41 (3218 bp);

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX43 (3218 bp);

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX45 (3218 bp);

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX50 (3218 bp).

Konstruksyon ng vector plasmid pSX10

Ang Vector plasmid pSX10 ay isang pUC19 vector kung saan ang coding sequence ng beta lactomase gene, na nagbibigay ng resistensya sa ampicillin, ay pinapalitan ng coding sequence ng kan gene at naglalaman ng transcription terminator mula sa pKK223-3 plasmid.

Ang pagtatayo ng vector plasmid pSS10 ay isinasagawa sa dalawang yugto:

Paghahanda ng plasmid pSX3 (2641 bp), na plasmid pUC19, kung saan ang coding region ng amp gene ay pinalitan ng coding region ng kan gene;

Paghahanda ng vector plasmid pSX10 (2553 bp), na isang plasmid pSX3 kung saan ang isang DNA fragment na naka-encode sa transcription terminator rBT 1 T 2 ay ipinasok sa likod ng BamHI site.

Upang makuha ang pSX3 plasmid, limang round ng DNA amplification gamit ang PCR (polymerase chain reaction) ay ginaganap. Sa unang pag-ikot, gamit ang pUC19 plasmid DNA bilang isang template, isang fragment ng DNA na 1828 bp ang laki ay pinalaki. (fragment PU1-PU2) gamit ang mga primer:

Ito at ang kasunod na mga reaksyon ng PCR ay isinasagawa sa sumusunod na mga kondisyon: 20 mM Tis-HCl, pH 8.8, 10 mM (NH 4) 2 SO 4, 10 mM KCl, 2 tM MgCl 2, 0.1% Triton X100, 0.1 mg/ml BSA, 0.2 mM bawat dNTP, 1.25 unit. Pfu DNA polymerase, 100 ng DNA. Ang proseso ng amplification ay binubuo ng mga sumusunod na yugto: pag-init sa 95°C sa loob ng 5 min, 35 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 2 min 72°C) at incubation sa loob ng 10 min sa 72°C. Pagkatapos ng amplification (at pagkatapos ng kasunod na mga amplification), ang DNA fragment ay dinadalisay ng electrophoresis sa isang 1% agarose gel. Sa ikalawa at pangatlong pag-ikot, gamit ang pUC4K plasmid DNA bilang isang template, ang isang 555 bp na fragment ng DNA ay pinalaki. (fragment KM1-KM2) gamit ang mga panimulang aklat:

at amplification ng isang fragment ng DNA na 258 bp. (KMZ-KM4) mula sa mga panimulang aklat

Sa ikalimang round ng PCR, ang mga fragment (PU1-PU2) at (KM1-KM4) ay pinagsama sa ilalim ng mga sumusunod na kondisyon: pag-init sa 95°C sa loob ng 5 min, 5 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 min 72°C) at incubation sa loob ng 10 min sa 72°C. Ang DNA na nakuha pagkatapos ng huling PCR ay direktang binago sa mga cell ng E. coli strain DH5 at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay aalisin, ang plasmid DNA ay ihiwalay at ang restriction analysis ay isinasagawa. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX3 na may sukat na 2641 bp.

Upang makuha ang vector plasmid pSX10, tatlong round ng DNA amplification ang ginaganap gamit ang PCR. Sa unang round, gamit ang pSX3 plasmid DNA bilang isang template, isang 2025 bp DNA fragment ang pinalaki. (fragment 10.1-10.2) gamit ang mga panimulang aklat:

Sa pangalawang pag-ikot, gamit ang DNA ng plasmid pKK223-3 bilang isang template, isang fragment ng DNA na 528 bp ang laki ay pinalaki. (fragment KK1-KK2) gamit ang mga panimulang aklat:

Sa ikatlong round ng PCR, ang mga fragment (10.1-10.2) at (KK1-KK2) ay pinagsama sa ilalim ng mga sumusunod na kondisyon: pagpainit sa 95°C sa loob ng 5 minuto, 5 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 min 72°C) at incubation sa loob ng 10 min sa 72°C. Ang DNA na nakuha pagkatapos ng huling PCR ay direktang binago sa mga cell ng E. coli strain DH5 at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay aalisin, ang plasmid DNA ay ihiwalay at ang restriction analysis ay isinasagawa. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX10 na may sukat na 2553 bp.

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX41

Ang recombinant plasmid pSX41 ay isang Hind III - BamHI DNA fragment ng vector plasmid pSX3 (2529 bp), Hind III - EcoRI DNA fragment na 168 bp, na naka-encode sa promoter ng E. coli tryptophan operon (P trp), EcoRI-XbaI isang synthetic DNA fragment na 20 bp ang laki na naka-encode sa SD sequence (Shine-Delgarno) at isang XbaI-BamHI DNA fragment na 501 bp ang laki na naka-encode sa human interferon alpha 2b gene.

Para makuha ang Hind III - BamHI DNA fragment ng vector plasmid pSX3 (2529 bp), ang DNA ng plasmid pSX3 ay ginagamot ng restriction enzymes HindIII at BamHI, na sinusundan ng electrophoretic purification sa 1% agarose gel. Hind III EcoRI DNA fragment ng 168 bp encoding ang promoter ng tryptophan operon (P trp) ay nakuha ng PCR gamit ang kabuuang E. coli DNA bilang template at primers TRP1 at PRP2, na sinusundan ng paggamot sa amplified fragment na may paghihigpit sa Hindll at EcoRI mga enzyme:

Upang makakuha ng EcoRI-Xbal ng isang sintetikong DNA fragment ng 20 bp na pag-encode ng SD sequence (Shine-Delgarno), ang mga sumusunod na komplementaryong oligonucleotides ay na-synthesize:

Ang XbaI-BamIII DNA fragment na 501 bp ang laki, na naka-encode ng human alpha 2b interferon gene, ay nakuha ng PCR gamit ang kabuuang DNA ng tao bilang template at mga primer na IFN1 at IFN2, na sinusundan ng pagproseso ng amplified fragment na may Xbal at BamIII restriction enzymes:

Susunod, ang mga electrophoretically purified fragment ay pinagsama, na pinagtalian ng T4 phage ligase enzyme, ang DNA ay binago sa mga cell ng E. coli DH5 strain at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay inaalis, ang plasmid DNA ay ihiwalay, ang restriction analysis ay isinasagawa, at ang pangunahing istruktura ng DNA ay tinutukoy. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX41 na may sukat na 3218 bp. Susunod, ang sunud-sunod na mutagenesis ng interferon gene ay isinasagawa upang mapataas ang antas ng pagpapahayag ng target na produkto. Ang mutagenesis ng interferon gene ay binubuo ng pagpapalit ng mga triplet na bihirang matagpuan sa E. coli, na nag-encode ng kaukulang mga amino acid, na may mga triplet na madalas na matatagpuan sa E. coli, na naka-encode ng parehong mga amino acid. Ang DNA mutagenesis ng interferon gene ay isinasagawa gamit ang paraan ng PCR.

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX43

Upang makuha ang recombinant plasmid pSX43, ang isang round ng DNA amplification ay isinasagawa ng PCR gamit ang DNA ng plasmid pSX41 bilang isang template at mga primer na IFN3 at IFN4:

Isinasagawa ang PCR sa ilalim ng mga sumusunod na kondisyon: pagpainit sa 95°C sa loob ng 5 min, 20 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) at incubation sa loob ng 20 min sa 72°C. Ang DNA na nakuha pagkatapos ng PCR ay direktang binago sa mga cell ng E. coli strain DH5 at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay inaalis, ang plasmid DNA ay ihiwalay, ang restriction analysis ay isinasagawa, at ang pangunahing istruktura ng DNA ay tinutukoy. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX43 na may sukat na 3218 bp.

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX45

Upang makuha ang recombinant plasmid pSX45, ang isang round ng DNA amplification ay isinasagawa ng PCR gamit ang DNA ng plasmid pSX43 bilang isang template at mga primer na IFN5 at IFN6:

Isinasagawa ang PCR sa ilalim ng mga sumusunod na kondisyon: pagpainit sa 95°C sa loob ng 5 min, 20 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) at incubation sa loob ng 20 min sa 72°C. Ang DNA na nakuha pagkatapos ng PCR ay direktang binago sa mga cell ng E. coli strain DH5 at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay inaalis, ang plasmid DNA ay ihiwalay, ang restriction analysis ay isinasagawa, at ang pangunahing istruktura ng DNA ay tinutukoy. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX45 na may sukat na 3218 bp.

Konstruksyon ng recombinant plasmid pSX50.

Upang makuha ang recombinant plasmid pSX50, ang isang round ng DNA amplification ay isinasagawa ng PCR gamit ang DNA ng plasmid pSX45 bilang isang template at mga primer na IFN7 at IFN8:

Isinasagawa ang PCR sa ilalim ng mga sumusunod na kondisyon: pagpainit sa 95°C sa loob ng 5 min, 20 PCR cycle (30 sec 95°C, 30 sec 56°C, 10 min 72°C) at incubation sa loob ng 20 min sa 72°C. Ang DNA na nakuha pagkatapos ng PCR ay direktang binago sa mga cell ng E. coli strain DH5 at nilagyan ng LA medium na naglalaman ng 20 μg/ml kanamycin. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 12 oras sa 37°C, ang mga clone ay inaalis, ang plasmid DNA ay ihiwalay, ang restriction analysis ay isinasagawa, at ang pangunahing istruktura ng DNA ay tinutukoy. Bilang resulta, nakuha ang plasmid pSX50 na may sukat na 3218 bp.

Halimbawa 2. Paghahanda ng E. coli SX50 strain - producer ng interferon

Ang interferon-producing strain E. coli SX50 ay nakuha sa pamamagitan ng pagbabago ng mga cell ng E. coli BL21 strain na may recombinant plasmid pSX50. Ang interferon na gumagawa ng strain ay lumaki sa isang 30 litro na fermenter sa isang optical density na 25.0-30.0 p.u. sa M9 medium na naglalaman ng 1% casein acid hydrolyzate (Difco), 1% glucose, 40 µg/ml kanamycin, sa temperatura na 38-39°C. Sa panahon ng proseso ng pagbuburo, ang patuloy na pagdaragdag ng nutrient substrate ay isinasagawa gamit ang isang gravimetric controller.

Halimbawa 3. Paraan para sa paghihiwalay ng interferon mula sa E. coli strain SX50

Ang interferon ay nakuha sa 4 na yugto:

Stage 1. Paglilinang ng E. coli strain SX50.

Stage 2. Ang paghihiwalay at paglilinis ng hindi matutunaw na anyo ng interferon.

Stage 3. Dissolution at renaturation ng interferon.

Stage 4. Chromatographic na paglilinis ng interferon.

Stage 1. Paglilinang ng E. coli strain SX50

Ang lumago na inoculum ng E. coli strain SX50 sa dami ng 3 litro ng rich LB medium sa loob ng 12 oras sa 26°C ay aseptikong ipinapasok sa isang fermenter na naglalaman ng 27 litro ng sterile medium na naglalaman ng M9, 1% casein acid hydrolyzate, 1% glucose, 1 mM MgCl 2, 0.1 mM CaCl 2, 40 mg/ml kanamycin. Ang paglilinang sa isang fermenter ay isinasagawa sa temperatura na 38-39°C, na pinapanatili ang pH na 7±0.15 sa pamamagitan ng awtomatikong titration na may 40% sodium hydroxide solution. Ang dissolved oxygen concentration sa hanay ng (50±10)% ng saturation ay pinapanatili sa pamamagitan ng pagbabago ng stirrer speed mula 100 hanggang 800 rpm at air supply mula 1 hanggang 15 l/min. Ang konsentrasyon ng mga substrate, sa partikular na glucose at yeast extract, ay sinusukat sa panahon ng fermentation at ang kanilang konsentrasyon ay pinananatili sa pamamagitan ng pag-iiba-iba ng rate ng supply ng mga concentrated na solusyon sa pamamagitan ng peristaltic pump gamit ang isang gravimetric controller.

Ang akumulasyon ng interferon sa insoluble form ay sinusubaybayan gamit ang phase contrast microscopy, 15% polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAAG) at reverse phase high performance chromatography (RF HPLC). Hihinto ang pagbuburo kapag naabot ang maximum optical density (~ 25-30 p.u.) at huminto ang synthesis ng interferon. Sa pagtatapos ng pagbuburo, ang kultural na likido ay pinaghihiwalay ng sentripugasyon sa isang rotor ng daloy sa bilis ng pag-ikot na 5000-10000 rpm. Ang biomass ay nakabalot sa mga plastic bag at nagyelo sa minus 70°C.

Stage 2. Ang paghihiwalay at paglilinis ng hindi matutunaw na anyo ng interferon

Ang 300-400 g ng frozen biomass ng E. coli strain SX50 ay sinuspinde sa 3000 ml ng buffer 1 (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10 mM EDTA, 0.1% Triton X100). Ang suspensyon ay ipinapasa sa isang Gaulin-type flow homogenizer, pinananatili sa isang presyon na 900 bar at nakasentro sa isang rotor ng daloy sa 15,000 rpm. Ang nagreresultang precipitate ay hinuhugasan sa ilalim ng magkatulad na mga kondisyon nang sunud-sunod na may mga buffer 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, 3 M urea) at buffer 3 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 1 mM EDTA) at panghuli ang interferon ang precipitate ay sinuspinde sa 200 ML ng buffer 3. Sa kasong ito, ang oras para sa paghihiwalay at paglilinis ng hindi matutunaw na anyo ng interferon ay hindi hihigit sa 5 oras.

Stage 3. Dissolution at renaturation ng interferon

Sa pagsususpinde ng hindi matutunaw na anyo ng interferon na nakuha sa nakaraang yugto, magdagdag ng dry guanidine hydrochloride sa isang konsentrasyon na 6 M, magdagdag ng dithiothreitol sa isang konsentrasyon ng 50 mM, Tris-HCl pH 8.0 sa isang konsentrasyon ng 50 mM, NaCl sa isang konsentrasyon ng 150 mM at Triton X100 sa isang konsentrasyon ng 0.1%, incubate sa temperatura ng silid para sa 2 oras ang hindi natutunaw na materyal ay pinaghihiwalay sa pamamagitan ng pag-sterilize ng pagsasala sa pamamagitan ng mga lamad na may diameter na 0.22 microns.

Ang renaturation ng interferon ay isinasagawa sa pamamagitan ng dahan-dahang pagtunaw ng nagresultang solusyon 100-200 beses na may buffer 4 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA). Pagkatapos nito, ang pinaghalong renaturation ay natupok na may patuloy na pagpapakilos sa loob ng 12-15 oras sa temperatura na 4-8°C. Pagkatapos ay idinagdag ang Magnesium sulfate sa isang konsentrasyon na 1 mM at ang pinagsama-samang materyal ay aalisin sa pamamagitan ng pag-sterilize ng pagsasala sa pamamagitan ng isang filter ng lamad na may diameter ng butas na 0.22 microns.

Stage 4. Chromatographic na paglilinis ng interferon

Ang Chromatographic purification ng interferon ay isinasagawa sa tatlong yugto.

1. Ang resultang renatured interferon ay unang dinadalisay gamit ang affinity chromatography sa isang Chelating Sepharose Fast Flow resin (Amersham Biosciences) na hindi kumikilos gamit ang mga Cu +2 ion. Upang gawin ito, ang interferon solution ay inilapat sa isang column na may Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow at ang interferon ay na-eluted na may 0.1 M buffer. sitriko acid pH 2.2.

2. Sa ikalawang yugto ng chromatographic purification, ang interferon solution ay inilapat sa isang CM Sepharose Fast Flow type cation exchange resin (Amersham Biosciences) at ang interferon ay na-eluted na may gradient ng mga solusyon (0.0-0.5 M NaCl) sa isang 50 mM Na(CH 3 COO) buffer, pH 5.5.

3. Ang paglilinis ng monomeric form ng interferon mula sa mga labi ng polymeric forms ng interferon ay isinasagawa sa ikatlong yugto ng interferon purification sa pamamagitan ng gel filtration sa Superdex 75 resin (Amersham Biosciences). Ang Chromatography ay isinasagawa sa isang buffer na 50 mM Na(CH 3 COO), pH 5.0, na naglalaman ng 0.15 M NaCl.

Ang inilarawan na paraan para sa paghihiwalay at paglilinis ng interferon ay ginagawang posible na makakuha ng 4-8 g ng highly purified interferon sa isang isolation cycle sa loob ng 7-10 araw mula sa biomass na nakuha mula sa 10 litro ng medium ng kultura. Ang kalidad ng nagresultang interferon ay ganap na sumusunod sa mga kinakailangan ng "European Pharmacopoeia" para sa interferon alpha-2b substance, lalo na:

Ang konsentrasyon ng interferon ay hindi bababa sa 2×10 8 IU/ml;

Ang partikular na aktibidad ng interferon ay hindi bababa sa 2.0×10 8 IU/mg;

Ang electrophoretic na kadalisayan ng gamot ay hindi bababa sa 99% sa ilalim ng pagbabawas at hindi pagbabawas ng mga kondisyon kapag ang paglamlam ng mga gel na may pilak;

Ang isoelectric point ng nakahiwalay na interferon ay nasa rehiyon ng pH 5.8-6.3;

Ang peptide map ng nakahiwalay na interferon ay hindi pangunahing naiiba sa peptide map para sa European standard interferon alpha 2b CRS;

Tulad ng sumusunod mula sa mga halimbawang ibinigay, ginagawang posible ng inaangkin na pangkat ng mga imbensyon na makakuha ng interferon alpha-2b na may mataas na ani gamit ang medyo simple at maaasahang teknolohiya.

FORMULA NG IMBENTO

1. Recombinant plasmid DNA pSX50, na naka-encode ng synthesis ng recombinant human alpha-2b interferon, na nailalarawan sa ito ay may sukat na 3218 base pairs (bp) at binubuo ng mga sumusunod na fragment: ang sequence mula 1 hanggang 176 nucleotides (bp) ay kinabibilangan isang fragment DNA na 176 bp ang laki na naglalaman ng tryptophan promoter (P trp), sequence mula 177 hanggang 194 nt. may kasamang sintetikong DNA fragment na 18 bp ang laki na naglalaman ng Shine Delgarno sequence, na responsable para sa pagsisimula ng pagsasalin, sequence mula 195 hanggang 695 nt. may kasamang DNA fragment na 501 bp na naglalaman ng interferon alpha-2b gene na may mga pagpapalit ng nucleotide: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 ( A> C), 69 (G>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (G>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A >С ), 120 (C>G), 126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A> C) , 489 (A>T), 495 (G>A), sequence mula 696 hanggang 713 nt. may kasamang synthetic na DNA fragment na 18 bp na naglalaman ng synthetic polylinker, sequence mula 714 hanggang 1138 nt. may kasamang DNA fragment ng plasmid pKK223-3 mula 4129 hanggang 4553 nt. 425 bp ang laki, na naglalaman ng sequence ng mahigpit na transcription terminator rrnBT 1 T 2, sequence mula 1139 hanggang 1229 nt. kasama ang isang fragment ng DNA ng plasmid pUC19 mula 2487 hanggang 2577 nt. 91 bp ang laki, na naglalaman ng promoter ng -lactomase gene (ampicillin resistance gene -Amp R), sequence mula 1230 hanggang 2045 nt. kasama ang isang fragment ng DNA ng pUC4K plasmid na may 720 nt. hanggang 1535 AD 816 bp ang laki, na naglalaman ng structural region ng kan gene, sequence na may 2046 bp. hanggang 3218 n. kasama ang isang fragment ng DNA ng plasmid pUC19 mula 1625 hanggang 453 nt. 1173 bp ang laki, na naglalaman ng sequence na responsable para sa plasmid replication (ori) at lac promoter (P lac).

2. Ang bacterial strain na Eschcerichia coli SX50 na binago gamit ang recombinant plasmid ayon sa claim 1 ay isang producer ng recombinant human leukocyte interferon alpha-2b.

3. Isang paraan para sa pagkuha ng interferon alpha-2b ng tao, kabilang ang paglilinang ng Escherichia coli SX5 strain ayon sa claim 2 sa isang nutrient medium na may patuloy na pagdaragdag ng nutrient substrates sa panahon ng proseso ng biosynthesis, mekanikal na pagkasira ng mga microorganism cell sa presyon na 700- 900 bar, dissolving interferon sa isang buffer solution ng guanidine hydrochloride , renaturation ng interferon sa physiological buffer solutions sa presensya ng mga chaotropic agent, tatlong yugto ng chromatographic purification ng interferon sa Chelating Sepharose Fast Flow type resins na hindi kumikilos na may Cu +2 ions, ion exchange chromatography sa CM Sepharose Fast Flow type ion exchange resins at gel filtration chromatography sa Superdex 75 type resins.

4. Ang pamamaraan ayon sa claim 3, kung saan ang paglilinang ay isinasagawa sa isang nutrient medium na may pinababang tryptophan na nilalaman na may patuloy na pagdaragdag ng mga nutrient substrates, mas mabuti ang glucose at yeast extract.

5. Ang pamamaraan ayon sa claim 3, kung saan bago matunaw ang interferon, ito ay dinadalisay sa pamamagitan ng pag-alis ng mga natutunaw na bahagi ng cellular, kabilang ang DNA, RNA, protina, lipopolysaccharides, paghuhugas ng mga solusyon sa buffer na naglalaman ng mga detergent tulad ng Triton XI 00, urea.

6. Ang pamamaraan ayon sa claim 3, kung saan pagkatapos ng bawat chromatographic purification, ang sterilizing filtration ay isinasagawa sa pamamagitan ng mga filter na may sukat ng butas na 0.22 microns.

• Klinikal na pharmacology

  Pharmacological action - antiviral, antitumor at immunomodulatory.

  Ito ay isang highly purified recombinant protein na may molekular na timbang na 19,300 daltons. Nakuha mula sa isang E. coli clone sa pamamagitan ng pag-hybrid ng isang bacterial plasmid sa human leukocyte gene na naka-encode sa synthesis ng interferon. Hindi tulad ng interferon, ang alpha-2a ay may arginine sa posisyon 23. Mayroon itong antiviral effect, na dahil sa pakikipag-ugnayan sa mga partikular na receptor ng lamad at ang induction ng RNA at sa huli ay synthesis ng protina. Ang huli, sa turn, ay pumipigil sa normal na pagpaparami ng virus o paglabas nito. Mayroon itong aktibidad na immunomodulatory, na nauugnay sa pag-activate ng phagocytosis, pagpapasigla ng pagbuo ng mga antibodies at lymphokines. May antiproliferative effect sa mga selula ng tumor.

  • Pharmacokinetics

    Sa intramuscular administration, 70% ang pumapasok sa systemic circulation. Biotransformed pangunahin sa mga bato at sa isang maliit na lawak sa atay. Ang interferon alfa-2b ay pinalabas mula sa katawan ng mga bato.

• Mga pahiwatig para sa paggamit
  • Talamak na hepatitis B.
  • Talamak na hepatitis C.
  • Mycosis fungoides.
  • Pangunahing T-cell lymphosarcoma.
  • Mabuhok na cell leukemia.
  • Maramihang myeloma (mga pangkalahatang anyo).
  • Talamak na myeloid leukemia.
  • Malignant melanoma.
  • Kanser sa pantog (mababaw).
  • Basal cell carcinoma.
  • Pointed condylomatosis.
  • Kaposi's sarcoma (kabilang ang may AIDS).
  • Non-Hodgkin's lymphoma (bilang bahagi ng combination therapy).

• Mga direksyon para sa paggamit at dosis

  Indibidwal, depende sa mga indikasyon at regimen ng paggamot.

  • Para sa hairy cell leukemia

    Ang mga matatanda ay pinangangasiwaan ng intramuscularly o subcutaneously sa 2 milyong IU/m2 3 beses sa isang linggo.

  • Para sa sarcoma ni Kaposi

    30 milyong IU/m 2 3 beses sa isang linggo.

• Contraindications
  • Malubhang sakit sa cardiovascular.
  • Malubhang dysfunction ng atay at/o bato.
  • Epilepsy at/o malala mga functional disorder CNS.
  • Talamak na hepatitis na may banta ng pagbuo ng cirrhosis sa atay.
  • Mga sakit sa atay sa yugto ng decompensation.
  • Ang talamak na hepatitis sa panahon o pagkatapos ng nakaraang therapy na may mga immunosuppressant (maliban sa kondisyon pagkatapos ng paghinto ng panandaliang therapy na may corticosteroids).
  • Autoimmune hepatitis.
  • Kasaysayan ng mga sakit na autoimmune.
  • Ang mga tatanggap ng transplant ay immunosuppressed.
  • Mga dati nang sakit sa thyroid.
  • Ang pagiging hypersensitive sa interferon alpha-2b.

• Gamitin sa panahon ng pagbubuntis at paggagatas

  Ang paggamit sa panahon ng pagbubuntis ay posible sa mga kaso kung saan ang inaasahang benepisyo sa ina ay mas malaki kaysa sa potensyal na panganib sa fetus. Babae edad ng panganganak Sa panahon ng paggamit ng interferon alfa-2b, ang mga maaasahang paraan ng pagpipigil sa pagbubuntis ay dapat gamitin.

  Kung kinakailangan na gamitin ito sa panahon ng paggagatas, ang isyu ng pagtigil sa pagpapasuso ay dapat na magpasya.

• Pakikipag-ugnayan

  Maaaring mapahusay ng mga interferon ang neurotoxic, myelotoxic o cardiotoxic na epekto ng mga gamot na inireseta dati o kasabay ng mga ito.

• Mga espesyal na kondisyon

  Hindi dapat gamitin sa mga pasyente na may mga karamdaman sa pag-iisip sa anamnesis. Gamitin nang may pag-iingat sa mga pasyente na may kasaysayan ng mga sakit sa baga (kabilang ang talamak na nakahahawang sakit sa baga), na may diabetes mellitus na may posibilidad na magkaroon ng ketoacidosis, tumaas na coagulation ng dugo (kabilang ang may kasaysayan ng thrombophlebitis at pulmonary embolism), at mga kondisyon ng matinding myelodepression.

  Bago simulan at sistematikong sa panahon ng paggamot, dapat na subaybayan ang paggana ng atay, peripheral blood pattern, biochemical blood parameters, at creatinine. Sa panahon ng paggamot, dapat na isagawa ang sapat na hydration ng katawan. Sa mga pasyente na may talamak na hepatitis C, ang mga antas ng thyroid-stimulating hormone ay dapat na subaybayan sa panahon ng paggamot.

  Sa talamak na hepatitis B, na sinamahan ng isang pagbawas sa sintetikong pag-andar ng atay (na nagpapakita ng sarili sa isang pagbawas sa mga antas ng albumin o isang pagtaas sa oras ng prothrombin), ang inaasahang benepisyo ay dapat masuri at posibleng panganib therapy. Ang paggamit para sa concomitant psoriasis ay makatwiran sa mga kaso kung saan ang inaasahang benepisyo ng therapy ay mas malaki kaysa sa potensyal na panganib. Kung mayroong kasabay na diabetes mellitus o arterial hypertension, ang pagsusuri sa fundus ng mata ay kinakailangan bago at sa panahon ng paggamot. Kung mayroong isang kasaysayan ng talamak na pagpalya ng puso, myocardial infarction at/o dati o umiiral na mga arrhythmias, ang paggamot na may interferon alfa-2b ay dapat isagawa sa ilalim ng mahigpit na pangangasiwa ng isang manggagamot.

  • Epekto sa kakayahang magmaneho ng mga sasakyan at magpatakbo ng makinarya

    Epekto sa kakayahang magmaneho ng mga sasakyan at magpatakbo ng makinarya Sa simula ng therapy, dapat mong iwasan ang potensyal mapanganib na species mga aktibidad na nangangailangan ng mas mataas na atensyon, mabilis na mga reaksyon ng psychomotor, hanggang sa panahon ng pagpapapanatag ng epekto ng interferon alfa-2b.

  Ang Interferon alpha-2b sa anyo ng pulbos para sa iniksyon at solusyon para sa iniksyon ay kasama sa Listahan ng Mga Mahalagang Gamot at Mahahalagang Gamot.

  Sa parenteral na pangangasiwa ng gamot, ang panginginig, lagnat, pagkapagod, sakit ng ulo, karamdaman, at mala-flu na sindrom ay posible. Ang mga side effect na ito ay bahagyang naibsan ng paracetamol o indomethacin.
  Kapag ginagamit ang gamot nang topically sa mauhog lamad ng mata, impeksyon sa conjunctival, hyperemia ng mauhog lamad ng mata, nag-iisang follicle, pamamaga ng conjunctiva ng lower fornix.
  Kapag gumagamit ng gamot, ang mga paglihis mula sa normal na mga parameter ng laboratoryo ay posible, na ipinakita ng leukopenia, lymphopenia, thrombocytopenia, pagtaas ng antas ng alanine aminotransferase, alkaline phosphatase. Upang napapanahong matukoy ang mga paglihis na ito sa panahon ng therapy, ang mga pangkalahatang pagsusuri sa klinikal na dugo ay dapat na ulitin tuwing 2 linggo, at mga pagsusuri sa biochemical - bawat 4 na linggo. Sa pangkalahatan, ang mga pagbabagong ito ay kadalasang menor de edad, asymptomatic at nababaligtad.

Mga side effect ng Interferon beta.

  Leukopenia. Thrombocytopenia. Anemia. Autoimmune hemolysis. Anorexia. Pagtatae. Tumaas na antas ng transaminase. Hypotension. Tachycardia. Dyspnea. Pagkahilo. Mga karamdaman sa pagtulog. Sakit sa buto at kasukasuan. Lagnat. kahinaan. Myalgia. Sakit ng ulo. Pagduduwal. suka; sa pangmatagalang paggamit- pagkalagas ng buhok.