माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स की मुख्य विधि और माइक्रोबायोलॉजी का "गोल्ड स्टैंडर्ड" बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है।

बैक्टीरियोलाजिकल विधि का उद्देश्य अध्ययन के तहत सामग्री से रोग के प्रेरक एजेंट की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करना, एक शुद्ध संस्कृति को संचित करना और गुणों के एक सेट द्वारा इस संस्कृति की पहचान करना: रोगज़नक़ कारकों, विषाक्तता की उपस्थिति से रूपात्मक, टिनक्टोरियल, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, एंटीजेनिक, और रोगाणुरोधी दवाओं और बैक्टीरियोफेज के प्रति अपनी संवेदनशीलता का निर्धारण करना।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च विधि में शामिल हैं:

1. पोषक तत्व मीडिया में परीक्षण सामग्री का उपयोग करना

2. शुद्ध संस्कृति का अलगाव

3. सूक्ष्मजीवों की पहचान (प्रजातियों से संबंधित का निर्धारण)।

एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और पहचान में निम्नलिखित अध्ययन शामिल हैं:

स्टेज I (मूल सामग्री के साथ काम)

लक्ष्य: अलग-अलग कॉलोनियाँ प्राप्त करना

1. प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी माइक्रोफ्लोरा का एक अनुमानित विचार देता है

2. अनुसंधान के लिए सामग्री तैयार करना

3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए ठोस पोषक तत्व मीडिया पर बुवाई

4. इष्टतम तापमान पर ऊष्मायन, सबसे अधिक बार 37 ° C, 18-24 घंटों के लिए

द्वितीय चरण

उद्देश्य: एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना

1. प्रेषित और परावर्तित प्रकाश (आकार, आकार, रंग, पारदर्शिता, स्थिरता, संरचना, समोच्च, कालोनियों की सतह) की कालोनियों का मैक्रोस्कोपिक अध्ययन।

2. पृथक कालोनियों की सूक्ष्म परीक्षा

3. वायु सहिष्णुता के लिए परीक्षण (परीक्षण सामग्री में सख्त anaerobes की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए)।

4. शुद्ध संस्कृति भंडारण मीडिया या वैकल्पिक मीडिया पर एक विशेष प्रजाति की कॉलोनियों की बुवाई और इष्टतम परिस्थितियों में ऊष्मायन।

स्टेज III

उद्देश्य: एक समर्पित शुद्ध संस्कृति की पहचान

1. जैविक गुणों के एक जटिल द्वारा पृथक संस्कृति की पहचान करने के लिए, निम्नलिखित का अध्ययन किया जाता है:

आकृति विज्ञान और टिनक्टोरियल गुण

सांस्कृतिक गुण (पोषक तत्व मीडिया पर विकास की प्रकृति)

जैव रासायनिक गुण (सूक्ष्मजीवों की एंजाइमेटिक गतिविधि)

सीरोलॉजिकल गुण (एंटीजेनिक)

विरुलेंट गुण (रोगजनक कारकों का उत्पादन करने की क्षमता: विषाक्त पदार्थ, एंजाइम, सुरक्षा और आक्रामकता के कारक)

जानवरों के लिए रोगजनकता

फागोलिसिस (नैदानिक \u200b\u200bबैक्टीरियोफेज के प्रति संवेदनशीलता)

एंटीबायोटिक संवेदनशीलता

अन्य व्यक्तिगत गुण

चरण IV (निष्कर्ष)

अध्ययन किए गए गुणों के अनुसार, चयनित संस्कृति के बारे में एक निष्कर्ष निकाला जाता है

अनुसंधान का पहला चरण।रोग संबंधी सामग्री का अध्ययन माइक्रोस्कोपी से शुरू होता है। रंगीन देशी सामग्री की माइक्रोस्कोपी अध्ययन की गई वस्तु के सूक्ष्मजीव परिदृश्य की सूक्ष्म संरचना, सूक्ष्मजीवों की कुछ रूपात्मक विशेषताओं को निर्धारित करना संभव बनाती है। देशी सामग्री की माइक्रोस्कोपी के परिणाम काफी हद तक आगे के शोध के पाठ्यक्रम को निर्धारित करते हैं, और बाद में उनकी तुलना पोषक तत्व मीडिया पर टीकाकरण के दौरान प्राप्त आंकड़ों से की जाती है।

नमूने में रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पर्याप्त सामग्री के साथ, ठोस पोषक तत्व मीडिया (पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए) पर टीकाकरण किया जाता है। यदि परीक्षण सामग्री में कुछ बैक्टीरिया होते हैं, तो तरल पोषक तत्व संवर्धन मीडिया पर टीकाकरण किया जाता है। पोषक तत्व मीडिया को सूक्ष्मजीवों की आवश्यकताओं के अनुसार चुना जाता है।

सूक्ष्मजीवों की खेती केवल तभी संभव है जब उनके जीवन के लिए अनुकूलतम परिस्थितियां बनाई जाती हैं और परीक्षण सामग्री के संदूषण (बाहरी रोगाणुओं द्वारा आकस्मिक संदूषण) को बाहर करने के लिए नियमों का पालन किया जाता है। कृत्रिम परिस्थितियां जो अन्य प्रजातियों के साथ संस्कृति के संदूषण को बाहर करती हैं, उन्हें टेस्ट ट्यूब, फ्लास्क या पेट्री डिश में बनाया जा सकता है। सभी बर्तनों और संस्कृति मीडिया को बाँझ होना चाहिए और, माइक्रोबियल सामग्री के टीकाकरण के बाद, बाहरी संदूषण से संरक्षित किया जाता है, जो स्टॉपर्स या मेटल कैप और लिड्स का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। परीक्षण सामग्री के साथ छेड़छाड़ बाहरी वातावरण से सामग्री के संदूषण को बाहर करने के लिए एक अल्कोहल लैंप के लौ जोन में किया जाना चाहिए, साथ ही साथ सुरक्षा उपायों का पालन करने के लिए।

पोषक तत्वों के मीडिया पर सामग्री का टीकाकरण उनके संग्रह के क्षण से 2 घंटे बाद नहीं किया जाना चाहिए।

अनुसंधान का दूसरा चरण।उपनिवेशों और शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव का अध्ययन। ऊष्मायन के एक दिन बाद, कॉलोनियां प्लेटों पर बढ़ती हैं, पहले स्ट्रोक पर निरंतर वृद्धि के साथ, और अगले पर पृथक कालोनियों। एक कॉलोनी एक ही प्रजाति के रोगाणुओं का एक संचय है जो एक कोशिका से बढ़ी है। चूंकि सामग्री सबसे अधिक बार रोगाणुओं का मिश्रण होती है, कई प्रकार की कॉलोनियां बढ़ती हैं। विभिन्न उपनिवेशों को एक पेंसिल के साथ चिह्नित किया जाता है, उन्हें नीचे की तरफ एक सर्कल के साथ रेखांकित किया जाता है, और उनका अध्ययन किया जाता है (तालिका 11)। सबसे पहले, कॉलोनियों का अध्ययन नग्न आंखों से किया जाता है: मैक्रोस्कोपिक संकेत। कप को ट्रांसमिटेड लाइट में नीचे की तरफ से (इसे बिना खोले) देखा जाता है, कॉलोनियों की पारदर्शिता को नोट किया गया है (पारदर्शी है अगर यह प्रकाश को बरकरार नहीं रखता है; पारभासी अगर यह आंशिक रूप से प्रकाश को बनाए रखता है, तो अपारदर्शी अगर प्रकाश कॉलोनी से नहीं गुजरती है), माप (मिमी में) कालोनियों का आकार। फिर ढक्कन की तरफ से कॉलोनियों की जांच की जाती है, आकार नोट किया जाता है (नियमित दौर, अनियमित, सपाट, उत्तल), सतह की प्रकृति (चिकनी, चमकदार, सुस्त, खुरदरी, झुर्रियों वाली, गीली, सूखी, पतली), रंग (रंगहीन, रंगीन)।

तालिका 11. उपनिवेशों के अध्ययन की योजना

№	संकेत	संभव कॉलोनी विशेषताओं
1.	फार्म	फ्लैट, उत्तल, गुंबददार, उदास, गोल, रोसेट, सितारा
2.	आकार, मिमी	बड़ा (4-5 मिमी), मध्यम (2-4 मिमी), छोटा (1-2 मिमी), बौना (< 1 мм)
3.	सतह चरित्र	चिकना (एस-आकार), खुरदरा (आर-आकार), घिनौना (एम-आकार), लकीरदार, ऊबड़, मैट
4.	रंग	रंगहीन, रंगीन
5.	पारदर्शिता	पारदर्शी, अपारदर्शी, पारभासी
6.	किनारों की प्रकृति	चिकना, दाँतेदार, झालरदार, रेशेदार, स्कैलप्ड
7.	आंतरिक ढांचा	सजातीय, दानेदार, विषम
8.	संगति	चिपचिपा, पतला, टेढ़ा
9.	पानी की एक बूंद में पायसीकरण	शुभ अशुभ

नोट: सूक्ष्मदर्शी के कम आवर्धन पर 5-7 बिंदुओं का अध्ययन किया जाता है।

इससे भी बेहतर, आप एक आवर्धन के साथ देखे जाने पर उपनिवेशों के बीच अंतर देख सकते हैं। ऐसा करने के लिए, मंच पर एक बंद कप उल्टा रखें, कंडेनसर को थोड़ा कम करें, कप को हिलाते हुए एक छोटे लेंस आवर्धन (x8) का उपयोग करें, कॉलोनियों की सूक्ष्म विशेषताओं का अध्ययन करें: किनारे की प्रकृति (चिकनी, लहरदार, दांतेदार, स्कैलप्ड), संरचना (सजातीय, दानेदार) रेशेदार, सजातीय, या केंद्र और परिधि में भिन्न)।

अगला, कालोनियों से माइक्रोबियल कोशिकाओं के आकारिकी का अध्ययन किया जाता है। इसके लिए, ग्राम के अनुसार दागी गई प्रत्येक चिह्नित कॉलोनियों के एक हिस्से से स्मीयर बनाए जाते हैं। कॉलोनियों को लेने के दौरान, स्थिरता पर ध्यान दिया जाता है (सूखा, अगर कॉलोनी टूट जाती है और कठिनाई के साथ लिया जाता है; नरम, अगर यह आसानी से एक लूप पर लिया जाता है; श्लेष्म, अगर कॉलोनी को लूप द्वारा खींचा जाता है; यदि कॉलोनी का हिस्सा लूप के साथ नहीं लिया जाता है, तो ठोस, केवल पूरी कॉलोनी को हटाया जा सकता है) ...

स्मीयरों की जांच करते समय, यह स्थापित किया जाता है कि कॉलोनी को एक प्रकार के सूक्ष्म जीव द्वारा दर्शाया जाता है, इसलिए, बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, अध्ययन की गई कालोनियों को अगर तिरछा किया जाता है। जब कॉलोनियों से बचते हैं, तो पास की कॉलोनियों के पाश को छूने के बिना बिल्कुल इच्छित कॉलोनियों को लेने के लिए देखभाल की जानी चाहिए। ट्यूब को 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में हस्ताक्षरित और ऊष्मायन किया जाता है।

शोध का तीसरा चरण।चयनित संस्कृति की पहचान। रोगाणुओं की पहचान - सामग्री से प्रजातियों और भिन्न के लिए अलग संस्कृति की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण। पहचान की विश्वसनीयता के लिए पहली शर्त संस्कृति की बिना शर्त शुद्धता है। रोगाणुओं की पहचान करने के लिए, सुविधाओं का एक जटिल उपयोग किया जाता है: आकारिकी (आकार, आकार, फ्लैगेल्ला, कैप्सूल, बीजाणु, एक स्मीयर में आपसी व्यवस्था), टिनोरियल (ग्राम दाग या अन्य तरीकों के संबंध), रासायनिक (ग्वानिन + साइटोसिन का अनुपात) डीएनए अणु), सांस्कृतिक (पोषण संबंधी आवश्यकताएं, खेती की स्थिति, विभिन्न पोषक मीडिया पर विकास की दर और प्रकृति), एंजाइमैटिक (मध्यवर्ती और अंतिम उत्पादों के निर्माण के साथ विभिन्न पदार्थों का दरार), सीरोलॉजिकल (एंटीजेनिक संरचना, विशिष्टता), जैविक (जानवरों के लिए विष, विषाक्तता) , allergenicity, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रभाव, आदि)।

जैव रासायनिक भेदभाव के लिए, मध्यवर्ती के गठन के साथ कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने की बैक्टीरिया की क्षमता और अंत उत्पादों, प्रोटीन और पेप्टोन को नीचा दिखाने और रेडॉक्स एंजाइम का अध्ययन करने की क्षमता।

Saccharolytic एंजाइमों का अध्ययन करने के लिए, पृथक संस्कृतियों को अर्ध-तरल मीडिया के साथ टेस्ट ट्यूब में टीका लगाया जाता है जिसमें लैक्टोज, ग्लूकोज और अन्य कार्बोहाइड्रेट और पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल होते हैं। अर्ध-तरल मीडिया पर, बुवाई मध्यम की गहराई में एक इंजेक्शन के साथ की जाती है। एक इंजेक्शन के साथ बुवाई करते समय, मध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब को एक कोण पर आयोजित किया जाता है, स्टॉपर को हटा दिया जाता है, और टेस्ट ट्यूब के किनारे को जला दिया जाता है। सामग्री को एक बाँझ लूप के साथ लिया जाता है और संस्कृति माध्यम के स्तंभ को लगभग नीचे तक छेद दिया जाता है।

प्रोटियोलिटिक एंजाइमों के निर्धारण के लिए, पृथक संस्कृति को पेप्टोन पानी या बीसीएच में इंजेक्ट किया जाता है। ऐसा करने के लिए, अपने हाथ में आप के पास इनोक्यूलेशन के साथ एक टेस्ट ट्यूब लें, और मध्यम से एक टेस्ट ट्यूब - आपसे दूर। दोनों टेस्ट ट्यूब एक ही समय में खोले जाते हैं, छोटी उंगली और हथेली के किनारे के साथ उनके प्लग को कैप्चर किया जाता है, टेस्ट ट्यूब के किनारों को जलाया जाता है, एक छोटी सी संस्कृति को कैलक्लाइंड कूल्ड लूप के साथ कैप्चर किया जाता है और दूसरी टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, जिसे टेस्ट ट्यूब की दीवार पर तरल माध्यम में विभाजित किया जाता है और मध्यम से धोया जाता है।

जब बुवाई और पुनर्विकास, बाँझपन के नियमों के अनुपालन पर ध्यान दिया जाना चाहिए, ताकि आपकी फसल को बाहरी माइक्रोफ्लोरा के साथ दूषित न किया जा सके, साथ ही साथ पर्यावरण को प्रदूषित न करें। ट्यूब को एक दिन के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के लिए थर्मोस्टैट में लेबल और रखा जाता है।

निष्कर्ष

परिणामों के लिए लेखांकन। अनुसंधान निष्कर्ष। पहचान के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और प्राप्त आंकड़ों के समग्रता के आधार पर, मैनुअल में वर्णित प्रकार के उपभेदों के वर्गीकरण और विशेषताओं के आधार पर (बर्गी के निर्धारक, 1994-1996), पृथक संस्कृतियों के प्रकार को निर्धारित किया जाता है।

जीवाणु अनुसंधान विधि। एरोबिक बैक्टीरिया की एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव (1-2 चरण)

1. बैक्टीरियोलाजिकल विधि का सार

3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके

4. शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के तरीके

1. कोच और ड्राईगल्स्की की विधि द्वारा प्राथमिक बुवाई का संचालन करें

2. शुद्ध संस्कृति पर प्रकाश डालें

कार्य योजना:

1. जीवाणुविज्ञानी अनुसंधान विधि

2. जीवाणु विधि का चरण

3. अवधारणा: शुद्ध संस्कृति, तनाव, कॉलोनी

4. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके

5. एरोबिक बैक्टीरिया की एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए तरीके

संक्रामक रोगों की प्रयोगशाला निदान की मुख्य विधि बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है। बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार अध्ययन के तहत सामग्री से रोगजनकों को अलग करने और इसे पहचानने (जीनस, प्रजातियों, किस्मों का निर्धारण) में होता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि आपको यह निर्धारित करने की अनुमति देती है:

1. रोगजनक का प्रकार और रोग का निदान

2. एंटीबायोटिक्स जो रोगज़नक़ को मारते हैं और उचित उपचार निर्धारित करते हैं

3. संक्रमण के स्रोत की पहचान करने के लिए रोगज़नक़ के फागोवार्स और सेरोवार्स

पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्राथमिक टीकाकरण भंडारण मीडिया और एसडीएस (प्लेट मीडिया) पर किया जाता है।

दूसरा चरण अलग-अलग उपनिवेशों का लक्षण वर्णन है और बुनियादी माध्यम के एक स्तंभ पर फिर से शुरू करके उनसे एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना है।

तीसरा चरण - एक शुद्ध संस्कृति की पहचान - जीनस, प्रजातियों, रोगज़नक़ों की किस्मों का निर्धारण, एंटीबायोटिक संवेदनशीलता का निर्धारण, फागोवर्स का निर्धारण।

सूक्ष्मजीव संस्कृति बैक्टीरिया है जो पोषक तत्व मीडिया पर बढ़ी है। एक शुद्ध संस्कृति पोषक मीडिया पर विकसित बैक्टीरिया की एक प्रजाति है। प्रजातियों के भीतर, ऐसी किस्में होती हैं जो एक विशेषता में भिन्न होती हैं:

1. मॉर्फोवर्स - आकृति विज्ञान में भिन्न होते हैं

2. हेमोवर - जैव रासायनिक गुणों में भिन्नता है

3. सेरोवार्स - एंटीजेनिक गुणों में भिन्नता है

4. फागोवार्स - फेज की संवेदनशीलता में भिन्नता है

पहचान, सेरोवार्स, फागोवार्स, एंटीबायोटिक संवेदनशीलता के निर्धारण के लिए एक शुद्ध संस्कृति आवश्यक है। एक विशिष्ट स्रोत (वोल्गा नदी, बीमार इवानोव, आदि) से पृथक एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया एक तनाव है। एक कॉलोनी एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया का एक दृश्य संचय है, जो तब बनता है जब एक जीवाणु कोशिका ठोस पोषक माध्यम पर गुणा करती है।

अध्ययन का पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्राथमिक टीकाकरण से पहले, परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी की जाती है। परीक्षण सामग्री में आमतौर पर रोगजनकों सहित विभिन्न जीवाणुओं का मिश्रण होता है। रोगज़नक़ को अलग करने के लिए, एक पोषक माध्यम और विशेष टीकाकरण विधियों का चयन करके पृथक कालोनियों (एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया) को प्राप्त करना आवश्यक है।

पृथक कालोनियों को प्राप्त करने की दो विधियाँ हैं:

1. ड्राईगल्स्की की विधि

बैक्टीरियोस्कोपिक विधि का सार: परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं का पता लगाना; उनके रूपात्मक और टिनोरियल गुणों का अध्ययन, देखने के क्षेत्र में एक बैक्टीरियल स्मीयर में उनके स्थान की प्रकृति।

निष्पादन तकनीक। रोगी से सामग्री का अध्ययन किया जाता है, एक भाग चुना जाता है जिसमें रोग के प्रेरक एजेंट (बलगम की गांठ, प्युलुलेंट प्लग) का सबसे अधिक संभावना है। यह एक ग्लास स्लाइड पर लागू किया जाता है (कभी-कभी सामग्री खारा में पूर्व-पायसीकृत होती है, कम बार अपकेंद्रित्र होती है)। बूंद कांच पर फैली हुई है, सूख गई और तय हो गई। इसके बाद, स्मीयर को दाग दिया जाता है और नमूना माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। आमतौर पर स्मीयर ग्राम दाग वाला होता है। कभी-कभी, सबसे कोमल के रूप में, सबसे सरल धुंधला तरीकों में से एक का उपयोग किया जाता है, फिर दवा को एक डाई के साथ चित्रित किया जाता है (उदाहरण के लिए, मेनिंगोकोकल संक्रमण, हैजा के निदान में)।

यदि आवश्यक हो, विशेष जटिल धुंधला तरीकों का उपयोग किया जाता है, उदाहरण के लिए, एसिड प्रतिरोधी बैक्टीरिया की उपस्थिति का पता लगाने के लिए कैप्सुलर सूक्ष्मजीवों या ज़ीहल-नीलसन विधि का पता लगाने के लिए बर्री-जिन्स विधि। कुछ मामलों में (विशेष रूप से, जब सूक्ष्मजीवों की मोटर गतिविधि का अध्ययन करते हैं), तैयारियां "हैंगिंग ड्रॉप" और "क्रश ड्रॉप" और सूक्ष्म अस्थिर बैक्टीरिया हैं।

बैक्टीरियोस्कोपिक विधि के लाभ:निष्पादन की सादगी, जल्दी से परिणाम प्राप्त करने की क्षमता, तकनीकी और आर्थिक उपलब्धता।

विधि के नुकसान:सूक्ष्मजीवों के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, इसके रूपात्मक गुणों को निर्धारित करने के लिए अक्सर अपर्याप्त है, क्योंकि वे संबंधित प्रजातियों के प्रतिनिधियों में समान हैं। इसके अलावा, एक विशेषता आकृति विज्ञान के साथ बैक्टीरिया अक्सर परिवर्तन से गुजरते हैं, विशेष रूप से एंटीबायोटिक दवाओं के प्रभाव में, और अप्राप्य हो जाते हैं; अंत में, परीक्षण सामग्री में रोगजनकों की एकाग्रता बेहद कम हो सकती है, और फिर उनका पता लगाना मुश्किल होता है।

उपरोक्त को ध्यान में रखते हुए, जीवाणुनाशक विधि का उपयोग शायद ही कभी बीमारी के एटियलजि को स्थापित करने के एकमात्र और निश्चित तरीके के रूप में किया जाता है। अधिक बार इसका उपयोग एक संकेत के रूप में किया जाता है, प्रारंभिक, और कुछ संक्रामक रोगों के निदान में, यह बिल्कुल भी प्रदान नहीं किया जाता है।

अभिविन्यास और प्रारंभिकता को कैसे समझें? यह चिकित्सक और जीवाणुविज्ञानी पर लागू होता है। क्लिनिशियन, प्रारंभिक उत्तर (सकारात्मक या नकारात्मक), अधिक या कम सीमा तक, अपने आगे के अध्ययन में प्राप्त जानकारी का उपयोग करता है, जब तक कि जीवाणु निदान पद्धति का अंतिम परिणाम प्राप्त नहीं हो जाता। जीवाणुविज्ञानी, संदिग्ध रोगज़नक़ के बारे में अनुमानित जानकारी प्राप्त करने के लिए, प्रयुक्त सामग्री में इसकी एकाग्रता के बारे में, सहवर्ती माइक्रोफ्लोरा की उपस्थिति के बारे में, सामग्री को संसाधित करने और रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के तरीकों को निर्धारित करता है, बाद की खेती के लिए पोषक तत्व मीडिया का चयन करता है।

जीवाणु विधि

विधि का सार सूक्ष्म जीवों की एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव है - रोगजन्य सामग्री से रोगज़नक़, इसके रूपात्मक, टिनक्टोरियल, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, सीरोलॉजिकल गुणों का विस्तृत अध्ययन, ताकि बाद में रोगज़नक़ की पहचान हो सके। शोध के जीवाणु विधि को लागू करते समय, 4 चरणों को प्रतिष्ठित किया जाता है।

A. बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा के दौरान प्राप्त आंकड़ों को ध्यान में रखते हुए, सबसे प्रभावी पोषक तत्व मीडिया का चयन किया जाता है, जिस पर यह सबसे अधिक संभावना है कि यह रोगजनक रोगाणुओं - रोगजनकों की संस्कृति के विकास को प्राप्त करेगा।

B. परीक्षण सामग्री को कई पोषक माध्यमों पर बोया जाता है: तरल और ठोस, सार्वभौमिक, चयनात्मक, विभेदक निदान। इस मामले में, घने पोषक तत्व मीडिया के साथ पेट्री डिश पर इनोक्यूलेशन एक बैक्टीरियल लूप के साथ एक स्ट्रोक के साथ किया जाता है ताकि रोगाणुओं के पृथक कालोनियों की वृद्धि को प्राप्त करने की संभावना सुनिश्चित की जा सके (आप ड्राईगल्स्की विधि का उपयोग कर सकते हैं (सूक्ष्मजीवों की संस्कृतियों को अलग करने की एक अन्य विधि)।

A. पोषक मीडिया पर विकसित सूक्ष्मजीवों के सांस्कृतिक गुणों का अध्ययन किया जाता है; संदिग्ध कॉलोनियों का चयन किया जाता है। इस बात पर जोर दिया जाना चाहिए कि संदिग्ध कॉलोनियों का चयन कार्य का सबसे जिम्मेदार और कठिन चरण है। यह, सबसे पहले, माइक्रोबियल कॉलोनियों की विशिष्ट विशेषताओं को निर्धारित करने पर आधारित है, लेकिन अक्सर यह कुछ प्रजातियों की माइक्रोबियल कॉलोनियों के विभेदन की अनुमति नहीं देता है और इसके अलावा संदिग्ध कॉलोनियों से स्मीयरों में रोगाणुओं के आकृति विज्ञान का अध्ययन करना आवश्यक है, अंतर नैदानिक \u200b\u200bमीडिया पर सूक्ष्मजीवों के विकास की ख़ासियत आदि। बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव और उनके अध्ययन को तरल भंडारण मीडिया पर प्रारंभिक बुवाई द्वारा किया जा सकता है, लेकिन अतिरिक्त अनुसंधान समय खर्च किया जाता है।

B. एक जीवाणु संबंधी स्मीयर को संदिग्ध उपनिवेशों से तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम द्वारा दाग दिया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है (1 चरण में सूक्ष्म परीक्षा के दौरान अध्ययन किए गए सूक्ष्मजीवों की पहचान)। C. संदिग्ध कॉलोनी के शेष भाग से, संस्कृति तिरछी मेसोपेटामिया अगर (आप अन्य पोषक तत्व मीडिया का उपयोग कर सकते हैं, जिस पर पृथक सूक्ष्मजीवों की अच्छी वृद्धि की उम्मीद है) पर उपसंस्कृत किया जाता है। लक्ष्य सूक्ष्म जीव की शुद्ध संस्कृति का संचय है - रोग के कथित प्रेरक एजेंट, क्योंकि अध्ययन के अगले चरण में बहुत अधिक सूक्ष्म द्रव्यमान की आवश्यकता होगी।

कथित रोगज़नक़ के सुगंधित गुणों का अध्ययन किया जाता है (वेरिएगेटेड मीडिया पर बोना, ओल्किंत्स्की, रासेल, आदि), प्रोटियोलिटिक गतिविधि (जिलेटिन पर बुवाई, तुकेव के अनुसार दूध, मेसोपेटामिया शोरबा पर विकास के दौरान इण्डोल और हाइड्रोजन सल्फाइड के गठन का निर्धारण)। एंटीबायोटिक दवाओं के लिए अलग-थलग संस्कृतियों की संवेदनशीलता की जांच की जाती है (मानक पेपर डिस्क की विधि द्वारा अक्सर, धारावाहिक dilutions की विधि द्वारा कम बार)। समूह और विशिष्ट नैदानिक \u200b\u200bसीरा के साथ ग्लास पर एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में सीरोटाइपिंग किया जाता है; मानक नैदानिक \u200b\u200bबैक्टीरियोफेज के साथ फेज टाइपिंग। पहचान के लिए, कुछ मामलों में, बैक्टीरिया में रोगज़नक़ कारकों का अध्ययन किया जाता है।

अनुसंधान के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। सूक्ष्मजीवों (रूपात्मक, टिनक्टोरियल, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, सीरोलॉजिकल, आदि) में प्रकट गुणों की तुलना के आधार पर, रोगाणुओं की पहचान की जाती है। बैक्टीरियलोलॉजिकल रिसर्च के परिणामों के साथ एक अंतिम प्रतिक्रिया जारी की जाती है, जो रोगज़नक़ के प्रकार (कभी-कभी - इसके सीरोटाइप, बायोवर, फेज प्रकार) और एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति इसकी संवेदनशीलता को इंगित करता है।

काफी बार, विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, प्रतिक्रिया जैविक, एलर्जी या अन्य अनुसंधान विधियों से पहले होती है।

बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक विधि के लाभ:अनुसंधान परिणामों की उच्च विश्वसनीयता; एंटीबायोटिक दवाओं के लिए पृथक रोगजनकों की संवेदनशीलता पर अतिरिक्त डेटा प्राप्त करने की संभावना; महामारी विज्ञान अध्ययन आयोजित करने की संभावना।

विधि के नुकसानअध्ययन की अवधि (कम से कम 4-5 दिन), साथ ही उन मामलों में इसका उपयोग करने की असंभवता शामिल करें जहां कृत्रिम पोषक मीडिया पर रोगजनकों (उदाहरण के लिए, रिकेट्सिया, क्लैमाइडिया) के संक्रमण नहीं बढ़ते हैं।

जैविक विधि

कुछ मामलों में, संक्रामक रोगों के निदान को अनुकूलित करने के लिए, एक जैविक विधि (बायोसेय) का उपयोग किया जाता है, जिसमें प्रयोगशाला जानवरों का संक्रमण शामिल होता है। इस मामले में, शोधकर्ता के अलग-अलग लक्ष्य हो सकते हैं:

रोग की नैदानिक \u200b\u200bऔर रोग संबंधी तस्वीर का प्रजनन (उदाहरण के लिए, टेटनस, लेप्टोस्पायरोसिस के निदान में);

रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति के कुछ समय में अलगाव (न्यूमोकोकल संक्रमण के निदान में);

रोगज़नक़ के पौरूष और रोगजनन का निर्धारण (तपेदिक के निदान में);

विषाक्त पदार्थों के प्रकार और प्रकार का निर्धारण (बोटुलिज़्म के निदान में)

विभिन्न जानवरों का उपयोग संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है। उनकी पसंद प्रजातियों के लिए विभिन्न etiological एजेंटों के लिए संवेदनशीलता द्वारा निर्धारित की जाती है। उदाहरण के लिए, चूहों को न्यूमोकोकल संक्रमण, एंथ्रेक्स, टेटनस के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं; गिनी सूअरों - तपेदिक, ब्रुसेलोसिस, टुलारेमिया के प्रेरक एजेंटों के लिए; खरगोशों - staphylococci, स्ट्रेप्टोकोकी, बोटुलिज़्म के लिए। एक निश्चित आयु और शरीर के वजन के केवल स्वस्थ जानवरों को अनुसंधान के लिए चुना जाता है।

सामग्री की शुरूआत से पहले, जानवरों को तय किया जाता है। छोटे जानवरों को प्रयोगकर्ता द्वारा रखा जाता है, बड़े जानवरों के लिए, विशेष उपकरणों का उपयोग किया जाता है। संक्रमित सामग्री के इंजेक्शन साइट का इलाज शराब या आयोडीन के साथ किया जाता है। संक्रमित सामग्री को इंजेक्ट किया जाता है, अध्ययन के तहत रोग के रोगजनन की विशेषताओं के आधार पर, चमड़े के नीचे, त्वचीय, अंतःशिरा, इंट्रापेरिटोनियल, इंट्राकेरेब्रल आदि।

कब त्वचीय विधिसंक्रमण, ऊन पूर्व-कट होता है, त्वचा को दाग दिया जाता है, और फिर सामग्री को इसमें रगड़ दिया जाता है।

उपचर्म विधि:जानवरों की त्वचा को एक तह में कैद किया जाता है, अधिमानतः चिमटी के साथ, सुई को आधा डाला जाता है, इंजेक्शन के बाद, शराब के साथ एक कपास झाड़ू लगाया जाता है और सुई निकाल दी जाती है।

इंट्रामस्क्युलर विधि:सामग्री को हिंद अंग के ऊपरी हिस्से की मांसपेशियों के ऊतकों में इंजेक्ट किया जाता है।

इंट्रापेरिटोनियल विधि:जानवर को उल्टा रखा जाता है ताकि आंतों को चोट न पहुंचे। इंजेक्शन निचले पेट में, मिडलाइन के किनारे पर किया जाता है। पेट की दीवार को एक झटकेदार आंदोलन के साथ छेद दिया गया है, सिरिंज एक समकोण पर है।

अंतःशिरा विधि:चूहों, चूहों को सामग्री के साथ इंजेक्ट किया जाता है - पूंछ की नस या इंट्राकार्डियक में। खरगोश को कान की नसों में इंजेक्ट किया जाता है, जो सतही रूप से स्थित हैं और स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं (यह बाहरी नस को पंचर करने के लिए बेहतर है)। इंजेक्शन के बाद, इंजेक्शन साइट को कपास ऊन और शराब के साथ जकड़ दिया जाता है ताकि रक्तस्राव न हो। इंट्राकार्डियक संक्रमण के मामले में, गिनी सूअरों को इंटरकोस्टल स्पेस में दिल के "पुश" की ऊंचाई पर सुई के साथ इंजेक्ट किया जाता है। यदि सुई सही ढंग से डाली गई है, तो सिरिंज में रक्त दिखाई देगा।

उपकरणों और सामग्रियों की तैयारी: सीरिंज, स्केलपेल, सुई को उबालकर निष्फल किया जाता है। सामग्री को सिरिंज में इकट्ठा किया जाता है (इसे इंजेक्ट करने के लिए आवश्यक थोड़ा अधिक), ऊपर की ओर मुड़ें, सुई को एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ कवर करें और पिस्टन के साथ सिरिंज से हवा के बुलबुले को धक्का दें। यह हेरफेर कीटाणुनाशक समाधान पर किया जाता है।

जब एक विष (बोटुलिनम, एंथ्रेक्स) की कार्रवाई के कारण संक्रमण का निदान किया जाता है, तो सामग्री, संभवतः रोगज़नक़ और विषाक्त पदार्थों से युक्त होती है, एक खारा समाधान में रखा जाता है, फिर तालक पाउडर (यह विष को अच्छी तरह से अवशोषित करता है) के साथ रगड़ पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। संवेदनशील जानवर फिल्टर वॉश से दूषित होते हैं। कुछ मामलों में, जब रोग का रोगजनन रोगज़नक़ के रोगजनक गुणों के कारण होता है, तो जानवरों को माइक्रोबियल निलंबन से संक्रमित किया जाता है।

संक्रमित सफेद चूहों को लेबल और विशेष ग्लास जार में रखा जाता है; एक टैग उन पर अटक गया है जो संक्रमण की तारीख और सूक्ष्मजीव के प्रकार को दर्शाता है जिसके साथ काम किया गया था। उसी तरह, कोशिकाओं को संक्रमित खरगोश या गिनी सूअरों के साथ हस्ताक्षरित किया जाता है। जानवरों पर निगाह रखी जा रही है। मृत्यु के मामले में, उन्हें तुरंत खोला जाता है।

सफेद चूहों के विच्छेदन से पहले, जानवरों को ईथर वाष्प के साथ पहले से बलिदान किया जाता है। चूहे संक्षेप में एक निस्संक्रामक समाधान में डूब जाते हैं और फिर एक क्युवेट में तय होते हैं, पंजे द्वारा पेट। बाहरी रोग परिवर्तनों की उपस्थिति या अनुपस्थिति नोट की जाती है। त्वचा का चीरा, जघन से निचले जबड़े तक अनुदैर्ध्य बनाया जाता है और अंगों की ओर। त्वचा के ऊतकों में परिवर्तन और लिम्फ नोड्स की स्थिति नोट की जाती है। उत्तरार्द्ध से, स्मीयर बनाए जाते हैं। छाती गुहा की जांच करने के लिए, कैंची के साथ दोनों तरफ पसलियों को काटकर उरोस्थि को हटा दिया जाता है। बाहरी परीक्षा के बाद, दिल के टुकड़ों को काट दिया जाता है और बीसीएच में रखा जाता है। MPA पर सीधे इनोक्यूलेशन करें, दिल, फेफड़े से प्रिंट करता है।

पेट की गुहा को खोला जाता है, एक बाहरी परीक्षा के साथ, आंतरिक अंगों की स्थिति का उल्लेख किया जाता है (आकार, रंग, स्थिरता, प्युलुलेंट फॉसी की उपस्थिति)। लीवर, प्लीहा और स्मीयर प्रिंट की संस्कृतियाँ करें।

काम बाँझ उपकरणों के साथ किया जाता है, अंग के प्रत्येक लेने के बाद, चिमटी और कैंची को एक गिलास में शराब के साथ उतारा जाता है और जलाया जाता है।

शव परीक्षा के बाद, शव और क्युवेट जहां शव परीक्षण किया गया था, एक दिन के लिए कीटाणुनाशक समाधान के साथ डाला जाता है।

फसलों को 24 घंटे (या यदि आवश्यक हो तो) पर ऊष्मायन किया जाता है

सी। 37 के बारे में सी। फिर उनकी जांच की जाती है, रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को अलग किया जाता है और इसकी पहचान एक बैक्टीरियोलाजिकल पद्धति का उपयोग करके की जाती है।

विधि के लाभ: प्राप्त परिणामों की विश्वसनीयता, जटिल उपकरणों की कोई आवश्यकता नहीं है।

नुकसान: उच्च लागत, सीमित उपयोग, संक्रमण का खतरा।

इसी तरह की जानकारी

सांस्कृतिक पद्धति-निष्कर्षण और उसके बाद के साथ शुद्ध संस्कृति टैंक का संचय। टैंक में से कुछ एक / बी प्रतिरोधी हैं, इसलिए टैंक विश्लेषण में स्राव की सनसनी का एक निर्धारण शामिल हो सकता है। साफ करने के लिए r \\ a \\ b

विशेष: मल्टीस्टेज। अवधि घटाएं।

परीक्षा: रक्त, मूत्र, मस्तिष्कमेरु द्रव, गले और नाक से बलगम, मल

पर्यावरण के घने पोषण के चयन के लिए। चरण: शुद्ध संस्कृतियों का चयन

पूर्वगामी विधि:

1) विशेष / विभेदक मीडिया पर बैक्टीरिया कालोनियों और उनकी विशेषताओं का रूपात्मक विश्लेषण

2) माइक्रोस्कोप-मैं चित्रित टैंक-आई

स्नातक अनुक्रमित टैंक-एस के लिए: बी \\ एक्स कृत्यों का अध्ययन (बायोटाइपिंग);

डिटेक्ट-ए टैंक। ग्लास (पीआर) पर सी-टायन एग्लूटिनेशन। एंटरोबैक के लिए

2) अगरर में इम्युनोडिफ़ (corynebac-ii डिप्थीरिया)

बैक्टीरियोफेज की संवेदनशीलता का निर्धारण (फगोटीपीर-ई)

इम्मुनोलोगि

एंटीजन-पहचानने वाले लिम्फोसाइटों के रिसेप्टर्स।

BCR और TCR की तुलनात्मक विशेषताएँ

बी सेल रिसेप्टर (बीसीआर)			टी सेल रिसेप्टर (TCR)
1. संरचना
मेम्ब्रेन आईजीएम (mIgM), प्लाज्मा झिल्ली पर एंकरिंग के लिए एक अतिरिक्त हाइड्रोफोबिक डोमेन के साथ कम अक्सर IgD मोनोमर (2 पैराटॉप्स की विशिष्टता, गुप्त एंटीबॉडी की विशिष्टता के साथ मेल खाता है)	Heterodimer, 2 ग्लाइकोपेप्टाइड श्रृंखलाओं से युक्त होते हैं - α तथा β (एक डाइसल्फ़ाइड बांड द्वारा एक साथ आयोजित)। प्रत्येक में 2 कार्यात्मक रूप से अलग-अलग खंड होते हैं - परिवर्तनशीलतथा स्थिर दोनों श्रृंखलाओं के परिवर्तनीय क्षेत्र (डोमेन) प्रपत्र प्रतिजन-बंधन केंद्र TCR (पैराट्रोप सीडीआर 1-3)। Α की लगातार टुकड़े, Const चेन प्रदान करते हैं निर्धारणप्लाज्मा झिल्ली पर TCR और कॉस्टिमुलरी अणुओं के साथ संपर्क
2. प्रतिजन संकेत के प्रवर्धन का तंत्र कार्यात्मक रूप से निर्भर करता है
CD79aतथा CD79b		TCR जंजीरों को CD3 के साथ संयोजन में केवल कोशिका झिल्ली पर व्यक्त किया जाता है
फ्री एंटीजन या एमएचसी-प्रोटीन कॉम्प्लेक्स की मान्यता और बंधन के बाद भी, लिम्फोसाइटों को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त संकेत नहीं है। अतिरिक्त अणुओं के साथ सहभागिता की आवश्यकता होती है। उनके साइटोप्लाज्मिक अंश इंट्रासेल्युलर एंजाइम (टायरोसिन किनेस) से जुड़े होते हैं, जिनकी सक्रियता से कैस्केड जीन अभिव्यक्ति के लिए प्रेरित होता है। यह प्रभावकारी कोशिकाओं और स्मृति कोशिकाओं में भोली कोशिकाओं के प्रसार और भेदभाव को प्रेरित करता है
Naive लिम्फोसाइट रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स
BCR कॉम्प्लेक्स \u003d mIgM + CD79a + CD79b		TCR परिसर \u003d TCR + CD3 + CD4 / 8
3. एक स्रावी रूप की उपस्थिति
हाँ (मुक्त इम्युनोग्लोबुलिन पेंटामर)		नहीं (गुप्त रूप से अतिरिक्त रूप से नहीं)
4. प्रतिजन मान्यता तंत्र (मुख्य विशेषता)!!!
एपिटोप को पहचानो सीधे "बिचौलियों के बिना"		नि: शुल्कएपीटोपों नहीं माना जाता है डबल मान्यता सिद्धांत केवल एक अणु के साथ संयोजन मेंअपने स्वयं के कृषि-औद्योगिक परिसर की सतह पर एमएचसी एचएलए द्वारा प्रतिबंधित(निचे देखो)
5. इम्यूनोजेनेसिस के दौरान बदलें
1. रिसेप्टर्स के इसोटाइप को बदलना IgG, IgA और IgEस्रावित एंटीबॉडी के वर्ग को स्विच करने के परिणामस्वरूप, (यानी, एक छोटा आईजीएम फटने के बाद, आईजीजी एंटीबॉडी हावी होने लगते हैं)। प्रतिजन के साथ बार-बार संपर्क करने पर, आईजीजी एंटीबॉडी बहुत शुरुआत से ही प्रबल हो जाते हैं, क्योंकि शुरुआत से ही स्मृति कोशिकाओं में रिसेप्टर्स को मुख्य रूप से आईजीजी अणुओं द्वारा दर्शाया जाता है। 2. आत्मीयता में वृद्धि		1. कोई परिवर्तन नहीं, स्थिर समरूपता 2. आत्मीयता निरंतर
6. समानता: एजी के प्रति संवेदनशीलता के लिए क्लोन किया गया (एंटीजनियल एपिटोप्स की मान्यता) प्रत्येक लिम्फोसाइट में रिसेप्टर्स होते हैं एक विशिष्टता (एक बेवकूफ के रूप में, यानी V -domains द्वारा क्लोन किया गया) यानी लिम्फोसाइटों में अलग-अलग एंटीजन के प्रति प्रतिक्रिया

2. इम्यूनोलॉजी में "क्लोनिंग" की अवधारणा का अर्थ है:

1. प्रत्येक बी / टी लिम्फोसाइट की क्षमता एक एकल प्रतिजन (एपिटोप) का जवाब देने के लिए। 2. प्रत्येक बी / टी-लिम्फोसाइट की क्षमता कई एपिटोप्स का जवाब देने के लिए। 3. एंटीजन-प्रस्तुत कोशिकाओं के एचएलए अणुओं को एंटीजेनिक पेप्टाइड्स का चयनात्मक बंधन। 4। लिम्फोसाइटों के एंटीजन-पहचानने वाले रिसेप्टर्स की विशिष्टता (एपिटोप पूरक)। 5. टी और बी लिम्फोसाइटों के सीडी फेनोटाइप की क्लोस्पोरेसिसिटी।

एंटीजन को पहचानने और प्रतिक्रिया करने की उनकी क्षमता में लिम्फोसाइट्स विषम हैं। इसके अलावा, प्रत्येक लिम्फोसाइट और उसके पूर्वज (क्लोन) को एक एकल प्रतिजन (अधिक सटीक, एक एपिटोप) के साथ बातचीत करने के लिए कॉन्फ़िगर किया गया है। दूसरे शब्दों में, लिम्फोसाइटों को एंटीजन के प्रति संवेदनशीलता द्वारा क्लोन किया जाता है, और यही वह है जो प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की चयनात्मकता (एंटीजेनिक विशिष्टता) निर्धारित करता है। क्लोनिंग का आणविक आधार रिसेप्टर्स की विशेषता है जो एंटीजन को बांधता है: प्रत्येक क्लोन के रिसेप्टर्स अद्वितीय होते हैं, केवल एक एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं। इसका मतलब है कि संभावित प्रतिजनों की विशाल संख्या के अनुरूप क्लोन और क्लोन-विशिष्ट रिसेप्टर्स की संख्या बड़ी होनी चाहिए। एंटीजन से मिलने से पहले, प्रत्येक क्लोन को कम संख्या में परिपक्व विश्राम कोशिकाओं द्वारा दर्शाया जाता है (उन्हें "भोला" कहा जाता है)। पूरक रिसेप्टर्स के लिए बाध्य करके, एंटीजन लिम्फोसाइट की सक्रियता प्रदान करता है, एक चयन कारक (क्लोन चयन) के रूप में कार्य करता है। क्लोन की संख्या बढ़ जाती है (क्लोन का विस्तार), और इसके घटक लिम्फोसाइट्स कोशिकाओं और स्मृति कोशिकाओं में अंतर करते हैं।

जीवाणुतत्व

3. माइकोबैक्टीरियम तपेदिक के संकेत उनकी कोशिका भित्ति की विशेषताओं से जुड़े हैं:

1. एसिड प्रतिरोध। 2. धीमी प्रजनन दर। 3. फागोसाइट्स का प्रतिरोध। 4. बाहरी वातावरण में स्थिरता। 5. एंटीबायोटिक दवाओं के लिए उच्च संवेदनशीलता।

तपेदिक... जीनस माइक्रोबैक्टीरियम जेनेरिक विशेषता - एसिड, शराब और क्षार प्रतिरोध। परिवार माइक्रोबैक्टीरिया (सैप्रोफाइट्स) डिवीजन फर्मिक्यूट्स। इमोबाइल, एरोबिक जीआर + रॉड के आकार का बैक्टीरिया। कभी-कभी वे संरचनाएं बनाते हैं जो मायसेलियम से मिलती-जुलती हैं, इसलिए नाम। पेंटिंग के लिए ज़ीहल-नीलसन विधि का उपयोग किया जाता है। यह बीमारी 3 प्रकार के माइकोबैक्टीरिया के कारण होती है: माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस एक मानव प्रजाति है, माइकोबैक्टीरियम बोविस एक गोजातीय प्रजाति है, और माइकोबैक्टीरियम अफ्रिकनम एक मध्यवर्ती प्रजाति है। [माइकोबैक्टीरियल एंथ्रोपोनोसिस के प्रेरक एजेंट: एम। लेप्रै, एम। ट्यूबरकुलोसिस। माइकोबैक्टीरियल ज़ूनोसिस का प्रेरक एजेंट: एम। बोविस।] जलाशय - रोगी, संक्रमण का मार्ग - एरोजेनिक। खराब स्वच्छता आदि के कारण घटना बढ़ रही है। कोख की छड़ पतली, सीधी या थोड़ी घुमावदार होती है, जिसमें शाखा होने की संभावना होती है। ज़ेहल-नीलसन विधि का उपयोग करते हुए, वे लाल रंग के होते हैं, जिसमें एसिड-माउथ ग्रेन्यूल (साइटोप्लाज्म में अनाज उड़ाना) होता है। तरल मीडिया में, यह कॉर्ड-फैक्टर-वायरलेंस कारक को संश्लेषित करता है। यह बहुत सारे निकोटिनिक एसिड को संश्लेषित करता है - नियासिन (नियासिन परीक्षण विधि, अंतर माइकोबैक्टीरियम)। सेल दीवार लिपिड: मायकोलिक एसिड, कॉर्ड फैक्टर, मायकोसाइड, सल्फेटाइड। इसलिए, यह एसिड प्रतिरोधी है, "बख्तरबंद राक्षस।" फैगोसाइट प्रतिरोध,। बाहरी वातावरण में स्थिर। एंटीफैगोसिटिक गतिविधि के कारक: सेल दीवार लिपिड, सिडरोफोर।

रोगजनन: एल्वियोली में प्रवेश; वायुकोशीय मैक्रोफेज में प्रजनन (कॉर्ड फैक्टर फागोसोमल-लाइससोमन संलयन को रोकता है); एक पूर्व-प्री-प्रतिरक्षा ग्रैनुलोमा का गठन (मैक्रोफेज से संक्रमित कोशिकाओं के चारों ओर एक शाफ्ट का गठन); क्षेत्रीय लिम्फ नोड्स में बैक्ट की पैठ; टी-सेल प्रतिरक्षा की प्रेरण; मैक्रोफेज का टी-निर्भर सक्रियण (पहले, थैलप, बायोकाइडल गतिविधि को बढ़ाकर, मैक्रोफेज से संक्रमित होता है, फिर टीकिल मैक्रोफेज के साथ संक्रमण को नष्ट कर देगा); एक विशिष्ट पोस्ट-इम्यून ग्रेन्युलोमा का गठन। प्रक्रिया का समापन - फाइब्रोसिस, कैल्सीफिकेशन, फॉर्मीर अव्यक्त संक्रमण, बहिर्जात सुदृढीकरण के लिए प्रतिरक्षा के रूप। [प्रक्रिया दीक्षा - इंट्रामैक्रोपेज आक्रमण। मैकेनिज्म: गैर-आक्रामक फागोसाइटोसिस, फागोलिस के गठन का दमन, फागोलिसोसोम के बायोटॉक्सिक कारकों के लिए सक्रिय प्रतिरोध, मैक्रोफेज और टी-लिम्फोसाइट्स के बीच कार्यात्मक सहयोग का दमन। प्राथमिक तपेदिक बचपन की अभिव्यक्ति (+ सबफाइब दर) में प्रमुख है - प्राथमिक प्रतिरक्षा जटिल - गोन फोकस। ग्रेन्युलोमा में, परिधि के साथ पिरोगोव-लैंगहैंस की कोशिकाएं, लिम्फोसाइट्स, मोनोन्यूक्लियर कोशिकाएं हैं। एंडोजेनस इन्फेक्शन (सेकेंडरी ट्यूब) या एक्सोजेनस रीइन्फेक्शन की संभावित पुनर्सक्रियन दुर्लभ है, तपेदिक के लिए एलर्जी की पृष्ठभूमि के खिलाफ विकसित होती है। कमजोर प्रतिरक्षा वाले व्यक्तियों में, प्रसार तपेदिक संभव है। ट्यूबरकुलिन ट्यूबरकुलोप्रोटीन (प्रोटीन डेरिवेटिव) का एक जटिल है, जिसका उपयोग एलर्जी निदान में किया जाता है। [फ्रायड के सहायक को लागू करें: पेप्टिडोग्लाइकन + सेल दीवार लिपिड]। ट्यूबरकुलोप्रोटीन में प्रतिरक्षात्मक रूप से निर्भर रोगजनकता होती है, सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा के कार्यान्वयन में भाग लेते हैं, और एलर्जी निदान में उपयोग किया जाता है। कोशिका भित्ति लिपिड: एंटीमाक्रोपेज गतिविधि, सहायक के रूप में टी-सेल उन्मुक्ति के प्रेरण में भाग लेते हैं, बैक्टीरिया की सांस्कृतिक और त्रिकोणीय विशेषताओं का निर्धारण करते हैं। निरर्थक ग्रैनुलोमा के क्षेत्र में मैक्रोफेज का मुख्य कार्य कैरोटीन प्रतिरक्षा की प्रतिक्रियाओं को प्रोत्साहित करना है। पॉज़िम्यून ग्रेन्युलोमा: ट्यूबरकुलोप्रोटीन के विलंबित प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रिया की पृष्ठभूमि के खिलाफ होता है, मैक्रोफेज और टी-इफ़ेक्टर्स के बीच कार्यात्मक सहयोग के लिए एक क्षेत्र, विनाशकारी प्रतिक्रियाओं के लिए एक आधार, स्वच्छता के लिए एक आधार (बरामद), रोगज़नक़ के एक स्पर्शोन्मुख दृढ़ता के साथ समाप्त होता है। तपेदिक में विनाश प्रक्रियाएं निर्धारित की जाती हैं: माइकोबैक्टीरियम उच्च रक्तचाप, मैक्रोफेज की साइटोकिन-निर्भर सक्रियण, तपेदिक के एलर्जी से प्रतिरक्षात्मक रूप से मध्यस्थता प्रभाव। प्रतिरक्षाविरोधी तपेदिक प्रतिरक्षा, गैर-बाँझ संक्रामक, [शरीर में माइकोबैक्टीरिया के एल-रूपों की उपस्थिति के कारण।] सेलुलर, जीवाणुरोधी।

प्रयोगशाला निदान। अनिवार्य परीक्षा के तरीकों में बैक्टीरियोस्कोपिक, बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च, बायोलॉजिकल टेस्ट, ट्यूबरकुलिन डायग्नोस्टिक्स शामिल हैं, जो ट्यूबरकुलिन (ट्यूब को शुद्ध करने वाले प्रोटीन का मिश्रण) के लिए शरीर की बढ़ी संवेदनशीलता का निर्धारण करने पर आधारित है। अधिक बार, संक्रमण और एलर्जी प्रतिक्रियाओं का पता लगाने के लिए, अनुसंधान संस्थान के एक मानक कमजोर पड़ने (14 साल तक) में शुद्ध ट्यूबरकुलिन के साथ एक इंट्राडर्मल मंटौक्स परीक्षण किया जाता है। Fluorography। उपचार एंटीबायोटिक है, सर्जन हस्तक्षेप करेगा।

बच्चे के जन्म के 5 वें दिन अंतःस्रावी रूप से लाइव एटेन्यूयर वैक्सीन - बीसीजी (बीसीजी) का इंजेक्शन लगाकर विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस किया जाता है। इसके बाद के विद्रोह 7, 13 वर्ष किए गए।

वाइरालजी

4. ऑर्थोमीक्सोवायरस के हेमाग्लगुटिनिन:

1. सेल के साथ वायरस के इंटरैक्शन की शुरुआत करता है। 2. यह सीमित प्रोटियोलिसिस के बाद सक्रिय हो जाता है। 3. विलय का कारक। 4. सुरक्षात्मक प्रतिजन। 6. जीनस इन्फ्लुएंजा के सभी प्रकारों (प्रजातियों) में उपलब्ध।

Orthomyxoviruses परिवार orthomixoviridae (बलगम, जो बलगम के लिए एक आत्मीयता के साथ उन) के जीनस इन्फ्लुएंजावर्स। 3 प्रकार हैं-ए, बी, सी। "- आरएनए (8 खंड, एकल-फंसे ए और बी हैं, सी में 7) यह विभाजन दो वायरस को आनुवांशिक जानकारी को आसानी से आदान-प्रदान करने की अनुमति देता है जब बातचीत और इस तरह वायरस की उच्च परिवर्तनशीलता में योगदान होता है, हेलिकल न्यूक्लोकैपिड। (आरएनए, न्यूक्लियोप्रोटीन की संरचना (भूमिका और प्रकार विशिष्ट एजी की संरचनाएं और नियामक) और सुपरकैप्सिड, (\u003d "जटिल) है। आरएनए-पोलीमरेज़ कॉम्प्लेक्स के प्रोटीन (एंजाइम्स): प्रोटीन पीबी 1 (ट्रांसक्रिपटेस), प्रोटीन पीबी 2 (एंडोन्यूक्लाइज), प्रोटीन पीए (प्रतिकृतियां)। इसके बाद एम-प्रोटीन आता है (वायरस के कणों की विधानसभा में, प्रकार-विशिष्ट एजी), फिर बिलिपिड परत (मेजबान कोशिका झिल्ली से बनती है, ईथर को संवेदन) जिसमें से ग्लाइकोप्रोटीन स्पाइक्स होते हैं, जेमग्लूटिनिन (एच) और न्यूरोमिनिडेज़ (एन प्रकार नहीं होता है) उसके))

एजी-वें संरचना: आंतरिक - एनपी, प्रोटीन-एम, आरएनए पोलीमरेज़ कॉम्प्लेक्स के प्रोटीन। बाहर - एच (विविधता 15, लोगों के लिए: एच 1-3) और एन (9, लोगों के लिए: एन 1, एन 2)। एच / जेड mRNA की प्रतिकृति।

(ट्रांसक्रिपटेस, एंडोन्यूक्लाइज, प्रतिकृतियां)। कोर और संश्लेषण में प्रतिकृति

एन्डोसम में सीएस एच के एंडोसाइटोसिस द्वारा, अम्लीय वातावरण में परिवर्तन होता है, पेप्टाइड्स (एफ-प्रोटीन) को उजागर करता है, जिससे वायरल और फागोलिसोसमल झिल्ली का संलयन होता है \u003d\u003e अपघटन

बहाव, बदलाव। viremia। Remantadine।

संकेत: -RNA (\u003d\u003e यह ट्रांस्क्रिप्ट, विखंडन के बिना mRNA के कार्य नहीं कर सकता है), लिफाफा (आंतरिक में एम-प्रोटीन, न्यूक्लियोप्रोथ, पॉलिमर कॉम्प्लेक्स फ़ार्म), एआरआई की उत्तेजना, न्यूक्लियोकैप्स हेलिक्स सिम शामिल हैं। प्रकारों में विभाजित करें: (ए, बी, सी) एजी-व्यक्ति प्रोटीन (न्यूक्लियोप्रोटीन) के अंदर। ए, बी, सी अलग-अलग हैं: इकोलॉजिस्ट, एजी-माप का पैमाना, वायरन फ़ार्मों की श्रेणी, स्टेप एपिडेम-टीवाई (रोगज़नक़ में नेता टाइप ए वायरस है, टाइप बी इंटरमीडिएट है, टाइप सी एकल प्रकोपों \u200b\u200bकी छिटपुट बीमारियों का कारण है)। सुपरकैप्स प्रोटीन: एन, एच। एच: सीएल के साथ बातचीत की दीक्षा (टीसी के पास सियालेटेड ग्लाइकोपेप्टाइड्स और ग्लाइकोलिपिड्स के लिए एक आत्मीयता है, जिसके कारण वायरल प्लाज्मा झिल्ली से जुड़े होते हैं), प्रोटीओसिस द्वारा सक्रिय (एक अग्रदूत विधि के रूप में संश्लेषण एक सेल नुस्खा के साथ प्रतिक्रिया व्यक्त की गई है, लेकिन नहीं) केवल कोशिका झिल्लियों के साथ विषाणु के संलयन को सुनिश्चित करना \u003d\u003e सीमित प्रोटिओलिसिस से गुजरना चाहिए, एच 1 और एच 2 में हेमग्लूट को साफ करता है और एंडोसोम्स के अम्लीय माध्यम में अतिरिक्त संलयन के बाद, एच 2 संलयन शुरू करता है), एफ-आर संलयन (साइटोकिड में न्यूक्लिसेपिड के न्यूक्लियैपिड के रिलीज का तरीका) विशेष संरचना हेमग्लूट (संलयन साइटें) बिल्ली उत्साहित, वायरल और कोशिका झिल्ली संयुक्त हैं), प्रोटेक्ट-एजी (जो इसे वायरस को रोकते हैं और संक्रमण को दबाते हैं), सभी प्रकार के इन्फ्लुएंजा में।, न्यूरोमिनिडेस, सुरक्षात्मक एजी, फैलाने वाला कारक (जो संक्रमण क्षेत्र द्वारा फैलता है। ग्लाइकोलेपिड्स और ग्लाइकोपेप्टाइड्स (जो अनिवार्य रूप से हेमाग्लगुटिनिन के लिए रिसेप्टर्स को निष्क्रिय करते हैं) से सियालिक एसिड की दरार, एपिटोप में अंतर चर है। एजी-शिफ्ट (यह एक बदलाव है, अप्रत्याशित है, एक बिल्ली की हुड वाली छवि एच, एन और नए उपप्रकारों के एंटीजन प्रोफाइल में एक पूर्ण परिवर्तन की ओर ले जाती है): केवल प्रकार ए, पर्यावरण निर्धारक (श्वसन पथ के लिए वायरस का बंधन), आनुवंशिक निर्धारक (जीन की आनुवंशिक पुनः संयोजक पर निर्भर करता है) कई उपभेदों के साथ कोशिकाओं के एक साथ संक्रमण), वायरियन प्रोटीन पीओवी के उपप्रकार के परिवर्तन, एक महामारी (एच 1 एन 1 (यह स्पेनिश है) एच 3 एन 2 (हांगकांग वायरस) का उद्भव। तनाव, उपप्रकार के भीतर तनाव विशेषताओं को निर्धारित करता है, बढ़ी हुई महामारी पारगम्यता के साथ एक तनाव को जन्म देता है) एपिड। यह एक टीका प्राप्त करना मुश्किल है: एएच - परिवर्तन, बहाव।

परीक्षा टिकट ५ination।

सामान्य सूक्ष्मजीव विज्ञान

संक्रामक रोगों की विशिष्ट रोकथाम की अवधारणा। वैक्सीन की रोकथाम के इम्यूनोलॉजिकल आधार। ई जेनर और एल। पाश्चर द्वारा काम करता है। टीके के प्रकार (मारे गए, जीवित, सबयूनिट; मोनो- और संबंधित)। पुनरावर्ती टीके, उत्पादन सिद्धांत। टीके लगवाएं। म्यूकोसल के टीके।

इम्युनिटी पैसिव है (1. न्\u200dयूट्रीली एक्\u200dटिव-इंफेक्\u200dशन के बाद और 2. कला अधिगृहीत-वैक्सीन के बाद) और सक्रिय (1.sto अधिग्रहण-एटी मां दूध या अपरा के माध्यम से और 2. अधिग्रहीत-सेरोथेरेपी की कला)। एक गैर-विशिष्ट पेशेवर संक्रमण से बचने के उद्देश्य से है, और एक विशिष्ट एक विशिष्ट उत्तेजना के खिलाफ निर्देशित है। टीकाकरण का सार उच्च रक्तचाप की स्मृति का निर्माण करना है, जो एक त्वरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्रदान करेगा। वैक्सीन के लिए केवल सुरक्षात्मक एंटीजन की आवश्यकता होती है (अर्थात, एंटीबॉडी के उत्पादन का कारण)

इतिहास: 1778 में जेनर ने साबित कर दिया कि "काउपॉक्स" के साथ टीकाकरण चेचक से बचाता है। यह शुद्ध प्रयोग का उत्पाद था। यह टीके के जन्म की तारीख है। बहुत शब्द "वैक्सीन" पाश्चर द्वारा दिया गया था। 1881 में, उन्होंने "जानबूझकर" बैक्ट के वायरलेंस को कमजोर कर दिया, उन्हें अव्यवस्था में खेती की। उन्होंने चिकन हैजा और एंथ्रेक्स के खिलाफ पहला टीका तैयार किया। 885 में उन्हें रेबीज के खिलाफ टीके मिले (यह बाद में पता चला कि यह एक मारा गया टीका था)

टीकों के प्रकार:

1. LIVE - कमजोर (क्षीण) bact दर्ज करें। Osl-t भौतिक, रासायनिक विधियाँ। "+" - उच्च इम्युनोजेनसिटी और प्रभाव की अवधि (एमके कमजोर बैक्टा ऑर्गन में विकसित करने में सक्षम हैं, जारी है "-" - प्रतिक्रियात्मकता, अस्थिरता, नगण्य को बढ़ाएं। लेकिन विरल फेनोटाइप के प्रत्यावर्तन की संभावना। उदाहरण: BCG

2. KILLED-sod-t inactivir bact, prost, मशरूम या पौरुष। उनके फायदे और नुकसान जीवित टीकों के विपरीत हैं। आपको अधिक बार खर्च करने की आवश्यकता है। उदाहरण: पी-इन फ्लू, टाइफाइड बुखार

3. SUBMITTED - शुद्ध सुरक्षात्मक एजी से मिलकर बनता है। अभिक्रियाशीलता न्यूनतम होती है। उच्च इम्युनोजेनेसिटी के बारे में, जो कि सहायक की मदद से बढ़ाया जाता है

1) संयुग्मित - isp-t बनाने के लिए एक ई-कि T-nezavis AG के खिलाफ। T-nezavis AG में मेमोरी स्टॉप नहीं है।

2) टॉक्सोइड-बेअसर विषाक्त पदार्थों के जीवाणु। समस्या इस तथ्य से उपजी है कि मोनोथेराओकोरेशन दुर्लभ है। एक्सोटॉक्सिन का औपचारिक रूप से इलाज किया जाता है और वे पवित्र द्वीप की विषाक्तता खो देते हैं, लेकिन प्रतिरक्षा बनी रहती है। वे बैक्टीरिया वाहक से रक्षा नहीं करते हैं। उदाहरण: स्तंभ विषाक्त

3) रिकॉम्बिनेंट पुनः संयोजक डीएनए अणु होते हैं, जो बैक्टीरिया प्लास्मिड के आधार पर बनाए जाते हैं, जिसमें सुरक्षात्मक एंटीजन के जीन डाले जाते हैं। ऐसे डीएनए सिंथ-टी एजी, उत्प्रेरण हास्य और सिलिअरी ईएल।

1) बेयर-स्लिप फ्री प्लास्मिड या वे जो आर्ट मीडिया पर प्रसारित हैं। वे सुरक्षित हैं। उदाहरण: हेपेटाइटिस बी के खिलाफ

2) प्रसव के लिए वेक्टर-लागू कमजोर बैक्ट

4.MUKOSAL- विशेष रूप से श्वसन पथ, आंतों और जननांग पथ के संक्रमण के खिलाफ श्लेष्मा झिल्ली के पूर्ण के लिए बनाया गया है। मौके पर पोमिसो डी-आई, वे सामान्य इम-टी को भी प्रभावित करते हैं। वे जरूरी सहायक का विरोध कर रहे हैं। लेकिन उनका कार्यान्वयन बहुत धीमा है

माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स की मुख्य विधि और माइक्रोबायोलॉजी का "गोल्ड स्टैंडर्ड" बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है।

बैक्टीरियोलाजिकल विधि का उद्देश्य अध्ययन के तहत सामग्री से रोग के प्रेरक एजेंट की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करना, एक शुद्ध संस्कृति को संचित करना और गुणों के एक सेट द्वारा इस संस्कृति की पहचान करना: रोगज़नक़ कारकों, विषाक्तता की उपस्थिति से रूपात्मक, टिनक्टोरियल, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, एंटीजेनिक, और रोगाणुरोधी दवाओं और बैक्टीरियोफेज के प्रति अपनी संवेदनशीलता का निर्धारण करना।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च विधि में शामिल हैं:

1. पोषक तत्व मीडिया में परीक्षण सामग्री का उपयोग करना

2. शुद्ध संस्कृति का अलगाव

3. सूक्ष्मजीवों की पहचान (प्रजातियों से संबंधित का निर्धारण)।

एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और पहचान में निम्नलिखित अध्ययन शामिल हैं:

स्टेज I (मूल सामग्री के साथ काम)

लक्ष्य: अलग-अलग कॉलोनियाँ प्राप्त करना

1. प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी माइक्रोफ्लोरा का एक अनुमानित विचार देता है

2. अनुसंधान के लिए सामग्री की तैयारी (आइसोटोनिक NaCl समाधान के साथ कमजोर पड़ना, आदि)

3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए ठोस पोषक तत्व मीडिया पर बुवाई

4. इष्टतम तापमान पर ऊष्मायन, सबसे अधिक बार 37 ° C, 18-24 घंटों के लिए

द्वितीय चरण

उद्देश्य: एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना

1. मैक्रोस्कोपिक परीक्षा कालोनियों प्रेषित और परावर्तित प्रकाश (आकार, आकार, रंग, पारदर्शिता, स्थिरता, संरचना, समोच्च, कालोनियों की सतह) की विशेषता।

2. पृथक कालोनियों की सूक्ष्म परीक्षा

3. वायु सहिष्णुता के लिए परीक्षण (परीक्षण सामग्री में सख्त anaerobes की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए)।

4. शुद्ध संस्कृति भंडारण मीडिया या वैकल्पिक मीडिया पर एक विशेष प्रजाति की कॉलोनियों की बुवाई और इष्टतम परिस्थितियों में ऊष्मायन।

स्टेज III

उद्देश्य: एक समर्पित शुद्ध संस्कृति की पहचान

1. जैविक गुणों के एक जटिल द्वारा पृथक संस्कृति की पहचान करने के लिए, निम्नलिखित का अध्ययन किया जाता है:

आकृति विज्ञान और टिनक्टोरियल गुण

सांस्कृतिक गुण (पोषक तत्व मीडिया पर विकास की प्रकृति)

जैव रासायनिक गुण (सूक्ष्मजीवों, ग्लाइकोलाइटिक, प्रोटियोलिटिक और अन्य गतिविधि की एंजाइमेटिक गतिविधि)

सीरोलॉजिकल गुण (एंटीजेनिक)

विरुलेंट गुण (रोगजनक कारकों का उत्पादन करने की क्षमता: विषाक्त पदार्थ, एंजाइम, सुरक्षा और आक्रामकता के कारक)

जानवरों के लिए रोगजनकता

फागोलिसिस (नैदानिक \u200b\u200bबैक्टीरियोफेज के प्रति संवेदनशीलता)

एंटीबायोटिक संवेदनशीलता

अन्य व्यक्तिगत गुण

चरण IV (निष्कर्ष)

अध्ययन किए गए गुणों के अनुसार, चयनित संस्कृति के बारे में एक निष्कर्ष निकाला जाता है

अनुसंधान का पहला चरण।रोग संबंधी सामग्री का अध्ययन माइक्रोस्कोपी से शुरू होता है। रंगीन देशी सामग्री की माइक्रोस्कोपी अध्ययन की गई वस्तु के सूक्ष्मजीव परिदृश्य की सूक्ष्म संरचना, सूक्ष्मजीवों की कुछ रूपात्मक विशेषताओं को निर्धारित करना संभव बनाती है। देशी सामग्री की माइक्रोस्कोपी के परिणाम काफी हद तक आगे के शोध के पाठ्यक्रम को निर्धारित करते हैं, और बाद में उनकी तुलना पोषक तत्व मीडिया पर टीकाकरण के दौरान प्राप्त आंकड़ों से की जाती है।

नमूने में रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पर्याप्त सामग्री के साथ, ठोस पोषक तत्व मीडिया (पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए) पर टीकाकरण किया जाता है। यदि परीक्षण सामग्री में कुछ बैक्टीरिया होते हैं, तो तरल पोषक तत्व संवर्धन मीडिया पर टीकाकरण किया जाता है। पोषक तत्व मीडिया को सूक्ष्मजीवों की आवश्यकताओं के अनुसार चुना जाता है।

सूक्ष्मजीवों की खेती केवल तभी संभव है जब उनके जीवन के लिए अनुकूलतम परिस्थितियां बनाई जाती हैं और परीक्षण सामग्री के संदूषण (बाहरी रोगाणुओं द्वारा आकस्मिक संदूषण) को बाहर करने के लिए नियमों का पालन किया जाता है। कृत्रिम परिस्थितियां जो अन्य प्रजातियों के साथ संस्कृति के संदूषण को बाहर करती हैं, उन्हें टेस्ट ट्यूब, फ्लास्क या पेट्री डिश में बनाया जा सकता है। सभी बर्तनों और संस्कृति मीडिया को बाँझ होना चाहिए और, माइक्रोबियल सामग्री के टीकाकरण के बाद, बाहरी संदूषण से संरक्षित किया जाता है, जो स्टॉपर्स या मेटल कैप और लिड्स का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। परीक्षण सामग्री के साथ छेड़छाड़ बाहरी वातावरण से सामग्री के संदूषण को बाहर करने के लिए एक अल्कोहल लैंप के लौ जोन में किया जाना चाहिए, साथ ही सुरक्षा उपायों का पालन करने के लिए।

पोषक तत्वों के मीडिया पर सामग्री का टीकाकरण उनके संग्रह के क्षण से 2 घंटे बाद नहीं किया जाना चाहिए।

अनुसंधान का दूसरा चरण।उपनिवेशों और शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव का अध्ययन। ऊष्मायन के एक दिन बाद, कॉलोनियां प्लेटों पर बढ़ती हैं, पहले स्ट्रोक पर निरंतर वृद्धि के साथ, और अगले पर पृथक कालोनियों। एक कॉलोनी एक ही प्रजाति के रोगाणुओं का एक संचय है जो एक कोशिका से बढ़ी है। चूंकि सामग्री सबसे अधिक बार रोगाणुओं का मिश्रण होती है, कई प्रकार की कॉलोनियां बढ़ती हैं। विभिन्न उपनिवेशों को एक पेंसिल के साथ चिह्नित किया जाता है, उन्हें नीचे की तरफ एक सर्कल के साथ रेखांकित किया जाता है, और उनकी जांच की जाती है (तालिका 12)। सबसे पहले, कॉलोनियों का अध्ययन नग्न आंखों से किया जाता है: मैक्रोस्कोपिक संकेत। कप को ट्रांसमिटेड लाइट में नीचे की तरफ से (इसे बिना खोले) देखा जाता है, कॉलोनियों की पारदर्शिता को नोट किया गया है (पारदर्शी है अगर यह प्रकाश को बरकरार नहीं रखता है; पारभासी अगर यह आंशिक रूप से प्रकाश को बनाए रखता है, तो अपारदर्शी अगर प्रकाश कॉलोनी से नहीं गुजरती है), माप (मिमी में) कालोनियों का आकार। फिर ढक्कन की तरफ से कॉलोनियों की जांच की जाती है, आकार नोट किया जाता है (नियमित दौर, अनियमित, सपाट, उत्तल), सतह की प्रकृति (चिकनी, चमकदार, सुस्त, खुरदरी, झुर्रियों वाली, गीली, सूखी, पतली), रंग (रंगहीन, रंगीन)।

तालिका 12. उपनिवेशों के अध्ययन की योजना

№	संकेत	संभव कॉलोनी विशेषताओं
1.	फार्म	फ्लैट, उत्तल, गुंबददार, उदास, गोल, रोसेट, सितारा
2.	आकार, मिमी	बड़ा (4-5 मिमी), मध्यम (2-4 मिमी), छोटा (1-2 मिमी), बौना (< 1 мм)
3.	सतह चरित्र	चिकना (एस-आकार), खुरदरा (आर-आकार), घिनौना (एम-आकार), लकीरदार, ऊबड़, मैट
4.	रंग	बेरंग, रंग में ... रंग
5.	पारदर्शिता	पारदर्शी, अपारदर्शी, पारभासी
6.	किनारों की प्रकृति	चिकना, दाँतेदार, झालरदार, रेशेदार, स्कैलप्ड
7.	आंतरिक ढांचा	सजातीय, दानेदार, विषम
8.	संगति	चिपचिपा, पतला, टेढ़ा
9.	पानी की एक बूंद में पायसीकरण	शुभ अशुभ

नोट: 5-7 बिंदुओं का अध्ययन माइक्रोस्कोप के कम आवर्धन या एक आवर्धक कांच के तहत किया जाता है।

इससे भी बेहतर, आप एक आवर्धन के साथ देखे जाने पर उपनिवेशों के बीच अंतर देख सकते हैं। ऐसा करने के लिए, मंच पर एक बंद कप उल्टा रखें, कंडेनसर को थोड़ा कम करें, कप को हिलाते हुए एक छोटे लेंस आवर्धन (x8) का उपयोग करें, कॉलोनियों की सूक्ष्म विशेषताओं का अध्ययन करें: किनारे की प्रकृति (चिकनी, लहरदार, दांतेदार, स्कैलप्ड), संरचना (सजातीय, दानेदार) रेशेदार, सजातीय, या केंद्र और परिधि में भिन्न)।

अगला, कालोनियों से माइक्रोबियल कोशिकाओं के आकारिकी का अध्ययन किया जाता है। इसके लिए, ग्राम के अनुसार दागी गई प्रत्येक चिह्नित कॉलोनियों के एक हिस्से से स्मीयर बनाए जाते हैं। कॉलोनियों को लेने के दौरान, स्थिरता पर ध्यान दिया जाता है (सूखा, अगर कॉलोनी टूट जाती है और कठिनाई के साथ लिया जाता है; नरम, अगर यह आसानी से एक लूप पर लिया जाता है; श्लेष्म, अगर कॉलोनी को लूप द्वारा खींचा जाता है; यदि कॉलोनी का हिस्सा लूप के साथ नहीं लिया जाता है, तो ठोस, केवल पूरी कॉलोनी को हटाया जा सकता है) ...

स्मीयरों की जांच करते समय, यह स्थापित किया जाता है कि कॉलोनी को एक प्रकार के सूक्ष्म जीव द्वारा दर्शाया जाता है, इसलिए, बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, अध्ययन की गई कालोनियों को अगर तिरछा किया जाता है। जब कॉलोनियों से बचते हैं, तो पास की कॉलोनियों के पाश को छूने के बिना बिल्कुल इच्छित कॉलोनियों को लेने के लिए देखभाल की जानी चाहिए। ट्यूब को 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में हस्ताक्षरित और ऊष्मायन किया जाता है।

शोध का तीसरा चरण।चयनित संस्कृति की पहचान। रोगाणुओं की पहचान - सामग्री से प्रजातियों और भिन्न के लिए अलग संस्कृति की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण। विश्वसनीय पहचान के लिए पहली शर्त संस्कृति की बिना शर्त शुद्धता है। रोगाणुओं की पहचान करने के लिए, सुविधाओं के एक सेट का उपयोग किया जाता है: रूपात्मक (आकार, आकार, फ्लैगेल्ला, कैप्सूल, बीजाणु, एक स्मीयर में आपसी व्यवस्था), टिनक्टोरियल (ग्राम धुंधला या अन्य तरीकों से संबंध), रासायनिक (डीएनए अणु में ग्वानिन + साइटोसिन का अनुपात), सांस्कृतिक () पोषक तत्वों की जरूरत, खेती की स्थिति, विभिन्न पोषक माध्यमों पर विकास की दर और विकास की प्रकृति), एंजाइमैटिक (मध्यवर्ती और अंतिम उत्पादों के निर्माण के साथ विभिन्न पदार्थों की दरार), सीरोलॉजिकल (एंटीजेनिक संरचना, विशिष्टता), जैविक (जानवरों के लिए विषाणु, विषाक्तता, एलर्जी, एंटीबायोटिक प्रभाव, आदि)। आदि।)।

जैव रासायनिक भेदभाव के लिए, मध्यवर्ती और अंत उत्पादों के गठन के साथ कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने की बैक्टीरिया की क्षमता, प्रोटीन और पेप्टोन को नीचा दिखाने की क्षमता का अध्ययन किया जाता है, और रेडॉक्स एंजाइमों का अध्ययन किया जाता है।

Saccharolytic एंजाइमों के अध्ययन के लिए चयनित संस्कृतियों में अर्ध-तरल मीडिया युक्त लैक्टोज, ग्लूकोज और अन्य कार्बोहाइड्रेट और पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल के साथ टेस्ट ट्यूब में टीका लगाया जाता है। अर्ध-तरल मीडिया पर, बुवाई मध्यम की गहराई में एक इंजेक्शन के साथ की जाती है। एक इंजेक्शन के साथ बुवाई करते समय, मध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब को एक कोण पर आयोजित किया जाता है, स्टॉपर को हटा दिया जाता है, और टेस्ट ट्यूब के किनारे को जला दिया जाता है। सामग्री को एक बाँझ लूप के साथ लिया जाता है और संस्कृति माध्यम के स्तंभ को लगभग नीचे तक छेद दिया जाता है।

प्रोटियोलिटिक एंजाइमों के निर्धारण के लिए चयनित संस्कृति को पेप्टोन पानी या BCH में सम्मिलित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, अपने हाथ में आप के पास इनोक्यूलेशन के साथ एक टेस्ट ट्यूब लें, और मध्यम से एक टेस्ट ट्यूब - आपसे दूर। दोनों टेस्ट ट्यूब एक ही समय में खोले जाते हैं, छोटी उंगली और हथेली के किनारे के साथ उनके प्लग को कैप्चर किया जाता है, टेस्ट ट्यूब के किनारों को जलाया जाता है, एक छोटी सी संस्कृति को कैलक्लाइंड चिल्ड लूप के साथ कैप्चर किया जाता है और दूसरी टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, जिसे टेस्ट ट्यूब की दीवार पर तरल माध्यम में विभाजित किया जाता है और मध्यम से धोया जाता है।

जब बुवाई और पुनर्विकास, बाँझपन के नियमों के अनुपालन पर ध्यान दिया जाना चाहिए, ताकि आपकी फसल को बाहरी माइक्रोफ्लोरा के साथ दूषित न किया जा सके, साथ ही साथ पर्यावरण को प्रदूषित न करें। ट्यूब को एक दिन के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के लिए थर्मोस्टैट में लेबल और रखा जाता है।

निष्कर्ष

परिणामों के लिए लेखांकन। अनुसंधान निष्कर्ष। पहचान के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और प्राप्त आंकड़ों के समग्रता के आधार पर, मैनुअल में वर्णित प्रकार के उपभेदों के वर्गीकरण और विशेषताओं के आधार पर (बर्गी के निर्धारक, 1994-1996), पृथक संस्कृतियों के प्रकार को निर्धारित किया जाता है।