Ang complement fixation reaction (CFR) ay kapag ang mga antigen at antibodies ay tumutugma sa isa't isa, sila ay bumubuo ng isang immune complex kung saan ang complement (C) ay nakakabit sa pamamagitan ng Fc fragment ng mga antibodies, ibig sabihin, ang complement ay nakatali ng antigen-antibody complex. Kung hindi nabuo ang antigen-antibody complex, mananatiling libre ang complement.

Ang tiyak na pakikipag-ugnayan ng AG at AT ay sinamahan ng adsorption (pagbubuklod) ng pandagdag. Dahil ang proseso ng pag-aayos ng pandagdag ay hindi nakikita sa paningin, iminungkahi nina J. Bordet at O. Zhangu ang paggamit ng hemolytic system (mga pulang selula ng dugo ng tupa + hemolytic serum) bilang isang tagapagpahiwatig, na nagpapakita kung ang pandagdag ay naayos ng AG-AT complex. Kung ang AG at AT ay tumutugma sa isa't isa, ibig sabihin, nabuo ang isang immune complex, kung gayon ang complement ay nakatali sa kumplikadong ito at hindi nangyayari ang hemolysis. Kung ang AT ay hindi tumutugma sa AG, kung gayon ang kumplikado ay hindi nabuo at umakma, nananatiling libre, pinagsasama sa pangalawang sistema at nagiging sanhi ng hemolysis.

Pag-unlad ng reaksyon

Ang reaksyon ay nangyayari sa dalawang yugto na kinasasangkutan ng dalawang sistema; bacterial at hemolytic. Ang unang reaksyon (tiyak) ay nagsasangkot ng antigen 4-+ antibody + complement. Ang isang positibong resulta ng reaksyon, na nangyayari kapag ang mga antibodies ay tumutugma sa isang antigen, ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagbuo ng isang partikular na bacterial antigen-antibody complex na may adsorbed, o, gaya ng sinasabi nila, "nakagapos" na pandagdag. Ang nananatiling hindi nakikita, ang kumplikado ay hindi nagiging sanhi ng anuman panlabas na pagbabago kapaligiran kung saan ito nabuo. Ang isang negatibong resulta ng RSC ay nangyayari sa kawalan ng tiyak na pagkakaugnay sa pagitan ng antigen at serum antibody at nailalarawan sa pamamagitan ng pagpapanatili ng libreng aktibong pandagdag. Ang unang yugto ng RSC ay maaaring isagawa sa isang thermostat sa 37°C (1-2 oras) o sa refrigerator sa 3-4°C (18-20 oras). Sa matagal na pagbuo ng antigen-antibody immune complex sa malamig, ang mas kumpletong pagbubuklod ng pandagdag ay nangyayari at, bilang isang resulta, ang sensitivity ng reaksyon ay tumataas. Kapag nagsasagawa ng mga paghahambing na eksperimento, ang Soviet immunologist na Academician. Ipinakita ni V.I. Ioffe at ng kanyang mga mag-aaral na sa ilalim ng mga kondisyon ng pangmatagalang pag-aayos ng pandagdag sa lamig, posibleng makuha ang 100-500 beses na mas maliit na halaga ng antigen at makakuha ng mga positibong resulta na may mas malaking pagbabanto ng immune serum kaysa sa eksperimento sa pag-aayos ng pandagdag sa isang temperatura ng 37 ° C sa para sa 1-2 oras Ang ikalawang yugto ng reaksyon (tagapagpahiwatig) ay nangyayari sa pagitan ng mga reagents ng hemolytic system (isang pinaghalong 3% na suspensyon ng mga erythrocytes at hemolytic serum sa. pantay na volume

) sa temperatura na 37 °C lamang sa pagkakaroon ng pandagdag na nanatiling libre mula sa unang yugto ng reaksyon (negatibong reaksyon). Sa kawalan ng libreng aktibong pandagdag, ang hemolysis ng mga pulang selula ng dugo sa ilalim ng impluwensya ng mga tiyak na hemolysin ay hindi nangyayari (positibo ang reaksyon).

Ang complement fixation reaction (CFR) ay isang komplikadong serological reaction. Upang maisakatuparan ito, 5 sangkap ang kailangan, katulad ng: AG, AT at complement (unang sistema), sheep erythrocytes at hemolytic serum (second system).

Ang antigen para sa CSC ay maaaring mga kultura ng iba't ibang napatay na microorganism, ang kanilang mga lysate, mga bahagi ng bacteria, pathologically altered at normal na mga organo, tissue lipids, mga virus at mga materyales na naglalaman ng virus.

Ang sariwa o tuyo na whey ay ginagamit bilang pandagdag guinea pig.

Mekanismo ng reaksyon

Ang RSK ay isinasagawa sa dalawang yugto: 1st phase - pagpapapisa ng itlog ng isang halo na naglalaman ng tatlong sangkap antigen + antibody + pandagdag; 2nd phase (indicator) - pagtuklas ng libreng pandagdag sa pinaghalong sa pamamagitan ng pagdaragdag dito ng isang hemolytic system na binubuo ng mga erythrocytes ng tupa at hemolytic serum na naglalaman ng mga antibodies sa kanila. Sa 1st phase ng reaksyon, kapag ang antigen-antibody complex ay nabuo, complement binds, at pagkatapos ay sa 2nd phase, hemolysis ng erythrocytes sensitized sa pamamagitan ng antibodies ay hindi mangyayari; positibo ang reaksyon. Kung ang antigen at antibody ay hindi tumutugma sa isa't isa (walang antigen o antibody sa sample ng pagsubok), ang pandagdag ay nananatiling libre at sa ika-2 yugto ay sasali sa erythrocyte - anti-erythrocyte antibody complex, na nagiging sanhi ng hemolysis; negatibo ang reaksyon.

Aplikasyon

Ang complement fixation reaction ay maaaring gamitin sa:
1) pagkakakilanlan ng mga tiyak na antibodies sa hindi kilalang suwero batay sa kanilang pakikipag-ugnayan sa isang antigen ng kilalang kalikasan;
2) pag-aaral ng mga katangian ng antigen bilang reaksyon sa isang kilalang tiyak na suwero. Paghahanda ng mga sangkap para sa pagtatanghal ng RSC.

1. Ang serum ng dugo na nakuha para sa pananaliksik, sa bisperas ng reaksyon, ay pinainit sa isang paliguan ng tubig sa 56°C sa loob ng 30 minuto upang hindi aktibo ang sarili nitong pandagdag. Ang inactivated na serum ay maaaring maimbak sa 3-4°C sa loob ng 5-6 na araw. Sa araw ng eksperimento, ang serum ay diluted na may isotonic sodium chloride solution sa ratio na 1:5 (0.1 ml ng test serum + 0.4 ml ng isotonic sodium chloride solution).

2. Ang antigen para sa produksyon ng CSC ay maaaring mga kultura ng iba't ibang microbes, bacterial proteins at extracts na nakuha mula sa microbial culture, pathologically altered at normal na mga organ at tissue. Ang mga tampok ng paghahanda ng antigen ay tinutukoy ng kalikasan nakakahawang proseso at ang mga katangian ng pathogen nito.

3. Complement ay isang halo ng mga serum na nakuha mula sa 3-5 malusog na guinea pig, o tuyong pandagdag sa mga ampoules.

Kaagad bago gamitin, ang guinea pig serum ay diluted na may isotonic solution ng sodium chloride sa ratio na 1:10 para makakuha ng stock solution.

4. Bago isagawa ang eksperimento, ang hemolytic serum ay hindi aktibo sa pamamagitan ng pag-init sa temperatura na 56 °C sa loob ng 30 minuto. Upang maisagawa ang pangunahing eksperimento sa RSC, pati na rin ang pag-titrate ng complement at antigen, ang hemolytic serum ay ginagamit sa triple titer. Halimbawa, kung ang titer ng hemolytic serum ay 1: 1800, isang serum dilution na 1: 600 ang ginagamit sa reaksyon.

5. Ang mga erythrocytes ay nakukuha mula sa defibrinated na dugo ng tupa. Upang alisin ang mga fibrin film, ang dugo ay sinasala sa pamamagitan ng isang tatlong-layer na gauze filter. Ang resultang filtrate ay centrifuged, ang serum ay sinipsip at pinatuyo, at ang mga erythrocytes ay hinuhugasan ng 3-4 beses na sentripugasyon na may isotonic sodium chloride solution. Kapag ang mga pulang selula ng dugo ay hinugasan sa huling pagkakataon, ang supernatant layer ng likido ay dapat na ganap na transparent. Ang isang 3% na suspensyon ay inihanda mula sa hugasan na mga pulang selula ng dugo sa isang isotonic sodium chloride solution. Ang pagkakaroon ng paghahanda ng mga sangkap na kasangkot sa RSC sa paraang nasa itaas, magpatuloy sa titration ng hemolytic serum, complement at antigen.



Ang complement fixation reaction (FFR) ay isinasagawa sa dalawang yugto: sa unang yugto, ang antigen ay pinagsama sa test serum, kung saan ang pagkakaroon ng mga antibodies ay ipinapalagay, ang pandagdag ay idinagdag, at natupok sa isang thermostat sa loob ng 30 minuto.

Pangalawang yugto: magdagdag ng hemolytic system (mga pulang selula ng dugo ng tupa + hemolytic serum). Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa isang termostat sa loob ng 30 minuto, ang resulta ay isinasaalang-alang.

Sa isang positibong RSC, ang mga serum antibodies, na pinagsama sa antigen, ay bumubuo ng isang immune complex na nakakabit sa sarili nito, at hindi mangyayari ang hemolysis. Kung negatibo ang reaksyon (walang antibodies sa test serum), mananatiling libre ang complement at magaganap ang hemolysis.

Ginagamit ang RSK para sa serological diagnostics syphilis, gonorrhea, tipus at iba pang sakit.

Ang mga reaksyon ng immune gamit ang mga may label na antigen at antibodies ay batay sa katotohanan na ang isa sa mga sangkap na kasangkot sa reaksyon (antigens o antibodies) ay pinagsama sa ilang uri ng label na madaling matukoy. Ang mga fluorochromes (RIF), enzymes (ELISA), radioisotopes (RIA), at electron-dense compound (IEM) ay ginagamit bilang mga label.

Enzyme immunoassay(ELISA), tulad ng iba pang immune reactions, ay ginagamit: 1) para makita ang isang hindi kilalang antigen gamit ang mga kilalang antibodies o 2) upang makita ang mga antibodies sa serum ng dugo gamit ang isang kilalang antigen. Ang kakaiba ng reaksyon ay ang isang kilalang sangkap ng reaksyon ay pinagsama sa isang enzyme (halimbawa, peroxidase). Ang pagkakaroon ng enzyme ay tinutukoy gamit ang isang substrate, na nagiging kulay kapag kumilos ang enzyme. Ang pinakalawak na ginagamit ay solid-phase ELISA.

1) Pagtuklas ng antigen. Ang unang yugto ay ang adsorption ng mga tiyak na antibodies sa solid phase, na ginagamit bilang polystyrene o polyvinyl chloride na ibabaw ng mga balon ng mga plastic panel. Ang ikalawang yugto ay ang pagdaragdag ng materyal sa pagsubok, kung saan ang pagkakaroon ng antigen ay ipinapalagay. Ang antigen ay nagbubuklod sa mga antibodies. Pagkatapos nito, ang mga balon ay hugasan. Ang ikatlong yugto ay ang pagdaragdag ng isang tiyak na serum na naglalaman ng mga antibodies laban sa isang ibinigay na antigen, na may label na isang enzyme. Ang mga may label na antibodies ay nakakabit sa mga antigen, at ang labis ay inaalis sa pamamagitan ng paghuhugas. Kaya, kung ang materyal na pinag-aaralan ay naglalaman ng mga antigen, isang antibody-antigen-antibody complex na may label na enzyme ay nabuo sa ibabaw ng solid phase. Upang makita ang enzyme, isang substrate ang idinagdag. Para sa peroxidase, ang substrate ay orthophenylenediamine na hinaluan ng H 2 O 2 sa isang buffer solution. Sa ilalim ng pagkilos ng enzyme, ang mga produkto ay nabuo na may kulay na kayumanggi.

2) Pagtuklas ng mga antibodies. Ang unang yugto ay ang adsorption ng mga tiyak na antigens sa mga dingding ng mga balon. Karaniwan, sa mga komersyal na sistema ng pagsubok, ang mga antigen ay na-adsorbed na sa ibabaw ng mga balon. Ang ikalawang yugto ay ang pagdaragdag ng test serum. Sa pagkakaroon ng mga antibodies, nabuo ang isang antigen-antibody complex. Ang ikatlong yugto - pagkatapos ng paghuhugas, ang mga antiglobulin antibodies (antibodies laban sa mga globulin ng tao), na may label na isang enzyme, ay idinagdag sa mga balon. Ang mga resulta ng reaksyon ay sinusuri tulad ng inilarawan sa itaas.

Malinaw na positibo at malinaw na negatibong mga sample, na magagamit sa mga komersyal na sistema, ay ginagamit bilang mga kontrol.

Ginagamit ang ELISA upang masuri ang maraming mga nakakahawang sakit, partikular na ang impeksyon sa HIV at viral hepatitis.

Ang immunoblotting ay isang uri ng ELISA (kombinasyon ng electrophoresis at ELISA). Ang mga biopolymer, tulad ng mga antigen ng human immunodeficiency virus, ay pinaghihiwalay gamit ang gel electrophoresis. Pagkatapos ang mga hiwalay na molekula ay inilipat sa ibabaw ng nitrocellulose sa parehong pagkakasunud-sunod kung saan sila ay nasa gel. Ang proseso ng paglipat ay tinatawag na blotting, at ang resultang pag-print ay isang blot. Ang imprint na ito ay apektado ng test serum. Pagkatapos ay idinagdag ang anti-human globulin serum na may label na peroxidase, pagkatapos ay ang substrate, na, sa ilalim ng pagkilos ng enzyme, ay nakakakuha. kayumanggi. Nabubuo ang mga brown streak sa mga lugar kung saan ang mga antibodies ay pinagsama sa mga antigens. Ang pamamaraan ay nagpapahintulot sa iyo na makita ang mga antibodies sa mga indibidwal na antigen ng virus.

Radioimmunoassay (RIA). Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang dami ng antigen sa sample ng pagsubok. Una, ang isang materyal na malamang na naglalaman ng isang antigen ay idinagdag sa immune serum, pagkatapos ay isang kilalang antigen na may label na radioisotope, halimbawa I 125, ay idinagdag. Bilang resulta, ang nakikita (walang label) at kilalang may label na antigen ay nagbubuklod sa isang limitadong halaga ng mga antibodies. Dahil ang may label na antigen ay idinagdag sa isang tiyak na dosis, posibleng matukoy kung aling bahagi nito ang nakatali sa mga antibodies, at kung aling bahagi ang nanatiling libre dahil sa kumpetisyon sa walang label na antigen at inalis. Ang dami ng may label na antigen na nakatali sa mga antibodies ay tinutukoy gamit ang isang counter. Ito ay inversely proportional sa dami ng antigen na nakita.

Immunoelectron microscopy (IEM). Ang isang antigen, halimbawa, isang influenza virus, ay nakakabit sa isang partikular na antiserum na may label na may electron-dense substance. Mga protina na naglalaman ng metal (ferritin, hemocyanin) o koloidal na ginto. Sa panahon ng microscopy, ang mga litrato ay kinukuha sa isang electron microscope kung saan ang mga influenza virion ay makikita na may mga madilim na tuldok na nakakabit sa kanila - mga molekula ng may label na antibodies.

Mga tanong sa seguridad

Nakuha ang kaligtasan sa sakit, ang pagkakaiba nito mula sa namamana (tiyak, likas). Mga uri ng nakuha na kaligtasan sa sakit.

Gawain. Ang anak ng pamilya na si Valery ay nagkasakit ng dipterya. tatlong taon. Ang ibang miyembro ng pamilya ay hindi nagkasakit, at ang ina ay nagkaroon ng diphtheria sa pagkabata, at ang ama ay nabakunahan ng diphtheria toxoid. Ang nakatatandang kapatid na si Natasha, limang taong gulang, ay hindi nabakunahan ng diphtheria toxoid sa isang pagkakataon dahil sa medikal na contraindications, kaya kailangan kong ibigay sa kanya pang-emergency na pag-iwas may anti-diphtheria antitoxic serum. Nakababatang kapatid, si Vitaly, tatlong buwan, ay hindi nagkasakit, bagaman hindi siya nabakunahan ng kahit ano. May pusa at aso sa bahay, wala silang sakit. Para sa bawat miyembro ng pamilya at para sa mga hayop, pangalanan ang uri ng kaligtasan sa sakit na pumigil sa kanila na magkasakit.

Ano ang isang antigen? Anong mga sangkap ang maaaring maging antigens? Mga ganap na antigen at hapten, paano sila naiiba sa isa't isa? Istraktura ng antigen. Ano ang pangalan ng bahagi ng molekula ng antigen na tumutukoy sa pagiging tiyak nito? Pangalanan ang mga antigen na alam mo. Ano ang mga autoantigens? Antigenic na istraktura ng isang microbial cell. Flagellar at somatic antigens; lokalisasyon, pagtatalaga ng liham, likas na kemikal, kaugnayan sa temperatura, paraan ng paghahanda, praktikal na aplikasyon. Anatoxin, mga katangian nito, aplikasyon, produksyon. Anong tissue ang bumubuo sa immune system ng katawan? Tukuyin ang sentral at mga peripheral na organo immune system tao. Ilarawan ang proseso ng pagbuo ng humoral at cellular immune response. Tukuyin ang mga cell na kumukuha at hinuhukay ang antigen; mga cell na nakikipag-ugnayan upang mabuo humoral na kaligtasan sa sakit, cellular immunity; mga selula na nagbabago at nagiging mga selula ng plasma na gumagawa ng mga antibodies; mga selula na nagpapasigla sa prosesong ito; mga cell na pinipigilan ang immune response; mga cell na pumapatay ng mga selulang tumor at mga selulang nahawaan ng virus. Ano ang mga antibodies? Paano makakuha ng immune serum? Paano makakuha ng serum na mag-neutralize sa lason ng tetanus? Laban sa anong antigens ang mga antitoxin, agglutinin, at hemolysin na nabuo? Anong mga antibodies ang nabuo kapag ang diphtheria toxoid ay ipinakilala sa katawan? diphtheria bacteria? Ang kemikal na kalikasan at istraktura ng mga antibodies. Ano ang aktibong site ng immunoglobulin? Ilista ang mga klase ng immunoglobulin at ang kanilang mga katangian. Ipahiwatig ang klase ng mga immunoglobulin na maaaring tumagos sa inunan. Anong klase sila? secretory immunoglobulins? Ang dinamika ng akumulasyon ng antibody. Paano naiiba ang pangalawang tugon sa immune mula sa isang pangunahin? As in praktikal na gamot ang kaalaman tungkol sa dinamika ng immune response ay ginagamit? Ano ang mga reaksyon ng immune, ano ang kanilang mekanismo, mga yugto ng reaksyon. Sa anong 2 direksyon ginagamit ang mga immune reaction? Ilista ang mga reaksyon ng immune.

Gawain. Palitan ang mga nawawalang salita ng "anatoxin" o "antitoxin": Ang _________ ay isang antigen, ang _________ ay isang antibody, Ang __________ ay lumilikha ng aktibong kaligtasan sa sakit kapag ipinapasok sa katawan, Ang __________ ay lumilikha ng passive immunity kapag ipinasok sa katawan, Ang __________ ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbabakuna ng mga hayop, Ang ___________ ay nakukuha mula sa isang lason kapag nalantad sa formaldehyde at init, ___________ ay nagne-neutralize ng mga lason, __________ nagiging sanhi ng pagbuo ng mga antibodies sa katawan.

Agglutination reaction: ano ang agglutination, ano ang antigen, ano ang antibody; paraan ng pagtatakda, anong mga kontrol ang itinakda at bakit; kung ano dapat ang hitsura ng mga kontrol. Agglutinating serums, kung ano ang nilalaman ng mga ito, kung paano sila nakuha, kung ano ang mga ito ay ginagamit para sa; Ano ang titer ng agglutinating serum? Hindi direktang (passive) hemagglutination reaksyon: kung ano ang nagsisilbing isang antigen sa reaksyong ito, kung paano ito nakuha, ang mekanismo ng reaksyon. Ano ang isang erythrocyte diagnosticum? Ano ang isang antibody erythrocyte diagnosticum? Mga reaksyon sa pag-ulan: ano ang pag-ulan, kung ano ang nagsisilbing isang antigen; Paano makakuha ng precipitating serum? Ano ang precipitating serum titer? Mga paraan ng pagtatakda, praktikal na aplikasyon.

Complement fixation reaction (CFR): prinsipyo ng CFR; kung ano ang nabuo kapag ang immune serum ay nakikipag-ugnayan sa isang tiyak na antigen; ano ang mangyayari upang makadagdag kung ito ay naroroon sa panahon ng pakikipag-ugnayang ito? Ano ang kapalaran ng complement kung walang tiyak na pagkakaugnay sa pagitan ng antigen at antibodies? Kung ang resulta ng RSC ay hemolysis, nangangahulugan ba ito ng positibo o negatibong resulta? Pamamaraan para sa pag-set up ng RSC. Bakit kailangang i-inactivate ang test serum? Hemolytic serum: ano ang nilalaman nito, paano ito nakuha, ano ang titer at paano ito natutukoy? Complement: kemikal na kalikasan, kaugnayan sa mataas na temperatura, saan ito nakapaloob? Paano masisira ang complement? Ano ang praktikal na ginagamit bilang pandagdag?

Gawain. May nakitang mantsa ng dugo sa damit ng isang lalaking inakusahan ng pagpatay. Anong reaksyon ang maaaring gamitin upang matukoy kung ito ay dugo ng tao; ano sa reaksyong ito ang magiging antigen at ano ang magiging antibodies; Anong diagnostic na gamot ang dapat makuha sa laboratoryo para sa reaksyong ito, paano ito inihahanda?

Gawain. Paano gamitin ang reaksyon ng pag-ulan upang matukoy kung ang isang sample ng karne na inihatid para sa pagsusuri ay karne ng baka o kabayo; anong mga diagnostic na gamot ang kailangan?

Reaksyon ng pag-ulan sa agar gel, mga paraan ng pagbabalangkas, praktikal na aplikasyon.

Ang complement fixation reaction (CFR) ay nakabatay sa katotohanan na ang isang partikular na antigen-antibody complex ay palaging nag-adsorb (nagbibigkis) ng complement sa sarili nito.

Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit sa pagtukoy ng mga antigen at sa serodiagnosis ng mga impeksyon, lalo na ang mga sakit* na dulot ng spirochetes (Wassermann reaction), rickettsia at mga virus.

Ang RSK ay kumplikado serological reaksyon. Ito ay nagsasangkot ng pandagdag at dalawang antigen-antibody system. Mahalaga, ang mga ito ay dalawang serological reaksyon.

Ang unang sistema - ang pangunahing isa ay binubuo ng isang antigen at isang antibody (ang isa ay kilala, ang isa ay hindi). Ang isang tiyak na halaga ng pandagdag ay idinagdag dito. Kung magkatugma ang antigen at antibody ng system na ito, magkokonekta sila at magbibigkis ng complement. Ang resultang kumplikado ay pinong dispersed at hindi nakikita.

Ang pagbuo ng complex na ito ay nakita gamit ang pangalawang hemolytic o indicator system. Kabilang dito ang mga pulang selula ng dugo ng tupa (antigen) at ang kaukulang hemolytic serum (antibody), ibig sabihin, isang ready-made na immune complex. Sa sistemang ito, ang lysis ng mga pulang selula ng dugo ay maaari lamang mangyari sa pagkakaroon ng pandagdag. Kung ang pandagdag ay nakasalalay sa unang sistema (kung ang antigen at antibody ay tumutugma dito), kung gayon sa pangalawang sistema ay walang hemolysis - dahil walang libreng pandagdag. Ang kawalan ng hemolysis (ang mga nilalaman ng tubo ay maulap o may sediment ng mga pulang selula ng dugo sa ibaba) ay naitala bilang positibong resulta RSK.

Kung sa unang sistema ang antigen ay hindi tumutugma sa antibody, kung gayon ang immune complex ay hindi bubuo at ang pandagdag ay mananatiling libre! Nananatiling libre, ang pandagdag ay nakikilahok sa pangalawang sistema, na nagiging sanhi ng hemolysis ang resulta ng RSC (ang mga nilalaman ng mga tubo ay transparent - "lacquer blood").

Mga bahagi ng reaksyon ng pag-aayos ng pandagdag:

Antigen - karaniwang lysate, extract, hapten; mas madalas na suspensyon.

1.Antibody-serum ng sistema ng pasyente
2. Complement - guinea pig serum

3. Antigen - mga pulang selula ng dugo ng tupa

4.Antibody - hemolysin sa mga red blood cell ng tupa

5. Isotonic na solusyon

Dahil sa ang katunayan na ang RSK ay nakikilahok malaking bilang kumplikadong mga bahagi, dapat muna silang ma-titrate at dalhin sa reaksyon sa eksaktong dami at sa pantay na dami: 0.5 o 0.25, mas madalas na 0.2 ml. Alinsunod dito, ang buong eksperimento ay isinasagawa sa mga volume na 2.5, 1.25 o 1.0 ml (ang mas malalaking volume ay nagbibigay ng mas tumpak na resulta). Ang titration ng mga bahagi ng reaksyon ay isinasagawa sa parehong dami ng eksperimento, na pinapalitan ang mga nawawalang sangkap ng isotonic solution.

Paghahanda ng mga Sangkap

Hemolytic serum (hemolysin). Ang serum ay natunaw ng 3 beses na mas mababa kaysa sa titer nito (tingnan ang p. 211). Maghanda ng pangkalahatang pagbabanto ng serum para sa buong eksperimento, ang dami nito ay natutukoy sa pamamagitan ng pagpaparami ng dami ng serum sa isang test tube (halimbawa, 0.5 ml) sa bilang ng mga test tube, bahagyang lumampas sa bilang sa eksperimento.

2. Mga pulang selula ng dugo ng tupa. Maghanda ng 3% na pagsususpinde ng mga nahugasang erythrocyte ng tupa (tingnan ang p. 211) para sa buong bilang ng mga test tube sa eksperimento. Upang ihanda ang hemolytic system, 30 minuto bago ito idagdag sa eksperimento, paghaluin ang pantay na dami ng diluted hemolysin at isang suspensyon ng mga pulang selula ng dugo, pagdaragdag ng serum sa mga pulang selula ng dugo, ihalo nang lubusan at i-incubate ng 30 minuto sa 37˚C.

3. Ang pandagdag ay karaniwang natunaw sa 1:10. Dapat itong i-titrate bago ang bawat eksperimento. Ang complement titer ay ang pinakamaliit na halaga nito, kapag idinagdag sa hemolytic system, ang kumpletong hemolysis ay nangyayari sa loob ng 1 oras sa 37˚C. Ang complement titration scheme ay ipinakita sa Talahanayan 21.

Pansin! I-titrate ang papuri sa parehong dami ng pangunahing eksperimento, palitan ang mga nawawalang sangkap ng isotonic solution.

Accounting para sa mga resulta. Hindi dapat magkaroon ng mga bakas ng hemolysis sa mga kontrol, dahil ang isa sa mga ito ay hindi naglalaman ng pandagdag, at ang isa ay hindi naglalaman ng hemolysin. Ang mga kontrol ay nagpapahiwatig na ang mga bahagi ng reaksyon ay walang hemotoxicity (ang kakayahang kusang mag-lyse ng mga pulang selula ng dugo).

Sa ibinigay na talahanayan Sa 21 halimbawa, ang complement titer sa isang dilution na 1:10 ay 0.15 ml. Sa isang eksperimento, ang aktibidad ng complement ay maaaring bumaba dahil sa hindi tiyak na adsorption nito ng iba pang mga bahagi ng reaksyon, samakatuwid, para sa eksperimento, ang halaga ng complement ay nadagdagan: ang dosis kasunod ng titer ay kinuha. Ito ang gumaganang dosis. Sa halimbawang ibinigay, ito ay katumbas ng 0.2 complement sa isang dilution na 1:10. Dahil ang lahat ng mga sangkap na kasangkot sa RSC ay dapat kunin sa pantay na dami (sa aming halimbawa ito ay 0:5 ml), kinakailangang magdagdag ng 0.3 ml ng isang isotonic na solusyon sa gumaganang dosis ng pandagdag (0.2 ml1:10). Para sa buong eksperimento, ang dami ng bawat isa sa kanila (complement at isotonic solution.

Para sa buong eksperimento, ang dami ng bawat isa sa kanila (complement at isotonic solution) ay pinarami ng bilang ng mga test tube na lumalahok sa RSC. Halimbawa, upang magsagawa ng eksperimento sa 50 test tubes, kailangan mong kumuha ng 10 ml ng complement 1:10 (0.2 mlx50) at 15 ml ng isotonic solution (0.3 mlx50).

4. Ang antigen ay kadalasang nakukuha na handa gamit ang titer nito na ipinahiwatig, i.e. ang halaga na, pagkatapos ng diluting ang antigen, ay dapat na nilalaman sa 1 ml. halimbawa, na may titer na 0.4, ito ay natutunaw sa 0.96 ml ng isotonic solution. Para sa eksperimento, kumukuha ako ng halaga ng antigen na katumbas ng kalahati ng titer (0.5 ml). Ito ang kanyang working dose. Kalkulahin ang kabuuang pagbabanto ng antigen para sa buong eksperimento sa pamamagitan ng pagpaparami ng 0.5 ml sa bilang ng mga test tube sa eksperimento.

5. Antibody – suwero ng pasyente. Ang sariwang serum ay hindi aktibo bago ang eksperimento upang sirain ang pandagdag na nasa loob nito. Upang gawin ito, pinainit ito ng 30 minuto sa 56˚C sa isang paliguan ng tubig o sa isang inactivator na may thermostat. Ang huling paraan ay mas kanais-nais: inaalis nito ang posibilidad ng sobrang pag-init ng whey, ibig sabihin, ang denaturation nito. Ang denatured sera ay hindi angkop para sa pagsubok. Ang serum ng pasyente ay karaniwang ginagamit sa isang pagbabanto ng 1:10 hanggang 1:160.

Talahanayan Blg. 14

Mga sangkap, ml	mga test tube
karanasan	kontrol
										Hemolytic system	pulang selula ng dugo
Isotonic na solusyon	1,45	1,4	1,35	1,3	1,25	1,2	1,15	1,1	1,05	1,0	1,5	1,5
Complement 1:10	0,05	0,1	0,15	0,2	0,25	0,3	0,35	0,4	0,45	0,5	―	0,5
Hemolytic system	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	―
3% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ng tupa	―	―	―	―	―	―	―	―	―	―	―	0,5
Ang mga tubo ay lubusang inalog at inilublob sa 37˚C sa loob ng 1 oras.
resulta	Walang hemolysis	Hemolysis	Walang hemolysis

Ang immune sera ay kadalasang inihahanda sa mga kondisyon ng produksyon at inilabas na hindi aktibo. Ang mga ito ay diluted 1:50 at mas mataas.

Ang lahat ng mga sangkap ay inihanda sa bahagyang labis.

Mga sangkap, ml	Mga test tube
Kontrolin ang karanasan
	suwero	antigen	Hemolytic system	Makadagdag sa isang gumaganang dosis
½
Phase 1 Isotonic solution	―	0,5	0,5	1,5	1,25	1,0	0,5
Test serum diluted 1:10	0,5	0,5	―	―	―	―	―
Antigen sa gumaganang dosis	0,5		0,5	―	―	―	―
Makadagdag sa 1:10 sa working dose	0,5	0,5	0,5	―	0,25	0,5	1,0
Ang mga tubo ay lubusang inalog at inilublob sa 37°C sa loob ng 45 minuto 1 oras o 4°C sa loob ng 18 oras
Phase 2 hemolytic system	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Ang mga tubo ay lubusang inalog at inilublob sa 37˚C hanggang sa kumpletong hemolysis sa mga tubo 2, 3, 6 at 7
Resulta	Positibo o negatibo	―	―	++++	(+)	―	―

Talahanayan Blg. 15

Pagsasagawa ng pangunahing eksperimento

Kapag nagse-set up ng eksperimento, ito ay lubhang; Ang pagkakasunud-sunod kung saan ang mga bahagi ay idinagdag ay mahalaga. Ang eksperimento ay isinasagawa sa dalawang yugto.

Phase I. Ang kinakailangang halaga ng isotonic sodium chloride solution ay ibinubuhos sa mga test tube, pagkatapos ay ang kinakailangang dami ng diluted serum at ang gumaganang dosis ng antigen at pandagdag sa parehong dami. Ang eksperimento ay dapat na sinamahan ng kontrol ng lahat ng sangkap na kasangkot dito: serum, antigen, hemolytic system at pandagdag.

Ang mga tubo ay lubusang inalog at inilublob sa 37°C sa loob ng 45 min-1 oras o sa 4°C (“RSC sa lamig”) sa loob ng 18 oras, sa pagkakaroon ng isang partikular na complex, nangyayari ang complement binding. Ang pagsasagawa ng reaksyon "sa lamig" ay makabuluhang pinatataas ang pagiging sensitibo at pagtitiyak nito.

Phase II. Sa pagtatapos ng pagpapapisa ng itlog, 1 ml ng hemolytic system ay idinagdag sa lahat ng mga test tube, na paunang itinatago sa isang thermostat sa loob ng 30 minuto (sensitized). Ang mga test tube ay inalog at ibinalik sa thermostat.

Resulta ng accounting tungkol sa. Ang mga tubo ay iniiwan sa thermostat hanggang sa kumpletong hemolysis sa mga tubo 2, 3, 6 at 7 (kontrol ng serum, antigen at pandagdag para sa isa at dalawang dosis). Ang hemolysis ay unang magaganap sa ika-7 test tube, na naglalaman ng dobleng halaga ng pandagdag. Pagkatapos maganap ang hemolysis sa test tube na ito at maging ganap na transparent ang mga nilalaman nito, kailangan mong lalo na maingat na subaybayan ang natitirang mga kontrol. Sa sandaling maging transparent ang likido sa ika-2, ika-3 at ika-6 na test tube, dapat mong agad na alisin ang rack na may mga test tube mula sa thermostat. Ang katotohanan na ang eksperimento ay hindi itinatago sa thermostat nang mas mahaba kaysa sa kinakailangan ay ipinahiwatig ng pagkakaroon ng bahagyang labo (hindi kumpletong hemolysis) sa ika-5 test tube - naglalaman lamang ito ng kalahati ng gumaganang dosis ng pandagdag at kumpletong hemolysis ay hindi maaaring mangyari kung ang eksperimento ay i-set up nang tama.

Ang hemolysis sa serum at antigen control (mga tubo 2 at 3) ay nagpapahiwatig na ang kanilang mga dosis ay napili nang tama at hindi ang serum o ang antigen mismo ay nagbubuklod ng pandagdag.

Sa kontrol ng hemolytic system (test tube 4) kapag ito tamang operasyon Hindi dapat magkaroon ng mga bakas ng hemolysis - walang pandagdag dito.

Sa sandaling kumpiyansa ka na nakumpleto nang tama ang mga kontrol, maaari mong isaalang-alang ang karanasan. Ang kawalan ng hemolysis sa mga test tube ay itinuturing na positibong resulta ng reaksyon. Ipinapahiwatig nito na ang serum ay naglalaman ng mga antibodies na tiyak sa antigen na kinuha. Ang kumplikadong nabuo nila ay nakagapos na pandagdag at pinigilan ang pakikilahok nito sa reaksyon ng hemolysis. Kung ang hemolysis ay nangyayari sa mga test tube, ang resulta ng reaksyon ay tinasa bilang negatibo. Sa kasong ito, walang pagsusulatan sa pagitan ng antigen at ang antibody ay hindi nakatali at nakikilahok sa reaksyon ng hemolysis.

Kaayon ng serum ng pasyente, ang parehong eksperimento ay ginagawa na may malinaw na positibong serum (ibig sabihin, may serum na naglalaman ng mga antibodies sa isang partikular na antigen) at malinaw na negatibong serum, na hindi naglalaman ng mga partikular na antibodies. Kung ang eksperimento ay nai-set up nang tama, sa unang kaso ay dapat magkaroon ng pagkaantala sa hemolysis, at sa pangalawang kaso, magkakaroon ng hemolysis.

Ang intensity ng reaksyon ay ipinahayag tulad ng sumusunod:

Kumpletong pagkaantala ng hemolysis. Ang mga pulang selula ng dugo ay bumubuo ng pare-parehong labo o tumira sa ilalim. Sa kasong ito, ang likido sa test tube ay nagiging walang kulay;

Humigit-kumulang 25% ng mga pulang selula ng dugo ay lysed. Mayroong mas kaunting sediment, ang likido sa itaas nito ay bahagyang kulay-rosas. Ang resulta ng RSC ay tinasa rin bilang malakas na positibo;

Humigit-kumulang 50% ng mga pulang selula ng dugo ay lysed. Ang sediment ay maliit, ang likido ay kulay rosas. Positibong resulta ng RSC;

Humigit-kumulang 75% ng mga pulang selula ng dugo ay lysed. Isang bahagyang sediment, sa itaas kung saan mayroong isang matinding kulay na likido. Kaduda-dudang resulta ng RSC;

Ang lahat ng mga pulang selula ng dugo ay na-lysed. Ang likido ay matinding kulay at ganap na transparent. Negatibong resulta ng RSK.

Ang RSC ay lubos na sensitibo at tiyak at ginagamit para sa:

1) serological diagnosis mga nakakahawang sakit(Wasserman river - para sa syphilis, Borde-Zhangu river - para sa talamak na gonorrhea, atbp.);

2) pagkilala sa bakterya at iba pang mga mikrobyo.

Ang RSC ay tumutukoy sa mga kumplikadong serological na reaksyon kung saan, bilang karagdagan sa AG at AT, ang hemolytic system (hemolysis system) ay nakikilahok din, na nagpapakita ng resulta ng reaksyon.

Ang RSK ay isinasagawa sa dalawang yugto na may partisipasyon ng dalawang sistema:

1) ang unang sistema - AG + AT + complement - ay nagiging sanhi ng complement binding kung ang AT ay tumutugma sa AG. Sa kaso ng pagkakaiba sa pagitan ng AT at AG, mananatiling libre ang complement;

ang pangalawang sistema (indicator) - hemolytic serum (hemolysins) + erythrocytes - nagpapakita ng kinalabasan ng reaksyon sa unang sistema: sa kaso ng isang positibong resulta ng reaksyon sa unang sistema (pagbuo ng AG + AT + complement complex ), ang hemolysis ay hindi magaganap sa pangalawang sistema dahil sa kakulangan ng pandagdag (erythrocytes tumira sa ilalim ng test tube). Sa kaso ng isang negatibong resulta sa unang sistema, ang pangalawa ay sinamahan ng hemolysis, dahil ang isang complex ng mga pulang selula ng dugo + hemolysins + complement ay nabuo (tingnan ang Appendix 3, Fig. 7 at 8).

Mga bahagi ng reaksyon:

1) test serum (preliminarily inactivated sa pamamagitan ng pag-init sa 56 0 C sa loob ng 30 minuto);

2) antigen (ginawa mula sa mga suspensyon ng mga pinatay na microbes, microbial lysates, kumpletong antigens, haptens, tissue lipid extracts);

3) pandagdag;

4) hemolytic serum;

5) 3% suspensyon ng mga erythrocytes ng tupa;

6) solusyon sa asin;

7) kontrolin ang suwero.

Komplemento. Ang sariwa at pinatuyong guinea pig serum ay ginagamit bilang pandagdag sa RSC, dahil sa dugo ng isang guinea pig, ang pandagdag ay nakapaloob sa ang pinakamalaking bilang at patuloy na naroroon kaysa sa ibang mga hayop. Bago isagawa ang RSC, dapat isagawa ang titration ng complement sa hemolysis reaction (sheep red blood cells, hemolytic serum, complement, saline solution) at pagtukoy ng working dose.

Makadagdag sa titer- ang pinakamataas na pagbabanto ng pandagdag na nagiging sanhi ng kumpletong lysis ng mga pulang selula ng dugo sa pagkakaroon ng hemolytic serum.

Gumaganang dosis ng pandagdag– ang halaga ng complement na 25% na mas mataas kaysa sa shooting range.

Hemolytic serum inihanda sa pamamagitan ng pagbabakuna ng mga kuneho na may 50% na suspensyon ng mga erythrocyte ng tupa. Ang resultang serum ay inactivated sa pamamagitan ng pag-init sa 56 0 C. Ang titer at working dose ay tinutukoy.

Titer ng serum– ang pinakamataas na pagbabanto ng serum na nagiging sanhi ng kumpletong lysis ng mga pulang selula ng dugo sa pagkakaroon ng pandagdag. Bilang gumaganang dosis, kumuha ng hemolytic serum sa triple titer.

RSC Bordet-Gangu

Ginagawa ang reaksyon upang masuri ang talamak na gonorrhea upang matukoy ang mga antibodies sa gonococcus.

Dalawang sistema ang kasangkot sa RSC: ang pangunahing sistema - ang test serum, antigen, complement at ang auxiliary, indicator o hemolytic system - hemolytic serum at sheep red blood cells.

Kung ang isang tiyak na antigen + antibody complex ay nabuo sa unang sistema, kung gayon ang pandagdag ay adsorbed (pinagsama sa kumplikadong ito) at ang hemolysis ay hindi nangyayari sa pangalawang sistema.

Ang reaksyon ay nangangailangan ng:

1. Test serum, na nakuha mula sa dugo na kinuha sa pamamagitan ng pagbutas ng ulnar vein ng pasyente. Pagkatapos ng pamumuo ng dugo, ang serum ay sinisipsip sa isang hiwalay na tubo at hindi aktibo sa loob ng 30 minuto sa 56 0 C sa isang paliguan ng tubig.

2. Antigen - isang suspensyon ng napatay na gonococci.

3. Ang mga pulang selula ng dugo ng tupa ay nakukuha mula sa sterilely collected defibrinated blood. Ang mga ito ay hinuhugasan sa pamamagitan ng centrifuging 3 beses na may mga bagong bahagi ng asin. Gumagamit ang reaksyon ng 3% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo.

4. Ang hemolytic serum ay inihanda nang maaga sa pamamagitan ng pagbabakuna sa mga kuneho na may mga pulang selula ng dugo ng tupa. Bago gamitin, ang serum ay titrated.

5. Complement - sariwang guinea pig serum. Ang dugo ay sinipsip mula sa puso ng isang guinea pig na may isang hiringgilya, at pagkatapos ng clotting, ang serum ay pinaghihiwalay. Bago ang eksperimento, ang gumaganang dosis ng pandagdag ay titrated. Upang gawin ito, kunin ang pangunahing pagbabanto ng pandagdag 1:10 at ibuhos ito sa mga test tube, mula 0.1 hanggang 0.5, pagkatapos kung saan ang dami sa bawat test tube ay nababagay sa 1.5 ml na may solusyon sa asin.

Kasabay nito, ang isang hemolytic system ay inihanda - hemolytic serum na diluted sa triple titer + 3% na suspensyon ng mga erythrocytes ng tupa. Parehong sangkap sa iba't ibang volume at itinatago sa isang thermostat sa loob ng 30 minuto (sensitization ng pinaghalong), pagkatapos kung saan ang timpla ay idinagdag ng 1 ml sa mga test tube at inilagay sa isang thermostat sa loob ng 30 minuto. 3 test tube ang nagsisilbing kontrol:

1. 1 ml hemolytic system + 1.5 ml physiological solution;

2. 0.5 ml ng pandagdag 1:10 + 0.5 ml ng red blood cell suspension + 1.5 ml ng asin.

Ang complement titer ay ang pinakamababang halaga kung saan nangyayari pa rin ang hemolysis. Upang magtatag ng isang reaksyon, kumuha ng isang gumaganang dosis ng pandagdag, na nadagdagan laban sa titer ng 20-25%, ibig sabihin, kadalasan ang halaga ng pandagdag na naroroon sa penultimate tube na may hemolysis. Ang pagtaas ng dosis ng pandagdag ay kinakailangan dahil sa reaksyon ang aktibidad ng pandagdag ay maaaring medyo pinigilan ng iba pang mga sangkap ng reaksyon (antigen, serum).

Pagse-set up ng pangunahing eksperimento ng RSC Bordet - Zhangou.

Una, ang inactivated at diluted 1:5 test serum ay ibinubuhos sa 2 test tubes. Pagkatapos ang antigen ay ibinuhos sa unang tubo, at pisyolohikal na solusyon sa pangalawa. Pagkatapos nito, ang isang gumaganang dosis ng pandagdag ay idinagdag sa lahat ng mga tubo.

Pagkatapos paghaluin ang mga sangkap, ang rack na may mga test tube ay inilalagay sa isang thermostat sa 37 0 C sa loob ng 30 minuto (mainit na pagbubuklod). Kapag malamig na nagbubuklod, ang isang rack na may mga test tube ay inilalagay sa isang icebox sa temperatura na -4 0 C sa loob ng 18 oras. Pagkatapos panatilihin sa isang termostat, ang hemolytic system ay idinagdag sa lahat ng mga test tube. Ang reaksyon ay ibinibigay sa dami ng 0.5 ml. Ang mga tubo ay muling inilagay sa termostat sa loob ng 2 oras, pagkatapos ay ang mga resulta ay paunang nakarehistro. Ang mga tubo ay nananatili sa temperatura ng silid, at sa susunod na araw ang huling resulta ay nabanggit.

Ang antas ng intensity ng reaksyon ay na-rate na positibo. Kumpletong pagkaantala ng hemolysis - apat na plus (++++), hindi kumpleto - tatlo, at isang plus. Ang kumpletong hemolysis ay ipinahiwatig ng mga minus (-).

RSK Wasserman

Inilagay upang masuri ang syphilis upang makita ang mga antibodies, pati na rin upang matukoy ang pagiging epektibo tiyak na therapy. Ito ay batay sa prinsipyo ng Bordet-Gengou complement fixation reaction. Ang isang makabuluhang pagkakaiba sa pagitan ng reaksyon ng Wasserman ay ang nonspecificity ng antigen: ang mga lipoid extract mula sa normal na mga organo ng hayop ay ginagamit bilang antigen.

Upang maisagawa ang reaksyon ng Wasserman, kinakailangang magkaroon ng serum ng pasyente, mga pagsusuri sa diagnostic para sa mga cross-reacting antigens No. 1 at No. 2, complement, hemolytic serum, mga red blood cell ng tupa, at solusyon sa asin.

Diagnosticum No. 1 - tiyak, treponemal.

Ang Diagnosticum No. 2 ay isang nonspecific cardiolipin antigen, na isang mataas na purified bovine heart extract na may pare-parehong kemikal na komposisyon ng mga lipoid. Ang mga lipoid na nakuha mula sa puso komposisyon ng kemikal malapit sa lipoids treponema pallidum, samakatuwid, kahit na hindi sila tiyak, nakukuha nila ang mga antibodies laban sa spirochete. Ang mga antigen na ito ay ginawa sa gitna at ginagamit sa reaksyon, diluted ayon sa titer na ipinahiwatig sa label.

Kasabay ng pangunahing eksperimento, 2 kontrol ang inilalagay: na may malinaw na negatibo at may positibong sera.

Complement fixation reaction (CFR) ginagamit upang makita ang mga antibodies sa isang partikular na antigen o matukoy ang uri ng antigen gamit ang isang kilalang antibody. Ito ay isang kumplikadong serological reaksyon, na kinasasangkutan ng dalawang sistema at pandagdag. Ang unang sistema ay bacteriological (basic), binubuo ng isang antigen at isang antibody (kilala ang isa, ang isa ay hindi). Ang pangalawang sistema ay hemolytic (tagapagpahiwatig). Kabilang dito ang mga pulang selula ng dugo ng tupa (antigen) at ang kaukulang hemolytic serum (antibody). Ang RSC ay pinangangasiwaan sa dalawang hakbang: una, ang antigen ay pinagsama sa test blood serum, kung saan hinahanap ang antibody, at pagkatapos ay idinagdag ang pandagdag. Kung ang antigen at antibody ay tumutugma sa isa't isa, ang isang immune complex ay nabuo na nagbubuklod ng pandagdag. Sa kawalan ng mga antibodies sa suwero, ang immune complex ay hindi nabuo at ang pandagdag ay nananatiling libre. Dahil ang proseso ng complement adsorption ng complex ay hindi nakikita, isang heme system ang idinagdag upang matukoy ang prosesong ito. Ang reaksyon ay isinasaalang-alang bilang mga sumusunod. Kung ang pandagdag ay nakatali sa una (bacsystem), pagkatapos ay kapag ang hemesystem ay idinagdag, ang hemolysis ng mga erythrocytes ay hindi magaganap - ang reaksyon ay positibo. Kung ang pandagdag ay hindi nagbubuklod sa unang sistema dahil sa kakulangan ng mga antibodies, pagkatapos ay makikipag-ugnay ito sa sistema ng heme, na nagreresulta sa hemolysis ng mga pulang selula ng dugo - isang negatibong reaksyon.

Ang mga antigen para sa RSC ay inihanda mula sa mga napatay at nawasak na mikrobyo, kadalasan sa pamamagitan ng pagkuha.

Ang RSC ay malawakang ginagamit para sa pagsusuri ng brucellosis, glanders, rickettsiosis, sakit sa paa at bibig at marami pang iba.

Long-term complement fixation reaction (LDCR). Ito ay isang variant ng karaniwang RSC, ngunit naiiba dahil ang unang yugto ng reaksyon ay nagpapatuloy sa loob ng 16-18 na oras sa malamig (4°C). Sa ilalim ng ganitong mga kondisyon, sa unang sistema sa antigen-antibody-complement complex, ang cryophilic (cold) antibodies ay karagdagang nakagapos, na nagpapataas ng sensitivity ng reaksyon. Ang pagpipiliang ito ay ginagamit para sa pag-diagnose ng brucellosis, campylobacteriosis, atbp.

Ang complement fixation reaction (CFR) ay unang inilarawan ni Bordet at Zhangou (1901). Hindi tulad ng RA at RP, sa CSC, ang kumbinasyon ng antigen na may antibody ay nagpapakita lamang ng sarili sa pagkakaroon ng ikatlong bahagi - pandagdag.

Ang reaksyon ng kumplikadong pagbuo, Antigen - antite Lo - pandagdag - hindi nakikita. Upang matukoy ang tinukoy na pakikipag-ugnayan ng mga bahagi ng reaksyon, ginagamit ang isang karagdagang sistema ng tagapagpahiwatig, na, sa pamamagitan ng kalinawan ng pagpapakita nito, hindi direktang sumasalamin sa resulta ng pakikipag-ugnayan sa unang sistema. Kaya; dalawang sistema ang kasangkot sa RSC: 1) bacteriolytic (diagnostic) at 2) hemolytic (auxiliary indicator), na ginagawang posible upang matukoy kung ang complement fixation ay naganap sa unang sistema. Noong nakaraan, ang isang suspensyon ng bakterya ay ginamit bilang isang antigen, at sa mga positibong kaso, ang kanilang lysis (bacteriolysis) ay nangyari, kaya ang unang sistema ay tinawag na bacteriolytic. Dahil dito, ang RSC ay batay sa dalawang phenomena - bacteriolysis at hemolysis.

Ang RSC ay isinasagawa sa dalawang yugto. Una, ang isang bacteriolytic system ay inihanda - 0.5 ML ng test inactivated serum na may antigen ay halo-halong sa test tubes, ang pandagdag ay idinagdag sa isang mahigpit na tinukoy na halaga (titer). Ang halo ng antigen - antibody (serum) - complement (bacteriolytic system) ay inilalagay sa isang paliguan ng tubig (o thermostat) sa 37-38 ° C sa loob ng 20-40 minuto. Susunod, magsisimula ang pangalawang yugto ng reaksyon - ang mga bahagi ng pangalawang hemolytic system ay idinagdag sa lahat ng mga tubo ng pagsubok at inilagay muli sa isang paliguan ng tubig sa loob ng 15-20 minuto. Pagkatapos ay ang paunang resulta ay isinasaalang-alang (kung mayroong hemolysis o wala), iniwan sa temperatura ng silid hanggang sa susunod na araw, at ang huling bilang ng RSC ay ginawa. Ang kawalan ng hemolysis (positibong resulta ng diagnostic) ay nagpapahiwatig na ang test serum ay naglalaman ng mga antibodies na tiyak sa antigen na kinuha, ang antigen-antibody complex ay nabuo sa unang sistema, at ang komplemento ay nakatali. Ang mga bahagi ng pangalawang sistema ay idinagdag - hemolysin at erythrocytes, na may kaugnayan sa bawat isa ay isa ring antigen (erythrocytes) at isang antibody (hemolysin) at nakikipag-ugnayan sa pagkakaroon ng pandagdag. Kung sa test serum ay walang mga antibodies na tiyak sa antigen na kinuha, ang antigen-antibody complex ay hindi nabuo at ang complement ay hindi na-adsorbed sa unang bacteriolytic system at nananatiling libre sa test tube, pagkatapos ay kapag ang pangalawang (hemolytic) system ay idinagdag, ang complement ay nakikipag-ugnayan sa antigen-antibody complex (hemolysin – pulang selula ng dugo) at nangyayari ang hemolysis (lysis ng mga pulang selula ng dugo). Ang resulta ng diagnostic ay negatibo. Kaya, 5 bahagi ang kasangkot sa RSC: antigen, antibody (test serum), complement, hemolysin, suspension ng mga erythrocytes ng tupa. Upang palabnawin ang lahat ng mga sangkap, ginagamit ang isang electrolyte medium—saline solution Na1—.

Upang maisagawa ang RSC sa isang diagnostic laboratory, ang mga sumusunod ay kinakailangan: mga sample ng serum mula sa mga hayop na natanggap ng laboratoryo para sa pagsusuri; dalawang sera na kilala bilang positibo (standard, hyperimmune, nagbibigay ng positibong resulta - para sa kontrol) at dalawang normal na sera mula sa malusog na mga hayop - para din sa kontrol (lahat ng sera sa isang dilution na 1: 10 ay hindi aktibo upang sirain ang kanilang sariling pandagdag sa pamamagitan ng pag-init sa isang paliguan ng tubig sa 56-58 ° Mula sa 30 min); antigen diluted ayon sa titer (ipinahiwatig ng biofactory sa packaging); pandagdag (guinea pig serum) diluted ayon sa itinatag titer (sa panahon ng titration); hemolysin sa working titer; pagsususpinde ng mga erythrocyte ng tupa na diluted 1:40, solusyon sa asin, nagtapos na mga pipette ng iba't ibang mga kapasidad, mga test tube, stand, paliguan ng tubig, mga bombilya ng goma.