Ang mga reaksyong ito ay nagsasangkot ng mga antigen sa anyo ng mga particle (microbial cells, red blood cell at iba pang corpuscular antigens), na pinagdikit ng mga antibodies at namuo.

Upang magsagawa ng agglutination reaction(RA) tatlong sangkap ang kailangan: 1) antigen (agglutinogen);

2) antibody (aglutinin)

3) electrolyte (isotonic sodium chloride solution).

Tinatayang reaksyon aglutinasyon (RA)

Ang isang tinatayang, o plato, RA ay inilalagay sa isang glass slide kapag temperatura ng silid. Upang gawin ito, gumamit ng Pasteur pipette para maglagay ng isang patak ng serum sa isang dilution na 1:10 hanggang 1:20 at isang control drop ng isotonic sodium chloride solution nang hiwalay sa baso. Ang mga kolonya o isang pang-araw-araw na kultura ng bakterya (isang patak ng diagnosticum) ay ipinakilala sa parehong mga bacteriological loop at pinaghalo nang lubusan. Isinasaalang-alang ang mga reaksyon pagkatapos ng ilang minuto, minsan ay gumagamit ng magnifying glass (x5). Sa positibong RA, ang hitsura ng malaki at maliit na mga natuklap sa isang patak ng serum ay nabanggit na may negatibong RA, ang serum ay nananatiling pantay na maulap.

kanin. 2. Tinatayang reaksyon ng agglutination.

Detalyadong reaksyon ng agglutination upang matukoy ang titer ng mga tiyak na antibodies sa isang pasyente.

Ang full-blown RA para sa serodiagnosis ay ginawa sa serum ng mga pasyente. Diluted din ito sa isotonic sodium chloride solution mula 1:50 - 1:100 hanggang 1:800 o 1: 1600. Dahil ang mas mababang serum titers ay maaaring maglaman ng mga normal na agglutinin na matatagpuan sa malusog na tao o mga pasyente na may ibang diagnosis (diagnostic titer). Bilang isang antigen sa reaksyong ito, ginagamit ang mga diagnosticum - mga kilalang suspensyon, kadalasan ng mga napatay na bakterya.

Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay unang ibinuhos sa mga agglutination tubes. Ang 1 ml ng serum na diluted 1:100 ay idinagdag sa una sa kanila, at pagkatapos ng paghahalo nito, 1 ml ay inilipat sa pangalawa, mula sa pangalawa hanggang sa pangatlo, atbp. 1-2 patak ng bacterial suspension na naglalaman ng 3 bilyong microbial body sa 1 ml ay idinagdag sa nagreresultang dalawang beses na dilution ng sera (mula 1:100 hanggang 1:1600 o higit pa). Ang mga tubo ay inalog at inilagay sa isang termostat sa 37°C sa loob ng 2 oras, pagkatapos ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng 24 na oras.

Ang detalyadong reaksyon ng agglutination ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng pagsusuri sa bawat test tube nang sunud-sunod, simula sa mga control, na may banayad na pag-alog. Dapat ay walang agglutination sa control tubes. Ang intensity ng agglutination reaction ay minarkahan ng mga sumusunod na palatandaan: ++++ - kumpletong agglutination (agglutinate flakes sa ganap na malinaw na likido); +++ - hindi kumpletong agglutination (mga natuklap sa isang bahagyang opalescent na likido); ++ - bahagyang agglutination (ang mga natuklap ay malinaw na nakikita, ang likido ay bahagyang maulap); + - mahina, kaduda-dudang agglutination - ang likido ay masyadong maulap, ang mga natuklap sa loob nito ay hindi gaanong nakikilala; - - kawalan ng agglutination (ang likido ay pantay na maulap).

Ang titer ng serum ay itinuturing na huling pagbabanto nito, kung saan ang intensity ng agglutination ay tinasa bilang hindi bababa sa dalawang plus (++)

kanin. 7. Detalyadong reaksyon ng agglutination.

Hindi direktang (passive) hemagglutination reaction (IRHA, RPHA)

Ang reaksyon ay ibinigay:

1) para sa pagtuklas ng mga polysaccharides, protina, bacterial extract at iba pang mga highly dispersed substance, rickettsia at mga virus, ang mga complex na may mga agglutinin ay hindi makikita sa mga conventional RAs,

2) upang makita ang mga antibodies sa sera ng mga pasyente sa mga mataas na dispersed na sangkap at maliliit na microorganism na ito.

Ang hindi direkta, o passive, agglutination ay nauunawaan bilang isang reaksyon kung saan nakikipag-ugnayan ang mga antibodies sa mga antigen na na-pre-adsorbed sa mga inert na particle (latex, cellulose, polystyrene, barium oxide, atbp. o sheep red blood cells, I (0) - pangkat ng dugo ng tao)

Sa passive hemagglutination reaction (RPHA), pulang selula ng dugo. Ang mga pulang selula ng dugo na puno ng antigen ay magkakadikit sa pagkakaroon ng mga partikular na antibodies sa antigen na ito at namuo. Ang antigen-sensitized erythrocytes ay ginagamit sa RPGA bilang isang erythrocyte diagnosticum para sa pagtuklas ng mga antibodies (serodiagnosis). Kung ang mga pulang selula ng dugo ay puno ng mga antibodies (erythrocyte antibody diagnosticum), maaari itong magamit upang makita ang mga antigen.

kanin. 3. RPGA scheme: ang mga pulang selula ng dugo (1), na puno ng antigen (3), ay nakagapos ng mga tiyak na antibodies (4).

pagtatanghal ng dula. Ang isang serye ng mga serial dilution ng serum ay inihanda sa mga balon ng polystyrene plates. Magdagdag ng 0.5 ml ng malinaw na positibong serum sa penultimate well at 0.5 ml ng physiological solution (kontrol) sa huling balon. Pagkatapos 0.1 ml ng diluted erythrocyte diagnosticum ay idinagdag sa lahat ng mga balon, inalog at inilagay sa isang termostat sa loob ng 2 oras.

Accounting. Sa isang positibong kaso, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa ilalim ng butas sa anyo ng isang pantay na layer ng mga cell na may nakatiklop o tulis-tulis na gilid (sa isang negatibong kaso, sila ay tumira sa anyo ng isang pindutan o singsing); .

Fig.4. Accounting para sa RNGA (RPGA).

Accounting para sa mga resulta ng RNGA na ginawa upang makita ang botulinum toxin.

Ang causative agent ng botulism - Clostridium botulinum ay gumagawa ng mga lason ng pitong serovar (A, B, C, D, E, F, G), ngunit ang mga serovar A, B, E ay mas karaniwan kaysa sa iba mga katangian ng antigenic at maaaring iba-iba sa mga reaksyon sa pamamagitan ng sera na partikular sa uri. Para sa layuning ito, ang isang passive (hindi direktang) hemagglutination reaksyon ay maaaring isagawa sa suwero ng pasyente, kung saan ang pagkakaroon ng lason ay ipinapalagay, at ang mga pulang selula ng dugo na puno ng mga antibodies ng antitoxic anti-botulinum serum ng mga uri A, B, E. Normal. ang serum ay nagsisilbing kontrol.

kanin. 3. Pahayag at resulta ng RNGA.

Accounting. Sa isang positibong kaso, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa ilalim ng butas sa anyo ng isang pantay na layer ng mga cell na may nakatiklop o tulis-tulis na gilid (sa isang negatibong kaso, sila ay tumira sa anyo ng isang pindutan o singsing); .

Konklusyon: Ang botulinum toxin type E ay nakita sa suwero ng pasyente.

Hemagglutination inhibition reaction (HAI).

kanin. 8. Hemagglutination inhibition reaction (HAI) (scheme).

Ang prinsipyo ng reaksyon ay batay sa kakayahan ng AT na magbigkis ng iba't ibang mga virus at neutralisahin ang mga ito, na ginagawang imposibleng pagsamahin ang mga pulang selula ng dugo. Biswal, ang epektong ito ay nagpapakita ng sarili sa "pagpigil" ng hemagglutination. Ginagamit ang RTGA sa mga diagnostic mga impeksyon sa viral upang matukoy ang mga tiyak na antihemagglutinin at makilala ang iba't ibang mga virus sa pamamagitan ng kanilang mga hemagglutinin, na nagpapakita ng mga katangian ng Ag.

Ang pag-type ng virus ay isinasagawa sa isang RTGA na reaksyon na may isang set ng sera na partikular sa uri. Ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng kawalan ng hemagglutination. Ang mga subtype ng Type A na virus na may mga antigen na H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 at iba pa ay maaaring maiiba sa RTGA na may isang hanay ng homologous type-specific na sera

kanin. 9. Mga resulta ng RTGA para sa pag-type ng influenza virus

Alamat: - pagsugpo ng hemagglutination (button); - hemagglutination (payong).

Mga konklusyon: Ang materyal na pinag-aaralan ay naglalaman ng influenza virus type A na may H3N2 antigen

Ang aglutinasyon ng dugo ay ang pagdikit at sedimentasyon ng mga pulang selula ng dugo, bakterya at iba pang mga selula na nagdadala ng mga antigen.

Ang proseso ay nangyayari sa ilalim ng impluwensya ng mga agglutinin, na mga tiyak na sangkap. Ang mga sangkap na ito ay mga lectin o antibodies.

Mga posibleng uri ng agglutination kapag tinutukoy ang pangkat ng dugo

Ang aglutinasyon ay maaaring maging tiyak o hindi tiyak. Sa unang kaso, ang reaksyon ay nangyayari sa pakikilahok ng tatlong sangkap:

• antigens;
• antibodies;
• electrolytes (gumamit ng isotonic solution).

Lahat ay ginagamit posibleng mga uri agglutination kapag tinutukoy ang pangkat ng dugo, ngunit hindi lamang ito ang kaso.

Para sa anong layunin ito ginagamit?

Ang reaksyon ng agglutination ng dugo ay ginagamit upang matukoy ang sanhi ng ahente ng isang nakakahawang sakit. Kasabay nito, ito ay tumira at madaling makita sa latak. Ang prosesong ito ay ginagamit, gaya ng nabanggit sa itaas, at ito ang tatalakayin pa.

Ano ang mga tampok?

Ang mga pulang selula ng dugo ay naglalaman ng mga antigen ng uri A at B. Nagbubuklod sila sa mga antibodies na ά at β, ayon sa pagkakabanggit. Mga pangkat ng dugo at mga reaksyon ng aglutinasyon:

• 1, 0 (ά, β) - walang mga antigen sa ibabaw ng erythrocytes;
• 2, A (β) - antigen A at antibody β ay naroroon;
• 3, B (ά) - naglalaman ng antigen B at antibody ά;
• 4, AB (00) - dalawang antigen ang naroroon, ang mga antibodies ay wala.

Kapansin-pansin na ang mga antigen ay naobserbahan na sa embryo. Tulad ng para sa mga antibodies, lumilitaw sila pagkatapos ng kapanganakan, sa unang buwan ng buhay.

Ang pagiging tugma ng mga tao ay depende sa uri ng dugo. Ito ang dahilan ng pagtanggi ng katawan ng ina sa fetus. Sa madaling salita, mayroon siyang antibodies sa mga antigen ng dugo ng hindi pa isinisilang na bata. Sa kasong ito, nangyayari ang hindi pagkakatugma. Bilang karagdagan, ang uri ng dugo ay dapat isaalang-alang sa panahon ng pagsasalin ng dugo.

Paghahanda

Ang mga grupo ng dugo at mga reaksiyong agglutination ay magkatugmang mga konsepto na kadalasang ginagamit sa medisina.

Mahalagang sundin ang ilang mga tagubilin bago ang pagsusulit. Dapat mong pansamantalang iwasan ang pagkain ng ilang partikular na pagkain at mga gamot. Makakatulong ito na gawing mas tumpak ang mga resulta. Ang mga rekomendasyong dapat sundin ay inireseta ng doktor. Ang katotohanan ay ang iba't ibang mga laboratoryo ay maaaring walang parehong hanay ng mga halaga na nakuha, iyon ay, sila ay bahagyang naiiba.

Mga kondisyon para sa pagsusulit

Upang tumpak na matukoy ang uri ng dugo, mahalagang piliin ang tamang kagamitan. Kabilang dito ang:

• at isang pipette;
• mga pamalo ng salamin;
• karaniwang isohemagglutinating serum;
• dry earthenware plates, na nahahati sa 4 na sektor.

Mayroon ding mga kinakailangan para sa mga kondisyon ng pagsubok:

• liwanag ng araw;
• temperatura ng silid sa itaas +16 ˚С;
• paggamit ng mga dami ng dugo at serum sa isang ratio na 1:10;
• maaasahang mga resulta ay nakuha sa loob ng 5 minuto.

Sa itaas ay ang mga pangunahing kondisyon at kasangkapan. Ang aglutinasyon ng dugo ay maaaring isagawa sa maraming paraan, at bawat isa sa kanila ay may mga indibidwal na kinakailangan.

Pamamaraan

Mga posibleng pamamaraan para sa pagtukoy ng pangkat ng dugo gamit ang agglutination:

• karaniwang pamamaraan;
• cross reaksyon;
• paggamit ng zoliclones;
• express method gamit ang “Erythrotest-group card” kit.

Pamamaraan ng pamantayan

Ang aglutinasyon ng dugo ay ipinapakita gamit ang mga pulang selula ng dugo ng pasyente. Applicable din karaniwang mga serum, na naglalaman ng mga kilalang antigens.

Maglagay ng 1 patak ng apat na serum sa isang flat plate. Pagkatapos, gamit ang mga glass rod, ang dugo ng pasyente ay idinagdag dito upang masuri. Sa kasong ito, maginhawang gumamit ng eye dropper. Ang ratio ay dapat na 1:10. Ang serum at dugo ay maingat na pinaghalo. Maaaring makumpleto ang isang pagtatasa sa loob ng limang minuto.

Pag-decode ng mga resulta ng pagsubok gamit ang isang simpleng paraan

Pagkatapos ng tinukoy na oras, ang paglilinis ay sinusunod sa mga patak ng serum. Sa ilang maaari mong makita na ang agglutination ng mga pulang selula ng dugo ay naganap (maliit na mga natuklap), sa iba ito ay wala.

Ang mga sumusunod na opsyon ay umiiral:

• walang reaksyon sa lahat ng mga sample ng serum - pangkat 1;
• naganap ang coagulation sa lahat ng dako maliban sa sample 2 - group 2;
• walang reaksyon lamang sa ika-3 sample - pangkat 3;
• Ang agglutination ay naganap sa lahat ng dako - pangkat 4.

Kaya, ang pangunahing bagay ay upang ipamahagi nang tama ang mga serum. Kung gayon ang pag-decipher ng resulta ay hindi magiging mahirap. Kung mahina ang aglutinasyon ng dugo, inirerekomenda na ulitin ang pagsubok. Sa kaso ng maliliit na natuklap, sinusuri sila sa ilalim ng mikroskopyo.

Cross reaction

Minsan sa simpleng paraan Imposibleng tumpak na matukoy ang uri ng dugo. Ang aglutinasyon sa kasong ito ay isinasagawa gamit ang paraan ng cross-reaksyon. Hindi tulad ng unang bersyon ng pagsubok, mahalaga dito mayroon silang karaniwang mga pulang selula ng dugo. Ang dugo ng pasyente ay iginuhit sa isang test tube, sentripuged, at pagkatapos ay ang serum ay pumped out gamit ang isang pipette para sa karagdagang pananaliksik.

Inilalagay ito sa dami ng 2 patak sa isang plato, pagkatapos ay idinagdag dito ang karaniwang mga pulang selula ng dugo ng mga pangkat A at B. Ang mga nilalaman ay hinahalo sa pamamagitan ng pag-alog ng lalagyan.

Mga resulta ng cross reaction method

Pagkatapos ng limang minuto, ang mga sample ay handa na para sa pagsusuri. Ang mga pagpipilian ay:

• naganap ang gluing sa parehong mga patak - pangkat 1;
• ang mga natuklap ay hindi sinusunod sa alinman sa mga sample - pangkat 4;
• ang proseso ay makikita sa isang sample - pangkat 2 o 3 (depende sa kung saan eksaktong namuo ang dugo).

Paraan gamit ang zoliclones

Upang matukoy ang pangkat ng dugo, ang agglutination sa ganitong paraan ay isinasagawa gamit ang synthetic serum substitutes. Ang mga ito ay tinatawag na zoliclones. Naglalaman ang mga ito ng mga artipisyal na kapalit para sa ά at β-agglutins, na kilala bilang erythrotests (pink at asul ayon sa pagkakabanggit). Ang reaksyon ay nangyayari sa pagitan nila at ng mga pulang selula ng dugo ng pasyente.

Ang pamamaraang ito ay ang pinaka-tumpak at maaasahan. Karaniwang hindi ito nangangailangan paulit-ulit pananaliksik. Ang mga resulta ay sinusuri sa parehong paraan tulad ng sa kaso ng karaniwang pamamaraan. Ang kakaiba ay dapat itong kumpirmahin ng isang reaksyon na may isang tiyak na sintetikong kapalit (anti-AV). Bilang karagdagan, walang pagdirikit kapag nagdaragdag ng solusyon sa sodium chloride.

Ipahayag ang paraan gamit ang "Erythrotest-group card" kit

Isinasaalang-alang mga posibleng pamamaraan pagtatasa upang matukoy ang pangkat ng dugo, ito ay nagkakahalaga ng noting na ang pamamaraang ito may sariling katangian. Nagsisinungaling sila sa katotohanan na ang resulta ay maaaring masuri hindi lamang sa laboratoryo, kundi pati na rin sa mga kondisyon sa larangan. Ang isang espesyal na kit ay ginagamit upang isagawa ang pag-aaral. Kasama dito ang isang card na may mga balon, sa ilalim kung saan mayroon nang mga pinatuyong reagents. Bilang karagdagan sa anti-AB, anti-A at anti-B, ginagamit ang anti-D upang matukoy ang Rh factor.

Ang pamamaraang ito ay hindi nangangailangan ng espesyal na paghahanda; pinapayagan itong gumamit ng dugo na kinuha mula sa isang daliri, at maaaring naglalaman ito ng mga preservative. Una kailangan mong magdagdag ng isang patak ng tubig sa bawat balon upang matunaw ang mga sangkap. Pagkatapos nito, ang dugo ay idinagdag at bahagyang hinalo. Sa tatlong minuto ay makukuha ang resulta.

Maling aglutinasyon

Minsan ang data na nakuha pagkatapos ng isang pagsubok ay hindi totoo. Ang hindi pangkaraniwang bagay na ito ay nakasalalay sa ilang mga kadahilanan.

May tatlong uri ng maling reaksyon:

Pseudoagglutination. Ang totoong gluing ay hindi nangyayari; ang mga pulang selula ng dugo ay nakatiklop lamang sa mga haligi ng barya. Kung magdagdag ka ng isang pares ng mga patak ng asin, ang mga ito ay naghiwa-hiwalay. Ang isang katulad na kababalaghan ay maaaring makilala sa ilalim ng mikroskopyo.

Cold blood aglutination. Ang reaksyong ito ay sinusunod kung ang mga kondisyon para sa pagsasagawa ng pag-aaral ay hindi paborable. Kapag ang temperatura ay mas mababa sa +16˚C, maaaring mangyari ang pagbubuklod.

Panagglutination. Kung may impeksyon sa dugo, maaaring mali ang mga resulta ng pagsusuri. Posible rin ang hindi pangkaraniwang bagay na ito sa kaso ng mga sakit sa oncological, na may sepsis.

Ang aglutinasyon ay napakahalaga sa medisina. Pinapayagan nito hindi lamang upang matukoy ang uri ng dugo, kundi pati na rin upang makilala ang sanhi ng ahente ng mga sakit, pati na rin ang pagkakaroon ng mga impeksiyon. Ang pangunahing bagay ay sundin ang mga rekomendasyon ng doktor kapag naghahanda para sa pamamaraang ito. Tulad ng para sa mga medikal na tauhan, ang kanilang gawain ay lumikha kanais-nais na mga kondisyon at pagsunod sa lahat ng mga patakaran. Ito ang tanging paraan upang makamit ang mga tumpak na resulta kapag nagsasagawa ng aglutinasyon ng dugo.

Target: Kabisaduhin ang pamamaraan ng pagsasagawa ng mga agglutination reaction at precipitation reactions para sa pag-diagnose ng mga nakakahawang sakit.

Modyul 1. Morpolohiya at pisyolohiya ng mga mikroorganismo. Impeksyon. Ang kaligtasan sa sakit.

Paksa 16: Reaksyon ng aglutinasyon. Reaksyon ng ulan.

Kaugnayan ng paksa. Sa ilalim kaligtasan sa sakit nagpapahiwatig ng kaligtasan sa sakit ng katawan sa mga nakakahawa at hindi nakakahawa na ahente (pathogenic microorganism, dayuhang protina at iba pang mga sangkap). Ang mga ahente na ito ay tinatawag na antigens. Ang kaligtasan sa sakit ay maaaring congenital o nakuha. Congenital– kapag nabuo ang tissue at humoral protective device, na nagiging sanhi ng immunity sa mga nakakahawang sakit na ipinadala sa pamamagitan ng mana.

Nakuha– isinasagawa ng immune system ng katawan sa anyo ng paggawa ng mga antibodies o ang akumulasyon ng mga sensitized lymphocytes. Ito ay nahahati sa natural at artipisyal. Ayon sa mekanismo ng pagkilos ito ay nahahati sa aktibo at pasibo. Sa lahat mga reaksiyong immunological ang pangunahing sangkap ay antigen.

Pangunahing pag-andar immune system, na binubuo ng lymphoid tissue, ay ang pagkilala sa mga dayuhang ahente (antigens) at ang kanilang neutralisasyon.

Ang mga antigen ay maaaring pumasok sa katawan sa pamamagitan ng respiratory tract, digestive tract, sa pamamagitan ng balat at mga mucous membrane. Ang bawat antigen ay nagpapasigla sa pagbuo ng mga espesyal na sangkap ng protina - mga antibodies.

Mga antigen ay nahahati sa kumpleto at inferior (haptens). Kumpletong antigens magdulot ng kumpletong tugon ng immune. Mga may sira na antigens Hindi sila nag-uudyok ng isang immune response sa kanilang sarili, ngunit kung minsan ay nakukuha ang kakayahang ito kapag pinagsama sa mataas na molekular na timbang na mga carrier ng protina. Bilang karagdagan, mayroong mga antigens: hemihaptens, proantigens, heteroantigens at isoantigens.

Mga antibodies ay mga immunoglobulin mula sa serum ng dugo ng tao o hayop. Ang mga antibodies ay nabuo pagkatapos ng impeksyon at bilang resulta ng pagbabakuna na may humina o napatay na bakterya, rickettsia, mga virus, lason at iba pang mga ahente. Mga antibodies- mga protina ng immunoglobulin komposisyon ng kemikal nabibilang sa glycoproteins. Batay sa kanilang istraktura at immunobiological properties, ang mga immunoglobulin ay nahahati sa 5 klase: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Normal na antibodies matatagpuan sa mga tao at hayop na hindi nabakunahan. Mga tiyak na antibodies ay nabuo bilang resulta ng impeksyon o pagbabakuna.

Ang reaksyon sa pagitan ng isang antibody at isang antigen ay tinatawag serological. Mga reaksyon ng serological Ang mga ito ay lubos na tiyak at ginagamit sa pagsusuri ng maraming mga nakakahawang sakit. Ang pagkakaiba ay ginawa sa pagitan ng agglutination at precipitation reactions.

1. Agglutination reaction (RA) ay batay sa interaksyon ng isang antigen (agglutinogen) at isang antibody (agglutinin), kung saan ang mga microbial na katawan ay magkakadikit at namuo sa pagkakaroon ng isang electrolyte. Mayroong iba't ibang mga pagbabago sa reaksyon ng aglutinasyon.

Pinakamataas na halaga may:

- Macroscopic (pinalawak) agglutination sa mga test tube. Ang isang suspensyon ng microbes (diagnosticum) ay idinagdag sa serum ng pasyente at pagkatapos ng 1 oras sa isang thermostat sa temperatura na 37 degrees, ang pagbabanto (titer) ng serum kung saan naganap ang reaksyon ay nabanggit. Ang reaksyon ng agglutination ay itinuturing na positibo kapag ang isang namuo na may malinaw na pag-alis ng supernatant na likido ay nabuo sa ilalim ng test tube. Ang precipitate na ito ay tinatawag na agglutinate.

Batay sa likas na katangian ng agglutinate, ang pinong butil (O) at magaspang na butil (H) agglutination ay nakikilala. Ang isang agglutinoscope ay ginagamit upang makilala ang pinong butil na agglutinate. Ang pagtatala ng mga resulta ay nagsisimula sa mga control tube. Ang huling pagbabanto ng suwero kung saan sinusunod ang agglutination ay itinuturing na titer nito.

Layunin ng reaksyon: pagtuklas ng mga antibodies sa serum ng pasyente.

- Microscopic (pinabilis ) tinatayang agglutination sa salamin. Ang isang patak ng bacterial culture ay idinagdag sa isang patak ng diagnostic immune serum at pinaghalong pantay. Ang reaksyon ay nangyayari sa temperatura ng silid sa loob ng 5-10 minuto. Tapos na ang accounting. Kung positibo ang reaksyon, ang akumulasyon ng bakterya sa anyo ng mga butil o mga natuklap ay nabanggit sa patak ng serum. Layunin ng reaksyon: pagtukoy ng uri ng pathogen gamit ang isang kilalang diagnostic serum.

- Hindi direktang (passive) hemagglutination reaction (IRHA). Ang kakanyahan ng reaksyong ito ay ang mga pulang selula ng dugo ng tupa ay nakakapag-adsorb ng mga antigen sa kanilang ibabaw. Sa ilalim ng impluwensya ng mga tiyak na antibodies, ang mga pulang selula ng dugo ay magkakadikit at namuo, na bumubuo ng hemagglutinate sa ibaba. Ang reaksyon ay lubos na sensitibo at tiyak. Binibigyang-daan ka ng RNGA na tuklasin ang kaunting halaga ng mga antibodies at may sira na antigen na may likas na polysaccharide. Ang reaksyong ito ay ginagamit sa pagsusuri ng maraming mga nakakahawang sakit (tiyan at tipus, paratyphoid fever, tuberculosis, atbp.).

2. Reaksyon ng pag-ulan (RP ) – pag-ulan ng antigen-antibody complex. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng RP at RA ay na sa RA isang corpuscular antigen ang ginagamit, habang sa RP ang antigen ay isang colloidal substance ng isang protina o polysaccharide na kalikasan. Sa reaksyong ito, ang antigen ay tinatawag na precipitinogen at ang mga antibodies ay tinatawag na precipitin. Ang reaksyon ay isinasagawa sa mga test tube sa pamamagitan ng paglalagay ng antigen solution sa immune serum. Na may pinakamainam na ratio ng antigen at antibodies sa hangganan

Ang mga solusyon na ito ay bumubuo ng isang singsing ng precipitate. Kung ang pinakuluang at na-filter na mga extract ng mga organo at tisyu ay ginagamit bilang isang antigen, ang reaksyon ay tinatawag na thermoprecipitation reaction (Ascoli reaction, na ginagamit sa diagnosis anthrax, salot, tularemia, atbp.).

Ang mga reaksyon ng pag-ulan sa agar ay naging laganap: simpleng paraan ng pagsasabog, paraan ng dobleng pagsasabog.

Ang isang uri ng pag-ulan ay reaksyon ng flocculation– upang matukoy ang aktibidad ng toxoid o antitoxic serum. Bilang karagdagan, ang reaksyong ito ay maaaring gamitin upang matukoy ang toxigenicity ng Corynebacterium diphtheriae strains.

Mga partikular na layunin:

· Ipaliwanag ang papel ng mga antigen bilang mga inducers ng immune response;

· Ilarawan ang istruktura ng mga antigen, kabilang ang mga antigen ng mga mikroorganismo;

· Ilarawan ang mekanismo ng reaksyon ng aglutinasyon;

· Ilarawan ang mekanismo ng reaksyon ng pag-ulan.

Magagawang:

· Ipaliwanag ang papel ng mga antigen bilang mga inducers ng immune response;

· Ilarawan ang istruktura ng mga antibodies (iba't ibang klase ng immunoglobulins);

· Pag-aralan ang mekanismo ng pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa antigens;

· Bigyang-kahulugan ang mga resulta ng reaksyon ng aglutinasyon;

· Bigyang-kahulugan ang mga resulta ng reaksyon ng pag-ulan;

· Pag-aralan ang mga resultang nakuha.

Mga teoretikal na tanong:

1. Kahulugan ng konsepto ng "antigens", "antibodies".

2. Ang papel ng antigens bilang inducers ng immune response.

3. Istraktura ng mga antibodies (iba't ibang klase ng immunoglobulins).

4. Ang mekanismo ng pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa antigens.

5. Immune reactions, ang kanilang papel sa immune response at diagnosis ng mga nakakahawang sakit.

6. Mekanismo ng reaksyon ng aglutinasyon.

7. Mekanismo ng reaksyon ng precipitation.

Mga praktikal na gawain na ginagawa sa klase:

1. Pagsasagawa ng agglutination reaction upang makita ang mga antibodies sa serum ng pasyente.

2. Pagse-set up ng isang microagglutination reaksyon sa salamin na may diagnostic sera upang makilala ang isang purong kultura ng bakterya.

3. Pagsusuri ng mga resulta ng reaksyon ng aglutinasyon.

4. Pagse-set up ng precipitation reaction para makita ang bacterial antigen.

5. Pagsusuri ng mga resulta ng reaksyon ng pag-ulan.

6. Pagsusuri ng mga resulta ng hindi direktang reaksyon ng hemagglutination.

7. Pagguhit ng protocol.

Panitikan:

1. Pyatkin K.D., Krivoshein Yu.S. Microbiology na may virology at immunology – Kyiv: Higher School, 1992.- 431 p.

2. Vorobyov A.V., Bykov A.S., Pashkov E.P., Rybakova A.M. Microbiology.- M.: Medisina, 1998.- 336 p.

3. Medikal na mikrobiyolohiya /Inedit ni V.P. Pokrovsky. – M.: GEOTAR-MED, 2001. – 768 p.

4. Korotyaev A.I., Babichev S.A. Medikal na microbiology, immunology at virology / Textbook para sa mga unibersidad sa medisina, St. Petersburg: "Espesyal na Panitikan", 1998.- 592 p.

5. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiology / Textbook - 2nd ed., binago. at karagdagang – M.: Medisina, 1983.- 512 p.

6. Mga tala sa panayam.

Karagdagang pagbabasa:

1. Titov M.V. Mga nakakahawang sakit.- K., 1995.– 321 p.

2. Shuvalova E.P. Mga nakakahawang sakit – M.: Medicine, 1990.- 559 p.

Ang reaksyon ng agglutination ay batay sa tiyak na pakikipag-ugnayan ng mga antibodies (agglutinins) sa buong microbial o iba pang mga cell. Bilang resulta ng pakikipag-ugnayan na ito, ang mga agglomerate na particle ay nabuo na namuo (agglutinate). Ang mga bakterya, protozoa, fungi, yeast, rickettsia, erythrocytes at iba pang mga cell, parehong nabubuhay at napatay, ay maaaring lumahok sa reaksyon ng agglutination. Ang reaksyon ay nangyayari sa dalawang yugto: ang una ay isang tiyak na kumbinasyon ng antigen at antibody, ang pangalawa ay di-tiyak, i.e. ang pagbuo ng isang nakikitang agglutinate. Ang pag-ulan ng agglutinate ay nangyayari sa pagkakaroon ng mga electrolyte, tulad ng sodium chloride. Ang mga microorganism sa agglutinate ay nananatiling buhay, ngunit nawawala ang kanilang kadaliang kumilos.

Ang reaksyon ng agglutination ay malawakang ginagamit para sa serological diagnosis ng mga nakakahawang sakit at pagpapasiya ng antigenic na istraktura ng mga nakahiwalay na microbes. Upang matukoy ang antigenic na istraktura ng isang pathogen na nakahiwalay mula sa katawan ng isang pasyente o isang carrier, ang tiyak na immune serum ay ginagamit, na nakuha sa pamamagitan ng pagbabakuna ng mga hayop (kuneho, asno, tupa) na may ilang mga microorganism. Ang pagkakakilanlan ng microbe ay isinasagawa sa isang agglutination reaction sa salamin na may adsorbed o monoreceptor sera o sa mga test tube na may tiyak na agglutinating sera. Ang adsorbed sera ay naglalaman ng mga antibodies lamang sa mga antigen na partikular sa isang partikular na microbe, at ang monoreceptor sera ay naglalaman lamang ng mga antibodies sa isang partikular na antigen ng pathogen.

Ang specie sera ay naglalaman ng mga antibodies sa lahat ng antigens ng isang partikular na mikrobyo.

Kung nabibilang ang nakahiwalay na microorganism culture species na ito natutukoy sa pamamagitan ng agglutination na may kilalang serum sa titer ng antibody na ipinahiwatig sa label ng serum ampoule. Ang titer ng antibody ng isang serum ay itinuturing na huling dilution nito, kung saan ang pagsasama-sama ng kultura ng mga mikrobyo na ginamit upang mabakunahan ang hayop ay sinusunod pa rin. Ang adsorbed at monoreceptor sera ay karaniwang ginagamit na hindi natunaw sa reaksyon ng pagsasama-sama ng salamin.

Kapag tinutukoy ang pagkakaroon ng mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, ito ay natunaw ng isang isotonic sodium chloride solution na nagsisimula sa isang pagbabanto ng 1: 50 hanggang 1: 800 o higit pa. Ang isang suspensyon ng mga buhay o napatay na mikrobyo ay idinagdag sa bawat pagbabanto. Ang mga paghahanda na naglalaman ng mga mikrobyo na pinatay ng init o formaldehyde ay tinatawag na diagnosticums. Ang mga diagnosticum na nakuha sa pamamagitan ng pag-init ng mga microorganism culture ay naglalaman lamang ng mga somatic antigens. Kapag gumagamit lamang ng formaldehyde, pinapanatili ng mga mikrobyo ang kanilang mga flagellar antigens.

Sa pagkakaroon ng mga antibodies sa dugo ng pasyente, ang diagnosticum na kinuha sa reaksyon ay dumidikit at isang sediment (agglutinate) ay nabubuo sa dalawang test tubes. Sa kasong ito, ang mga resulta ng reaksyon ng agglutination ay itinuturing na positibo. Sa control tube, kung saan idinagdag ang isotonic sodium chloride solution at diagnosticum, ang suspensyon ng microbes ay dapat na homogenous ( negatibong reaksyon aglutinasyon).

Ang mga resulta ng reaksyon ng agglutination sa ilang mga sakit, tulad ng leptospirosis, ay isinasaalang-alang lamang sa microscopically sa isang madilim na larangan ng view ng isang mikroskopyo (microagglutination). Upang makagawa ng serological diagnosis ng isang sakit, isaalang-alang diagnostic na sakit. Karaniwan itong tumutugma sa isang serum dilution na 1:100 o 1:200.

Ang mga antibodies sa blood serum ng pasyente ay maaaring matukoy gamit ang agglutination reaction sa mga kaso ng typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction), brucellosis (Wright reaction), tularemia, atbp.
Reaksyon ni Castellani. Para sa ilan mga nakakahawang sakit o pagbabakuna na may mga microorganism na naglalaman mga antigen ng grupo, sa serum ng dugo, bilang karagdagan sa mga antibodies na tiyak sa ganitong uri, lumilitaw din ang mga antibodies ng grupo. Sa kasong ito, ang mga kaugnay na bacterial species ay pagsasama-samahin ng magreresultang sera.

Iminungkahi ni Castellani ang isang paraan para sa adsorption ng mga antibodies ng grupo mula sa immune sera, batay sa kanilang pag-alis sa tulong ng mga microorganism ng mga kaugnay na species na may mga antigen ng grupo ngunit kulang sa mga tiyak. Ang isang kultura ng naturang mga microorganism na idinagdag sa serum ay nag-adsorb ng mga nonspecific na antibodies ng grupo, at pagkatapos na alisin ang antigen-antibody complex sa pamamagitan ng centrifugation, tanging mga tiyak na immunoglobulin ang nananatili sa serum. Ang sera na naproseso ayon sa paraan ng Castellani ay maaaring gamitin sa reaksyon ng agglutination bilang lubos na tiyak.

Reaksyon ng aglutinasyon.

Ang reaksyon ng agglutination ay ang gluing at precipitation ng microbial o iba pang mga cell (erythrocytes) sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies sa pagkakaroon ng isang electrolyte. Nakikitang epekto mga reaksyon (agglutination phenomenon) - ang pagbuo ng isang precipitate na tinatawag na agglutinate.

Ang reaksyong ito ay ginagamit para sa serodiagnosis At seroidentification. Ginagamit ang RA para sa serodiagnosis (pagtuklas ng mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente) tipus at paratyphoid(Reaksyon ni Vidal), brucellosis(Reaksyon ni Wright) tularemia at leptospirosis. Ginagamit ang RA para sa seroidentification (pagtukoy sa uri ng pathogen na nakahiwalay sa isang pasyente) kung kailan mga impeksyon sa bituka, whooping cough, kolera atbp.

Mga bahagimga reaksyon:

1. A ntigen (agglutinogen) – ang mga ito ay buo (hindi nawasak) microbial o iba pang mga cell ( corpuscular, hindi matutunaw na antigen). Mga aglutinogen- ito ay isang suspensyon buhay o pinatay microbial cells o anumang iba pang mga cell. Ang mga antigen ay maaaring hindi kilala o kilala. Ang hindi kilalang agglutinogen ay isang microbial culture na nakahiwalay sa katawan ng pasyente na kailangang matukoy. Kilalang antigen - diagnosticum- diagnostic na gamot - pagsususpinde sa mga patay mikrobyo kilalang species sa solusyon ng asin. Itong suspension maulap (malabo), dahil Ang mga microbial cell ay hindi natutunaw, ngunit nananatiling buo. Ang isang kilalang agglutinogen ay gagamitin upang makita ang hindi kilalang mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente.

2. Antibody (aglutinin)- matatagpuan sa serum ng dugo. Ang mga antibodies ay maaari ding hindi kilala o kilala. Ang mga hindi kilalang antibodies na tutukuyin ay nasa serum ng dugo taong may sakit. Ang mga kilalang antibodies ay matatagpuan sa immune diagnostic sera na tinatawag na agglutinating sera. Ginagamit ang mga ito para sa sero-identification, i.e. upang matukoy ang hindi kilalang antigen - isang uri ng microbial culture.

3. Electrolyte– 0.9% solusyon ng sodium chloride.

Mga pamamaraan para sa pagtatanghal ng RA.

1. Tinatayang (lamellar) RA– isinasagawa sa salamin. Maglagay ng 2 patak ng serum at 1 patak ng isotonic solution sa isang glass slide. Ang isang microbial culture ay ipinakilala sa isa sa mga patak ng serum at sa isang patak ng isotonic solution sa isang loop at halo-halong. Isang patak ng isotonic solution may mikrobyo – kontrol ng antigen, ihulog mga serum na walang mikrobyo – kontrol ng antibody, ihulog mga serum na may mikrobyo – karanasan. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies na tumutugma sa microbial antigens na humahalo dito, ang mga antibodies at antigens ay partikular na magbubuklod sa isa't isa at pagkatapos ng 1-3 minuto ay lilitaw ang mga agglutinate flakes sa test drop. Ang antigen control ay dapat na maulap at ang antibody control ay dapat na malinaw. Ang mga resulta ng reaksyon ay naitala batay sa hitsura ng agglutinate flakes . Kung ang mga natuklap ay nahuhulog, ang reaksyon ay positibo, i.e. Ang isang antigen ay tumutugma sa isang antibody at ang antigen ay maaaring gamitin upang matukoy ang antibody o vice versa. Kung mananatili ang ulap, negatibo ang reaksyon.

2. Detalyadong reaksyon ng agglutination - isinasagawa sa mga test tube. Una, maghanda ng 2-tiklop na pagbabanto ng serum ng dugo ng isang taong may sakit mula 1:50 hanggang 1:1600. Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay ibinuhos sa 6 na tubo. 1 ml ng serum ng dugo ng pasyente sa isang pagbabanto ng 1:50 ay idinagdag sa unang test tube, halo-halong at isang pagbabanto ng 1:100 ay nakuha, pagkatapos ay 1 ml ng isang pagbabanto ng 1:100 ay inilipat sa pangalawang test tube at ang pagbabanto ng 1:200 ay nakuha, atbp. Dalawang tubo ang itinatago para sa antigen at serum control. Sa serum control idagdag lamang ang serum sa isang dilution na 1:50, sa antigen control - ang antigen lamang. Magdagdag ng 0.1 ml ng antigen - diagnosticum (O- o H-) sa lahat ng iba pang test tube at ilagay ang lahat ng test tube sa thermostat sa 37°C sa loob ng 18-20 oras. Ang mga resulta ng reaksyon ay naitala batay sa likas na katangian, dami ng namuo (agglutinate) na nabuo at ang antas ng labo. Ang accounting ay isinasagawa lamang sa mga sumusunod na resulta sa mga kontrol: serum control - transparent, antigen control - cloudy. Ang mga O-antibodies ay nagbibigay ng pinong butil na precipitate. H-antibodies - magaspang na butil. Batay sa huling test tube kung saan nakikita pa rin ang agglutination reaction, ito ay tinutukoy diagnostic titer.

Kapag serodiagnosis ng mga sakit, ito ay mahalaga hindi lamang upang makita ang mga tiyak na antibodies sa tiyak na pathogen, ngunit din upang matukoy ang kanilang dami, i.e. magtatag ng titer ng antibody upang mapag-usapan natin ang pagkakaroon ng sakit na dulot ng pathogen na ito. Ang titer na ito ay tinatawag na diagnostic titer. Halimbawa, upang masuri ang typhoid fever, kailangan mong tukuyin ang titer ng antibody na 1:400, ngunit hindi bababa. Higit pa tumpak na mga resulta nagbibigay ng pagtuklas ng pagtaas ng mga antibodies sa nakapares na sera Ang serum ng pasyente ay kinokolekta sa simula ng sakit at pagkatapos ng 3 - 5 o higit pang mga araw. Kung ang titer ng antibody ay tumaas ng hindi bababa sa 4 na beses, samakatuwid, maaari nating pag-usapan ang kasalukuyang sakit.