(MIC) - ελάχιστη ανασταλτική (κατασταλτική) συγκέντρωση - η χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικού που αναστέλλει την ορατή ανάπτυξη του υπό μελέτη μικροοργανισμού in vitro(σε ζωμό ή θρεπτικά μέσα άγαρ) υπό τυπικές πειραματικές συνθήκες και εκφράζεται σε μg/ml (mg/l) ή μονάδες/ml.

Ελάχιστη βακτηριοκτόνος συγκέντρωση (MBC) -τη χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικού, η οποία στη μελέτη in vitroπροκαλεί το θάνατο του 99,9% των μικροοργανισμών από το αρχικό επίπεδο σε μια ορισμένη χρονική περίοδο.

Ευαίσθητοςμικροοργανισμός - ένα στέλεχος ενός μικροοργανισμού που δεν έχει μηχανισμούς αντίστασης σε ένα δεδομένο φάρμακο. Διακόπτεται σε ένα θρεπτικό μέσο όταν ένα αντιβιοτικό χρησιμοποιείται σε θεραπευτική δόση.

Μέτρια ανθεκτικόμικροοργανισμός - ένα στέλεχος μικροοργανισμού, η ανάπτυξη του οποίου σε ένα θρεπτικό μέσο σταματά μόνο όταν το αντιβιοτικό χρησιμοποιείται στην υψηλότερη δόση. Η θεραπεία λοιμώξεων που προκαλούνται από μετρίως ανθεκτικούς μικροοργανισμούς πραγματοποιείται απουσία εναλλακτικά φάρμακα, την υψηλότερη (μέγιστη θεραπευτική) δόση του αντιβιοτικού.

Ανθεκτικός μικροοργανισμός -ένα στέλεχος ενός μικροοργανισμού που έχει μηχανισμούς αντίστασης σε ένα δεδομένο φάρμακο. Η ανάπτυξή του σε θρεπτικό μέσο σταματά μόνο όταν χρησιμοποιούνται πολύ υψηλές συγκεντρώσεις του φαρμάκου, οι οποίες δεν μπορούν να δημιουργηθούν στον οργανισμό λόγω της υψηλής τοξικότητάς τους. Κατά τη θεραπεία λοιμώξεων που προκαλούνται από αυτόν τον μικροοργανισμό, δεν υπάρχει κλινικό αποτέλεσμα από τη θεραπεία ακόμη και όταν χρησιμοποιείται υψηλότερη δόσηαντιβιοτικό. Σε αυτή την περίπτωση, μπορεί να παρατηρηθεί παρενέργειεςαντιβιοτικό.

Ενδείξεις για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά:

1) προσδιορισμός της ευαισθησίας σε ένα νέο αντιβιοτικό που συνιστάται για χρήση.

2) περιοδική παρακολούθηση της αντοχής στα αντιβιοτικά σε άτομο ιατρικά κέντρακαι σε διαφορετικές γεωγραφικές περιοχές για την παρακολούθηση της εξάπλωσης της αντοχής στα αντιβιοτικά·

3) αιτιολόγηση για επαρκή αντιβιοτική θεραπεία σε μεμονωμένους ασθενείς σε περιπτώσεις:

α) απομόνωση μικροοργανισμών από πρωτίστως αποστειρωμένα υγρά, όργανα και ανθρώπινους ιστούς·

β) κατά την απομόνωση μικροοργανισμών από πρωτίστως μη στείρους βιότοπους, η αξιολόγηση ευαισθησίας θα πρέπει να προηγείται από αξιολόγηση της κλινικής σημασίας του απομονωμένου μικροοργανισμού.

γ) λοιμώξεις ανθεκτικές σε εμπειρικά φάρμακα.

δ) μοναδικές λοιμώξεις και έλλειψη εμπειρίας στη θεραπεία τους.

ε) λοιμώξεις που απαιτούν παρατεταμένη θεραπεία (αντίσταση στα αντιβιοτικά ανιχνεύεται κάθε εβδομάδα θεραπείας, καθώς είναι δυνατή η αλλαγή στα παθογόνα).

Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά είναι ακατάλληλος:

1) για αντιπροσώπους φυσιολογική μικροχλωρίδαανθρώπους, όταν είναι απομονωμένοι από φυσικούς οικοτόπους·

2) για τύπους μικροοργανισμών στους οποίους δεν έχουν περιγραφεί ανθεκτικές μορφές σε ορισμένα αντιβιοτικά. Για παράδειγμα, ο Streptococcus pyogenes είναι ευαίσθητος στην πενικιλίνη, επομένως η δοκιμή ευαισθησίας σε αυτά τα φάρμακα δεν είναι πρακτική στην πρακτική ρουτίνας.

(ΠΑΠΑΡΟΥΝΑ)είναι η κυψελιδική συγκέντρωση του εισπνεόμενου αναισθητικού που εμποδίζει την κίνηση στο 50% των ασθενών ως απόκριση σε ένα τυποποιημένο ερέθισμα (π.χ. τομή του δέρματος).Το MAC είναι ένα χρήσιμο μέτρο επειδή αντανακλά τη μερική πίεση του αναισθητικού στον εγκέφαλο, επιτρέπει τη σύγκριση της ισχύος διαφορετικών αναισθητικών και παρέχει ένα πρότυπο για πειραματικές μελέτες (Πίνακας 7-3). Ωστόσο, θα πρέπει να θυμόμαστε ότι το MAC είναι μια στατιστικά μέση τιμή και η τιμή του στην πρακτική αναισθησιολογία είναι περιορισμένη, ειδικά σε στάδια που συνοδεύονται από ταχεία αλλαγή της κυψελιδικής συγκέντρωσης (για παράδειγμα, κατά την επαγωγή). Οι τιμές MAC των διαφόρων αναισθητικών προστίθενται μαζί. Για παράδειγμα, ένα μείγμα 0,5 MAC οξειδίου του αζώτου (53%) Και 0,5 MAC αλοθανίου (0,37%) προκαλεί καταστολή του ΚΝΣ περίπου συγκρίσιμη με την καταστολή που εμφανίζεται με τη δράση 1 MAC ενφλουράνιου (1,7%). Σε αντίθεση με την καταστολή του ΚΝΣ, οι βαθμοί καταστολής του μυοκαρδίου για διαφορετικά αναισθητικά στο ίδιο MAC δεν είναι ισοδύναμοι: 0,5 MAC αλοθανίου προκαλεί πιο έντονη αναστολή της λειτουργίας άντλησης της καρδιάς από 0,5 MAC οξειδίου του αζώτου.

Ρύζι. 7-4.Υπάρχει μια άμεση, αν και όχι αυστηρά γραμμική, σχέση μεταξύ της ισχύος του αναισθητικού και της λιποδιαλυτότητάς του. (Από: Lowe H. J., Hagler K. Gas Chromatography in Biology and Medicine. Churchill, 1969. Αναπαράγεται με αλλαγές, με άδεια.)

Το MAC αντιπροσωπεύει μόνο ένα σημείο στην καμπύλη δόσης-απόκρισης, δηλαδή το ED 50 (ED 50%, ή 50% αποτελεσματική δόση, είναι η δόση του φαρμάκου που προκαλεί το αναμενόμενο αποτέλεσμα στο 50% των ασθενών.- Σημείωμα μονοπάτι).Το MAK έχει κλινική αξία εάν είναι γνωστό το σχήμα της καμπύλης δόσης-απόκρισης για το αναισθητικό. Χονδρικά, μπορούμε να υποθέσουμε ότι 1,3 MAC οποιουδήποτε αναισθητικού εισπνοής (για παράδειγμα, για αλοθάνιο 1,3 X 0,74% = 0,96%) εμποδίζει την κίνηση κατά τη χειρουργική διέγερση στο 95% των ασθενών (δηλ. 1,3 MAC - περίπου ισοδύναμο με ED 95%). σε 0,3-0,4 MAC, εμφανίζεται αφύπνιση (MAC εγρήγορσης).

Το MAC αλλάζει υπό την επίδραση φυσιολογικών και φαρμακολογικών παραγόντων (Πίνακας 7-4.). Το MAC είναι πρακτικά ανεξάρτητο από τον τύπο του ζωντανού πλάσματος, τον τύπο και τη διάρκεια της αναισθησίας.

Οξείδιο του αζώτου

Φυσικές ιδιότητες

Το υποξείδιο του αζώτου (N 2 O, «αέριο γέλιου») είναι η μόνη ανόργανη ένωση που χρησιμοποιείται σε κλινική πρακτικήεισπνεόμενα αναισθητικά (Πίνακας 7-3). Το υποξείδιο του αζώτου είναι άχρωμο, ουσιαστικά άοσμο, δεν αναφλέγεται ούτε εκρήγνυται, αλλά υποστηρίζει την καύση όπως το οξυγόνο. Σε αντίθεση με όλα τα άλλα εισπνεόμενα αναισθητικά, θερμοκρασία δωματίουΚαι ατμοσφαιρική πίεσηΤο υποξείδιο του αζώτου είναι αέριο (όλα τα υγρά εισπνεόμενα αναισθητικά μετατρέπονται σε κατάσταση ατμού χρησιμοποιώντας ατμοποιητές, γι' αυτό μερικές φορές ονομάζονται αναισθητικά που σχηματίζουν ατμό.- Σημείωμα μονοπάτι).Υπό πίεση, το υποξείδιο του αζώτου μπορεί να αποθηκευτεί ως υγρό επειδή η κρίσιμη θερμοκρασία του είναι υψηλότερη από τη θερμοκρασία δωματίου (βλ. Κεφάλαιο 2). Το υποξείδιο του αζώτου είναι ένα σχετικά φθηνό εισπνεόμενο αναισθητικό.

Επίδραση στο σώμα

ΕΝΑ. Καρδιαγγειακό σύστημα. Το υποξείδιο του αζώτου διεγείρει το συμπαθητικό νευρικό σύστημα, γεγονός που εξηγεί την επίδρασή του στην κυκλοφορία του αίματος. Αν και in vitroΤο αναισθητικό προκαλεί κατάθλιψη του μυοκαρδίου στην πράξη, η αρτηριακή πίεση, η καρδιακή παροχή και ο καρδιακός ρυθμός δεν αλλάζουν ή αυξάνονται ελαφρά λόγω της αύξησης της συγκέντρωσης των κατεχολαμινών (Πίνακας 7-5).

ΠΙΝΑΚΑΣ 7-3. Ιδιότητες σύγχρονων εισπνεόμενων αναισθητικών

1 Οι παρουσιαζόμενες τιμές MAC υπολογίζονται για άτομα ηλικίας 30-55 ετών και εκφράζονται ως ποσοστό μιας ατμόσφαιρας. Όταν χρησιμοποιείται σε μεγάλα υψόμετρα, πρέπει να χρησιμοποιείται υψηλότερη συγκέντρωση αναισθητικού στο εισπνεόμενο μείγμα για να επιτευχθεί η ίδια μερική πίεση. *Εάν MAC > 100%, απαιτούνται υπερβαρικές συνθήκες για να επιτευχθεί 1,0 MAC.

Μυοκαρδιακή κατάθλιψη μπορεί να έχει κλινική σημασίαμε ισχαιμική καρδιακή νόσο και υποογκαιμία: η προκύπτουσα αρτηριακή υπόταση αυξάνει τον κίνδυνο ανάπτυξης ισχαιμίας του μυοκαρδίου.

Το υποξείδιο του αζώτου προκαλεί συστολή πνευμονική αρτηρία, που αυξάνει την πνευμονική αγγειακή αντίσταση (PVR) και οδηγεί σε αυξημένη πίεση στον δεξιό κόλπο. Παρά τη στένωση των δερματικών αγγείων, η ολική περιφερική αγγειακή αντίσταση (TPVR) αλλάζει ελαφρώς.

ΠΙΝΑΚΑΣ 7-4.Παράγοντες που επηρεάζουν το MAC

Δεδομένου ότι το υποξείδιο του αζώτου αυξάνει τη συγκέντρωση των ενδογενών κατεχολαμινών, η χρήση του αυξάνει τον κίνδυνο αρρυθμιών.

Β. Αναπνευστικό σύστημα.Το υποξείδιο του αζώτου αυξάνει τον αναπνευστικό ρυθμό (δηλαδή προκαλεί ταχύπνοια) και μειώνει τον αναπνεόμενο όγκο ως αποτέλεσμα της διέγερσης του κεντρικού νευρικού συστήματος και πιθανώς της ενεργοποίησης των υποδοχέων της πνευμονικής διάτασης. Το συνολικό αποτέλεσμα είναι μια ελαφρά αλλαγή στον λεπτό όγκο αναπνοής και στο PaCO 2 σε ηρεμία. Η υποξική ώθηση, δηλαδή μια αύξηση στον αερισμό ως απόκριση στην αρτηριακή υποξαιμία, που προκαλείται από περιφερικούς χημειοϋποδοχείς στα καρωτιδικά σώματα, αναστέλλεται σημαντικά όταν χρησιμοποιείται οξείδιο του αζώτου, ακόμη και σε χαμηλές συγκεντρώσεις. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε σοβαρές επιπλοκέςπου εμφανίζεται σε έναν ασθενή στην αίθουσα ανάνηψης, όπου δεν είναι πάντα δυνατός ο γρήγορος εντοπισμός της υποξαιμίας.

Β. Κεντρικό νευρικό σύστημα.Το υποξείδιο του αζώτου αυξάνει την εγκεφαλική ροή αίματος, προκαλώντας ελαφρά αύξηση της ενδοκρανιακής πίεσης. Το υποξείδιο του αζώτου αυξάνει επίσης την κατανάλωση οξυγόνου στον εγκέφαλο (CMRO 2). Το υποξείδιο του αζώτου σε συγκέντρωση μικρότερη από 1 MAC παρέχει επαρκή ανακούφιση από τον πόνο στην οδοντιατρική και κατά τη διάρκεια μικροχειρουργικών επεμβάσεων.

Δ. Νευρομυϊκή αγωγιμότητα.Σε αντίθεση με άλλα εισπνεόμενα αναισθητικά, το υποξείδιο του αζώτου δεν προκαλεί αισθητή μυϊκή χαλάρωση. Αντίθετα, σε υψηλές συγκεντρώσεις (όταν χρησιμοποιείται σε υπερβαρικούς θαλάμους) προκαλεί ακαμψία των σκελετικών μυών. Το υποξείδιο του αζώτου δεν προκαλεί πιθανώς κακοήθη υπερθερμία.

Δ. Νεφρά.Το υποξείδιο του αζώτου μειώνει τη νεφρική ροή του αίματος λόγω της αυξημένης νεφρικής αγγειακής αντίστασης. Αυτό μειώνει την ταχύτητα σπειραματική διήθησηκαι διούρηση.

ΠΙΝΑΚΑΣ 7-5.Κλινική φαρμακολογία εισπνεόμενων αναισθητικών

Σημείωμα:

Αύξηση;

↓ - μείωση; ± - καμία αλλαγή. ? - άγνωστο. 1 Με φόντο τον μηχανικό αερισμό.

2 Οι μεταβολικές απαιτήσεις του εγκεφάλου αυξάνονται εάν το enflurane προκαλέσει επιληπτικές κρίσεις.

Τα αναισθητικά είναι πιθανό να παρατείνουν τον αποκλεισμό της εκπόλωσης, αλλά αυτό το αποτέλεσμα δεν είναι κλινικά σημαντικό.

4 Μέρος του αναισθητικού που εισέρχεται στην κυκλοφορία του αίματος που μεταβολίζεται.

Ε. Ήπαρ.Το υποξείδιο του αζώτου μειώνει την ηπατική ροή του αίματος, αλλά σε μικρότερο βαθμό από άλλα εισπνεόμενα αναισθητικά.

Ζ. Γαστρεντερικό σωλήνα.Μερικές μελέτες έχουν δείξει ότι το υποξείδιο του αζώτου προκαλεί ναυτία και έμετο μετεγχειρητική περίοδοως αποτέλεσμα της ενεργοποίησης της ζώνης ενεργοποίησης των χημειοϋποδοχέων και του κέντρου εμετού μέσα προμήκης μυελός. Αντίθετα, μελέτες άλλων επιστημόνων δεν βρήκαν καμία σχέση μεταξύ του υποξειδίου του αζώτου και του εμετού.

Κριτήρια αντιμικροβιακή δράσητα ναρκωτικά είναι ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση(MIC) και ελάχιστη βακτηριοκτόνο συγκέντρωση(MBK). Το MIC είναι η χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικών που αναστέλλει πλήρως in vitro ορατός βακτηριακή ανάπτυξη. Εκφράζεται σε mg/l ή μg/ml. Το MBC είναι η χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικού που προκαλεί βακτηριοκτόνο δράση. Για τον προσδιορισμό του, είναι απαραίτητο να σπείρουμε από δοκιμαστικούς σωλήνες στους οποίους δεν υπάρχει οπτικά ανάπτυξη σε πυκνό θρεπτικό άγαρ που δεν περιέχει αντιβιοτικό. Αυτός ο δείκτης έχει μεγάλη κλινική σημασία. Με βάση τη μέθοδο της σειριακής αραίωσης, έχουν δημιουργηθεί μικρομέθοδοι που περιλαμβάνουν τη χρήση μικρότερου όγκου θρεπτικού μέσου. Επί του παρόντος, για τη διεξαγωγή αυτού του τύπου έρευνας, παράγονται πολυάριθμα εμπορικά κιτ, τα οποία αποτελούνται από ξηρές σταθεροποιημένες αραιώσεις αντιβιοτικών σε θρεπτικό μέσο, ​​τα οποία αραιώνονται με ένα εναιώρημα του εξεταζόμενου μικροβίου. Αυτά τα σετ μπορούν να αποθηκευτούν σε φυσιολογικές συνθήκες, εξαλείφοντας έτσι την ανάγκη παρασκευής αραιώσεων του μέσου και αντιβιοτικών εργαστηριακές συνθήκες. Οι δοκιμές μικροαραίωσης έχουν επίσης το πλεονέκτημα ότι ενσωματώνονται σε ένα αυτοματοποιημένο σύστημα.

Με βάση τα δεδομένα που ελήφθησαν (διάμετρος ζώνης αναστολής ανάπτυξης ή τιμή MIC), οι μικροοργανισμοί χωρίζονται σε ευαίσθητους, μέτρια ανθεκτικούς και ανθεκτικούς. Για τη διάκριση μεταξύ αυτών των κατηγοριών, χρησιμοποιούνται οι λεγόμενες οριακές συγκεντρώσεις αντιβιοτικών, οι οποίες δεν είναι σταθερές τιμές. Αναθεωρούνται καθώς αλλάζει η ευαισθησία του μικροβιακού πληθυσμού. Η ανάπτυξη και αναθεώρηση των κριτηρίων ερμηνείας πραγματοποιείται από κορυφαίους ειδικούς (χημειοθεραπευτές, μικροβιολόγους) που είναι μέλη ειδικών επιτροπών. Ένα από αυτά είναι η Εθνική Επιτροπή Προτύπων Κλινικών Εργαστηρίων ( Νεθνικός ντο ommitteefor ντογραμμικός μεγάλοεργαστηριο μικρό tandards – NCCLS), που διοργανώθηκε στις Η.Π.Α. Επί του παρόντος, τα πρότυπα NCCLS χρησιμοποιούνται ως διεθνή πρότυπα για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού της ευαισθησίας των βακτηρίων κατά τη διάρκεια πολυκεντρικών μικροβιολογικών και κλινικές μελέτες.

Προσδιορισμός βακτηριακής ευαισθησίας στα αντιβιοτικά.Το κριτήριο για την ευαισθησία των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά είναι η ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση (MIC) του αντιβιοτικού, η οποία καθυστερεί την ανάπτυξη του παθογόνου υπό τυπικές πειραματικές συνθήκες.

Για να προσδιορίσετε αντοχή στα φάρμακαχρησιμοποιήστε μια καθημερινή καθαρή καλλιέργεια του παθογόνου που απομονώνεται από το σώμα του ασθενούς και ένα πρότυπο θρεπτικό μέσο(AGV ή άγαρ Mueller-Hinton) για τον εμβολιασμό του.

Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά πραγματοποιείται με τη μέθοδο της διάχυσης με δίσκο ή τη μέθοδο των σειριακών αραιώσεων του αντιβιοτικού σε υγρά ή στερεά μέσα.

Μέθοδος διάχυσης δίσκου.Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας στα αντιβιοτικά με τη μέθοδο του χάρτινου δίσκου βασίζεται στη διάχυση του αντιβιοτικού στο θρεπτικό μέσο. Η συγκέντρωση των αντιβιοτικών στους δίσκους επιλέγεται με τέτοιο τρόπο ώστε οι διάμετροι των ζωνών αναστολής ανάπτυξης των τυπικών μικροοργανισμών δοκιμής να συμμορφώνονται με τα διεθνή πρότυπα. Αυτή η συγκέντρωση αντιστοιχεί στη μέση θεραπευτική δόση για τυπικά στελέχη μικροοργανισμών.

Το παρασκευασμένο εναιώρημα μικροοργανισμών ενοφθαλμίζεται στην επιφάνεια ενός ειδικού μέσου (AGV ή άγαρ Mueller-Hinton) σε τρυβλία Petri. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας αποστειρωμένα τσιμπιδάκια, τυποποιημένοι χάρτινοι δίσκοι εμποτισμένοι σε διαλύματα διαφόρων αντιβιοτικών τοποθετούνται στην εμβολιασμένη επιφάνεια σε ίση απόσταση μεταξύ τους, από τις άκρες και το κέντρο του κυπέλλου (μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν ειδικές συσκευές και διανομείς). Τα ενοφθαλμισμένα πιάτα διατηρούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία βέλτιστη για την ανάπτυξη των υπό μελέτη βακτηρίων. Εάν τα βακτήρια είναι ευαίσθητα σε αυτό το αντιβιοτικό, τότε σχηματίζεται μια ζώνη αναστολής ανάπτυξης γύρω από τον δίσκο. Η διάμετρος της ζώνης αναστολής ανάπτυξης αντιστοιχεί στον βαθμό ευαισθησίας του υπό μελέτη μικροοργανισμού σε ένα δεδομένο αντιβιοτικό. Το τελικό αποτέλεσμα αξιολογείται με τη χρήση ειδικών πινάκων που υποδεικνύουν τις διαμέτρους των ζωνών αναστολής ανάπτυξης τυπικών καλλιεργειών, ευαίσθητων, ανθεκτικών και μετρίως ανθεκτικών.

Η μέθοδος δίσκου δεν παρέχει αξιόπιστα δεδομένα κατά τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των μικροοργανισμών σε πολυπεπτιδικά αντιβιοτικά που διαχέονται ελάχιστα στο άγαρ (για παράδειγμα, πολυμυξίνη, ριστομυκίνη). Επίσης, αυτή η μέθοδος δεν επιτρέπει τον προσδιορισμό της ελάχιστης ανασταλτικής συγκέντρωσης του αντιβιοτικού.

Μέθοδος σειριακής αραίωσης.Αυτή η μέθοδος καθορίζει την ελάχιστη συγκέντρωση του αντιβιοτικού που αναστέλλει την ανάπτυξη της εξεταζόμενης βακτηριακής καλλιέργειας (MIC, MIC). Για να γίνει αυτό, παρασκευάστε πρώτα ένα μητρικό διάλυμα που περιέχει μια ορισμένη συγκέντρωση του αντιβιοτικού (μg/ml ή μονάδες/ml) ​​σε ειδικό διαλύτη ή ρυθμιστικό διάλυμα. Στη συνέχεια, όλες οι επόμενες αραιώσεις στο ζωμό (σε όγκο 1 ml) παρασκευάζονται από το κύριο διάλυμα, μετά το οποίο 0,1 ml του δοκιμαστικού βακτηριακού εναιωρήματος που περιέχει 10 6 - 10 7 προστίθεται σε κάθε αραίωση βακτηριακά κύτταρασε 1 ml. Προσθέστε 1 ml ζωμού (χωρίς αντιβιοτικό) και 0,1 ml βακτηριακού εναιωρήματος (έλεγχος καλλιέργειας) στον τελευταίο δοκιμαστικό σωλήνα. Οι καλλιέργειες επωάζονται στους 37 0 C μέχρι την επόμενη μέρα, μετά την οποία τα αποτελέσματα του πειράματος σημειώνονται από τη θολότητα του θρεπτικού μέσου, σε σύγκριση με τον έλεγχο. Ο τελευταίος δοκιμαστικός σωλήνας με διαφανές θρεπτικό μέσο υποδεικνύει επιβράδυνση της ανάπτυξης της βακτηριακής καλλιέργειας υπό μελέτη, υπό την επίδραση της ελάχιστης ανασταλτικής (ανασταλτικής) συγκέντρωσης (MIC, MIC) του αντιβιοτικού που περιέχεται σε αυτό. Για να εκτιμηθεί η ελάχιστη βακτηριοκτόνος συγκέντρωση (MBC), η σπορά πραγματοποιείται σε στερεό θρεπτικό μέσο χωρίς αντιβιοτικό από δοκιμαστικούς σωλήνες χωρίς ανάπτυξη. Το MBC θεωρείται ότι είναι η ελάχιστη συγκέντρωση αντιβιοτικού που προκαλεί το θάνατο του μικροοργανισμού, ο οποίος χαρακτηρίζεται από την απουσία ανάπτυξης σε τρυβλία Petri με θρεπτικό μέσο.

Μέθοδος σειριακής αραίωσης αντιβιοτικού σε μέσο άγαρ.Σε αυτή την περίπτωση, είναι δυνατό να ελεγχθεί η ευαισθησία πολλών καλλιεργειών μικροοργανισμών σε διαφορετικές συγκεντρώσεις ενός δεδομένου αντιβιοτικού σε ένα πείραμα. Διάφορες αραιώσεις του αντιβιοτικού παρασκευάζονται σε ένα αποστειρωμένο μέσο άγαρ. Για να γίνει αυτό, προσθέστε την απαιτούμενη ποσότητα του αρχικού αντιβιοτικού διαλύματος, ανακατέψτε καλά και αδειάστε σε αποστειρωμένα πιάτα Petri. Αφού σκληρύνει το άγαρ, ο πάτος του κυπέλλου χωρίζεται από έξω σε τομείς με μαρκαδόρο. Κάθε καλλιέργεια που μελετάται είναι ραβδωτό χρησιμοποιώντας έναν βακτηριολογικό βρόχο σε έναν συγκεκριμένο τομέα σε πιάτα με διαφορετικές συγκεντρώσεις του αντιβιοτικού. Σπορά των μελετημένων καλλιεργειών σε πλάκες με διαφορετικές συγκεντρώσειςΤο αντιβιοτικό μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας ένα απλικατέρ που σας επιτρέπει να εμβολιάζετε ταυτόχρονα 12-15 καλλιέργειες ανά φλιτζάνι. Στη συνέχεια τα πιάτα τοποθετούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία βέλτιστη για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των βακτηρίων που μελετώνται. Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη από την παρουσία ή την απουσία βακτηριακής ανάπτυξης σε σύγκριση με την ανάπτυξη στο μέσο στην πλάκα ελέγχου. Τα βακτήρια θεωρούνται ευαίσθητα στο αντιβιοτικό σε συγκέντρωση στην οποία η ανάπτυξή τους αναστέλλεται πλήρως.

Μέθοδος e-test.Αυτή η μέθοδος συνδυάζει τα πλεονεκτήματα της μεθόδου σειριακής αραίωσης και της μεθόδου του δίσκου. Αντί για δίσκους, χρησιμοποιούνται λωρίδες («χάρακες») διηθητικού χαρτιού εμποτισμένου με αντιβιοτικό και στη βάση της λωρίδας η συγκέντρωση του αντιβιοτικού θα είναι ελάχιστη και στην «κορυφή» - μέγιστη. Οι λωρίδες τοποθετούνται στην επιφάνεια του θρεπτικού άγαρ που έχει σπαρθεί με την καλλιέργεια που μελετάται. Εάν τα βακτήρια είναι ευαίσθητα στη δράση αυτό το φάρμακο, γύρω από τις περιοχές της λωρίδας που περιέχουν τις ανασταλτικές συγκεντρώσεις της, εμφανίζεται μια ελλειψοειδής ζώνη αναστολής ανάπτυξης. Η αριθμητική τιμή της συγκέντρωσης αντιβιοτικού στη βάση αυτής της ζώνης υποδεικνύει το MIC αυτού του αντιβιοτικού για μια δεδομένη καλλιέργεια.

ΝΑ ευαίσθητοςΑυτά περιλαμβάνουν στελέχη μικροοργανισμών των οποίων η ανάπτυξη αναστέλλεται σε συγκεντρώσεις του φαρμάκου που βρίσκονται στον ορό του αίματος του ασθενούς όταν χρησιμοποιούνται κανονικές δόσεις αντιβιοτικών.

ΝΑ μέτρια σταθερήπεριλαμβάνουν στελέχη που απαιτούν συγκεντρώσεις που δημιουργούνται στον ορό του αίματος κατά τη χορήγηση για την καταστολή της ανάπτυξης μέγιστες δόσειςφάρμακο.

Ανεκτόςείναι μικροοργανισμοί των οποίων η ανάπτυξη δεν καταστέλλεται από το φάρμακο σε συγκεντρώσεις που δημιουργούνται στον οργανισμό όταν χρησιμοποιούνται οι μέγιστες επιτρεπόμενες δόσεις.

Ερωτήσεις τεστ.

Ορίστε τον όρο «αντιβιοτικά». Οι κύριες ομάδες αντιβιοτικών, ανάλογα με τον τρόπο παρασκευής: φυσικά, ημισυνθετικά, συνθετικά. Ονομάστε τον επιστήμονα που ανέπτυξε τη θεωρία της χημειοθεραπείας. Ποιες ιδιότητες είναι καθοριστικές κατά την επιλογή ενός φαρμάκου χημειοθεραπείας; Ποιος είναι ο δείκτης χημειοθεραπείας, γράψτε τον τύπο του, ποιος πρέπει να είναι; Προσδιορίστε τα πρώτα αντισπειροχετικά φάρμακα. το πρώτο αντιβακτηριακό φάρμακο και το όνομα του επιστήμονα που το έλαβε. Ποια είναι τα ονόματα των Ρώσων επιστημόνων που ανακάλυψαν πρώτοι αντιβακτηριδιακές ιδιότητεςπράσινη μούχλα. Ονομάστε τον επιστήμονα που μελέτησε τις αντιβακτηριακές ιδιότητες του καλουπιού Penicillium και έκανε μια προσπάθεια να απομονώσει την πενικιλίνη. Επιστήμονες που έλαβαν για πρώτη φορά σκευάσματα πενικιλίνης. Παραγωγοί αντιβιοτικών - δώστε παραδείγματα. Ταξινόμηση των αντιβιοτικών κατά προέλευση, χημική σύνθεση, σύμφωνα με το φάσμα δράσης. Μηχανισμός δράσης αντιβιοτικών: στόχοι (σημεία εφαρμογής αντιβιοτικών διάφορες ομάδες). Τύποι δράσης - βακτηριοκτόνος και βακτηριοστατικός. πώς να τα προσδιορίσετε σε ένα πείραμα in vitro; Αντιιικά αντιβιοτικά, μηχανισμούς δράσης τους. Σε ποιες μονάδες μετράται η δράση των αντιβιοτικών; Συνθήκες αποθήκευσης αντιβιοτικών.

Ονομάστε και περιγράψτε πιθανές παρενέργειεςμε αντιβιοτική θεραπεία. Ορίστε την έννοια της «αντοχής των μικροβίων στα φάρμακα». Τύποι αντοχής στα φάρμακα. Φυσικό και επίκτητο (πρωτογενές και δευτερογενές). Γενετικοί μηχανισμοί αντοχής στα φάρμακα: χρωμοσωμικός και πλασμιδικός. Φαινοτυπικοί μηχανισμοί αντοχής στα φάρμακα - όνομα και χαρακτηριστικό. Ορθολογική χρήσηαντιβιοτικά - ονομάστε τις μεθόδους. Ονομάστε φάρμακα που είναι αναστολείς ενζύμων που καταστρέφουν τα αντιβιοτικά. Περιγράψτε μεθόδους για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των μικροβίων στα αντιβιοτικά.

Τα κριτήρια για την αντιμικροβιακή δράση του φαρμάκου είναι ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση(IPC) και ελάχιστη βακτηριοκτόνο συγκέντρωση(MBK). Το MIC είναι η χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικών που αναστέλλει πλήρως in vitro ορατός βακτηριακή ανάπτυξη. Εκφράζεται σε mg/l ή μg/ml. Το MBC είναι η χαμηλότερη συγκέντρωση αντιβιοτικού που προκαλεί βακτηριοκτόνο δράση. Για τον προσδιορισμό του, είναι απαραίτητο να εμβολιαστούν δοκιμαστικοί σωλήνες (οπτικά χωρίς ανάπτυξη) σε πυκνό θρεπτικό άγαρ που δεν περιέχει αντιβιοτικό. Αυτός ο δείκτης έχει μεγάλη κλινική σημασία. Με βάση τη μέθοδο της σειριακής αραίωσης, έχουν δημιουργηθεί μικρομέθοδοι που περιλαμβάνουν τη χρήση μικρότερου όγκου θρεπτικού μέσου. Επί του παρόντος, για τη διεξαγωγή αυτού του τύπου έρευνας, παράγονται πολυάριθμα εμπορικά κιτ, που αποτελούνται από αποξηραμένα σταθεροποιημένα αραιώματα αντιβιοτικών, τα οποία αραιώνονται με ένα εναιώρημα του εξεταζόμενου μικροβίου. Αυτά τα κιτ μπορούν να αποθηκευτούν υπό κανονικές συνθήκες, εξαλείφοντας την ανάγκη παρασκευής αραιώσεων μέσων και αντιβιοτικών στο εργαστήριο. Οι δοκιμές μικροαραίωσης έχουν επίσης το πλεονέκτημα ότι ενσωματώνονται σε ένα αυτοματοποιημένο σύστημα.

Με βάση τα δεδομένα που ελήφθησαν (διάμετρος ζώνης αναστολής ανάπτυξης ή τιμή MIC), οι μικροοργανισμοί χωρίζονται σε ευαίσθητους, μέτρια ανθεκτικούς και ανθεκτικούς. Για τη διάκριση μεταξύ αυτών των κατηγοριών, χρησιμοποιούνται οι λεγόμενες οριακές συγκεντρώσεις αντιβιοτικών, οι οποίες δεν είναι σταθερές τιμές. Αναθεωρούνται καθώς αλλάζει η ευαισθησία του μικροβιακού πληθυσμού. Η ανάπτυξη και αναθεώρηση των κριτηρίων ερμηνείας πραγματοποιείται από κορυφαίους ειδικούς (χημειοθεραπευτές, μικροβιολόγους) που είναι μέλη ειδικών επιτροπών. Ένα από αυτά είναι η Εθνική Επιτροπή Προτύπων Κλινικών Εργαστηρίων ( Νεθνικός ντοεπιτροπή για ντογραμμικός μεγάλοεργαστηριο μικρό tandards – NCCLS), που διοργανώθηκε στις Η.Π.Α. Επί του παρόντος, τα πρότυπα NCCLS χρησιμοποιούνται ως διεθνή πρότυπα για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων των δοκιμών βακτηριακής ευαισθησίας σε πολυκεντρικές μικροβιολογικές και κλινικές μελέτες.

Προσδιορισμός βακτηριακής ευαισθησίας στα αντιβιοτικά

Το κριτήριο για την ευαισθησία των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά είναι η ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση (MIC) ή η ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση (MIC) του αντιβιοτικού, η οποία αναστέλλει την ανάπτυξη του παθογόνου υπό τυπικές πειραματικές συνθήκες.

Για τον προσδιορισμό της αντοχής στο φάρμακο, χρησιμοποιείται μια καθημερινή καθαρή καλλιέργεια του παθογόνου που απομονώνεται από το σώμα του ασθενούς και ένα τυπικό θρεπτικό μέσο (AGV ή άγαρ Mueller-Hinton) για τον εμβολιασμό του.

Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιβιοτικά πραγματοποιείται με τη μέθοδο της διάχυσης με δίσκο ή τη μέθοδο των σειριακών αραιώσεων του αντιβιοτικού σε υγρά ή στερεά μέσα.

Μέθοδος διάχυσης δίσκου

Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας στα αντιβιοτικά με τη μέθοδο του χάρτινου δίσκου βασίζεται στη διάχυση του αντιβιοτικού στο θρεπτικό μέσο. Η συγκέντρωση των αντιβιοτικών στους δίσκους επιλέγεται με τέτοιο τρόπο ώστε οι διάμετροι των ζωνών αναστολής ανάπτυξης των τυπικών μικροοργανισμών δοκιμής να συμμορφώνονται με τα διεθνή πρότυπα. Αυτή η συγκέντρωση αντιστοιχεί στη μέση θεραπευτική δόση για τυπικά στελέχη μικροοργανισμών.

Το παρασκευασμένο εναιώρημα μικροοργανισμών ενοφθαλμίζεται στην επιφάνεια ενός ειδικού μέσου (AGV ή άγαρ Mueller-Hinton) σε τρυβλία Petri. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας αποστειρωμένα τσιμπιδάκια, τυποποιημένοι χάρτινοι δίσκοι εμποτισμένοι σε διαλύματα διαφόρων αντιβιοτικών τοποθετούνται στην εμβολιασμένη επιφάνεια σε ίση απόσταση μεταξύ τους, από τις άκρες και το κέντρο του κυπέλλου (μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν ειδικές συσκευές και διανομείς). Τα ενοφθαλμισμένα πιάτα διατηρούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία βέλτιστη για την ανάπτυξη των υπό μελέτη βακτηρίων. Εάν τα βακτήρια είναι ευαίσθητα σε αυτό το αντιβιοτικό, μια ζώνη αναστολής της ανάπτυξης θα σχηματιστεί γύρω από το δίσκο. Η διάμετρος της ζώνης αναστολής ανάπτυξης αντιστοιχεί στον βαθμό ευαισθησίας του υπό μελέτη μικροοργανισμού σε ένα δεδομένο αντιβιοτικό. Το τελικό αποτέλεσμα αξιολογείται με τη χρήση ειδικών πινάκων που υποδεικνύουν τις διαμέτρους των ζωνών αναστολής ανάπτυξης τυπικών καλλιεργειών, ευαίσθητων, ανθεκτικών και μετρίως ανθεκτικών.

Η μέθοδος δίσκου δεν παρέχει αξιόπιστα δεδομένα κατά τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των μικροοργανισμών σε πολυπεπτιδικά αντιβιοτικά που διαχέονται ελάχιστα στο άγαρ (για παράδειγμα, πολυμυξίνη, ριστομυκίνη). Επίσης, αυτή η μέθοδος δεν επιτρέπει τον προσδιορισμό της ελάχιστης ανασταλτικής συγκέντρωσης του αντιβιοτικού.